食源性蛋白酶抑制剂结构与功能 被引量：1

1

作者 张允萍 吴子健 李丹阳 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第10期198-205,共8页

食源性蛋白酶抑制剂(foodborne protease inhibitors,FPI)来源广泛,且种类繁多,研究分析这些FPI的特异性结构与其生理功能之间的关系具有十分重要的意义。该文首先综述蛋白酶抑制剂的来源、分类和作用机理;另外详细说明3种FPI(包括:Bowm... 食源性蛋白酶抑制剂(foodborne protease inhibitors,FPI)来源广泛,且种类繁多,研究分析这些FPI的特异性结构与其生理功能之间的关系具有十分重要的意义。该文首先综述蛋白酶抑制剂的来源、分类和作用机理;另外详细说明3种FPI(包括:Bowman-Birk型、Kunitz型以及Kazal型蛋白酶抑制剂等)命名的由来和其在结构上的区别,这些种类的FPI不仅可调节控制生物机体的蛋白质水解过程,同时还具有诸如调节机体防御、抗肿瘤、抗炎、抗凝血、预防肥胖等生理作用。 展开更多

关键词 蛋白酶抑制剂 Bowman-Birk型 Kunitz型 kazal型 结构 抑制活性

下载PDF 职称材料

Kazal型蛋白酶抑制剂结构与功能研究进展 被引量：7

2

作者 郑青亮 盛清 张耀洲 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期695-700,共6页

蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内,在许多生命活动过程中发挥必不可少的作用,特别是对蛋白酶活性进行精确调控。其中Kazal型蛋白酶抑制剂是最重要的、研究最为广泛的酶抑制剂之一,该类抑制剂一般由一个或几个结构域组成,每一个结构域具... 蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内,在许多生命活动过程中发挥必不可少的作用,特别是对蛋白酶活性进行精确调控。其中Kazal型蛋白酶抑制剂是最重要的、研究最为广泛的酶抑制剂之一,该类抑制剂一般由一个或几个结构域组成,每一个结构域具有保守的序列和分子构象,同时发现该类抑制剂与蛋白酶作用的结合部位高度易变,它们大多数暴露于与溶剂接触的环上,其中P1部位是抑制作用的关键部位,抑制剂的专一性由P1部位氨基酸残基的性质决定,其它残基取代结合部位残基对抑制剂-酶的结合常数有显著的影响。Laskowski算法可直接从Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的序列推测其与6种丝氨酸蛋白酶之间的抑制常数(Ki)。目前在生物体内发现大量的Kazal型蛋白酶抑制剂,并证实其有重要的生物学功能。 展开更多

关键词 kazal型蛋白酶抑制剂 Laskowski算法 活性部位

下载PDF 职称材料

家蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因BmSPI3的克隆与表达特征分析 被引量：5

3

作者 郑青亮 须苏菊 +2 位作者 周方平 吕正兵 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期496-502,共7页

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(C... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(Gen-Bank登录号:DN237641)。通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coliBL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36kD处有明显的蛋白表达条带。提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA进行荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低。推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用。 展开更多

关键词 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 家蚕 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR

下载PDF 职称材料

旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的表达及免疫相关性 被引量：5

4

作者 马静 李达 +5 位作者 孔令杰 刘畅 李爽 毛贻贤 杜娟 路义鑫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1284-1289,共6页

根据GenBank上旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KaSPI)基因编码序列设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,将所获PCR产物克隆至pEASY-T1载体后转入克隆感受态Tans5α,经过PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后进行测序。将所获目的基因与载体pET-3... 根据GenBank上旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KaSPI)基因编码序列设计特异性引物,进行RT-PCR扩增,将所获PCR产物克隆至pEASY-T1载体后转入克隆感受态Tans5α,经过PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后进行测序。将所获目的基因与载体pET-30a(+)相连接,然后将鉴定正确的重组表达质粒pET-TsKaSPI转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE电泳分析所得融合蛋白大小约为38 000,与预测蛋白理论值大小相符,主要以包涵体形式存在。对纯化后的重组蛋白进行Western blot鉴定,结果显示该蛋白可以被感染旋毛虫小鼠阳性血清所识别,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白经腹腔注射到小鼠体内检测其对小鼠的免疫保护性,结果表明,旋毛虫肌幼虫减虫率为38.3%。通过间接ELISA法检测血清抗体水平,结果显示重组蛋白免疫小鼠血清的抗重组蛋白抗体IgG总体水平显著高于感染对照组和佐剂组。 展开更多

关键词 旋毛虫 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 免疫保护性

原文传递

大翅蓟属植物提取物对皮肤屏障功能损伤的修复作用探讨 被引量：4

5

作者 陈俊杰 唐翠 +1 位作者 严明强 沈玲华 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2017年第3期193-196,共4页

目的观察大翅蓟属植物提取物对皮肤屏障相关蛋白的表达的影响,探讨其屏障修复作用。方法通过使用胶带黏贴的方法,对离体培养的皮肤造成皮肤屏障功能损伤模型,每隔2 d涂抹大翅蓟属植物提取物,7 d后评估损伤皮肤的淋巴上皮Kazal型相关抑... 目的观察大翅蓟属植物提取物对皮肤屏障相关蛋白的表达的影响,探讨其屏障修复作用。方法通过使用胶带黏贴的方法,对离体培养的皮肤造成皮肤屏障功能损伤模型,每隔2 d涂抹大翅蓟属植物提取物,7 d后评估损伤皮肤的淋巴上皮Kazal型相关抑制因子(Lympho-epithelial Kazal type related inhibitor,LEKTI),兜甲蛋白(Loricrin,LOR),内披蛋白(Involucrin,INV)丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)的表达情况。结果正常皮肤和受损皮肤的LEKTI,LOR,INV,FLG染色均有增强,受损皮肤增强更为明显。结论大翅蓟属植物提取物可以提高皮肤FLG、LOR、INV、LEKTI的表达,进而提高皮肤屏障功能。 展开更多

关键词 皮肤屏障 中间丝聚合蛋白 兜甲蛋白 外皮蛋白 淋巴上皮kazal型相关抑制因子

下载PDF 职称材料

丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型5基因多态性与儿童哮喘易感性及病情相关性研究

6

作者 张林 魏兵 +3 位作者 宋俊美 刘宁 曲双双 常艳丽 《临床军医杂志》 CAS 2024年第2期148-152,共5页

目的探讨丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型5(SPINK5)基因单核苷酸多态性(SNP)与儿童哮喘易感性及病情的关系。方法选取自2020年9月至2022年9月于北部战区总医院就诊的86例哮喘患儿设为哮喘组,再根据哮喘组患儿哮喘的严重程度将其分为轻度组(n=... 目的探讨丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型5(SPINK5)基因单核苷酸多态性(SNP)与儿童哮喘易感性及病情的关系。方法选取自2020年9月至2022年9月于北部战区总医院就诊的86例哮喘患儿设为哮喘组,再根据哮喘组患儿哮喘的严重程度将其分为轻度组(n=18)、中度组(n=32)及重度组(n=36);另选取同期在该医院体检的66例健康儿童设为健康组。应用imLDR多重单核苷酸多态性(SNP)分型技术,分析SPINK5基因rs17704908、rs2303067、rs3777134、rs4349706和rs6892205这5个位点的SNP、单倍型与儿童哮喘易感性及病情严重程度的关系。结果健康组和哮喘组SPINK5基因5个位点基因型频率和等位基因频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);轻、中、重度组SPINK5基因5个位点基因型及等位基因频率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。连锁不平衡分析结果显示,rs6892205与rs2303067、rs3777134、rs17704908和rs4349706四处位点有强连锁性,同时,rs2303067与rs3777134、rs17704908和rs4349706存在强连锁性。哮喘组和健康组的ACCGA、GTTAG、GTTAA、ACCGG、GCCGG和ATTAA这6种单倍型的频率分布比较,差异均有统计学意义(P=0.04);单倍型GTTAG罹患哮喘的风险比值比为2.20,95%可信区间1.03~4.70,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘轻、中、重度组的6种单倍型频率分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论SPINK5基因rs17704908、rs2303067、rs3777134、rs4349706和rs6892205位点SNP与儿童哮喘的易感性及病情无相关性,其构成的单倍型GTTAG是儿童罹患哮喘的高危因素。 展开更多

关键词 哮喘 丝氨酸肽酶抑制因子kazal型5基因 单核苷酸多态性 单倍型 儿童

下载PDF 职称材料

一种大规模制备双链RNA的简单方法及其在斑节对虾中的应用 被引量：3

7

作者 梁艳 Vanvimon Saksamerprome +1 位作者 Kallaya Sritunyalucksan 黄倢 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1011-1017,共7页

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的... RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)诱发的特异性沉默目的基因表达的过程,一种大规模制备双链RNA的方法可以便利RNAi技术的应用。以斑节对虾kazal型蛋白激酶抑制剂(KPI)基因为例,详细介绍了一种以体内载体表达大量制备dsRNA(>300nt)的方法。使用商业载体pGEMT和pDRIVE,以2步克隆法构建含有发夹环(hairpin loop)dsRNA表达载体,转化RNA酶Ⅲ缺陷的大肠杆菌HT115(DE3)进行体内转录制备dsRNA。构建的发夹RNA表达载体含有494bp的正向靶序列和403bp的反向互补靶序列,其中正向靶序列多出的91bp即可成为loop环,而无需再次克隆加入。培养30mL的细菌,即可得到1mg纯化的dsRNA,而其成本仅为使用商业化体外转录试剂盒的四分之一。为评估RNAi效果,按照每1克虾体肌肉注射2μg dsRNA的剂量,在dsRNA注射后0,6,12和24h采集血淋巴,RT-PCR检测KPI mRNA的基因转录水平。与对照组GFP-dsRNA和NaCl注射组相比,KPI-dsRNA注射组可以在24h内沉默血淋巴中的KPI基因。结果表明该方法是可大规模制备长的dsRNA的方法。 展开更多

关键词 斑节对虾 RNA干扰 双链RNA 体内转录 大肠杆菌HT115 kazal型蛋白激酶抑制剂

下载PDF 职称材料

SPINK7对IL-22介导的角质细胞异常增殖及炎症应答的影响 被引量：3

8

作者 张鼎伟 张燕飞 +4 位作者 汪炜 霍佳 杨珮雯 张钰汇 王媛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期26-30,共5页

目的:探讨SPINK7对IL-22刺激后角质形成细胞HaCaT的过度增殖及炎症应答的影响及其可能的机制。方法:采用IL-22刺激体外培养的HaCaT细胞。采用RT-PCR检测SPINK7和细胞炎症因子的mRNA表达;Western blot检测SPINK7,cyclin D1、survivin和W... 目的:探讨SPINK7对IL-22刺激后角质形成细胞HaCaT的过度增殖及炎症应答的影响及其可能的机制。方法:采用IL-22刺激体外培养的HaCaT细胞。采用RT-PCR检测SPINK7和细胞炎症因子的mRNA表达;Western blot检测SPINK7,cyclin D1、survivin和Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化;ELISA法检测上清液中IL-23、TNF-α和IL-17A的表达水平。结果:IL-22处理的HaCaT细胞中,SPINK7的mRNA和蛋白表达量均显著升高。此外,沉默SPINK7明显抑制IL-22诱导的细胞增殖,同时抑制凋亡相关蛋白cyclin D1及survivin的表达水平。SPINK7沉默显著降低IL-22刺激诱导的促炎性细胞因子IL-23、TNF-α和IL-17A的mRNA表达水平和分泌量。机制研究发现SPINK7沉默能够抑制IL-22激活的Wnt/β-catenin信号通路。结论:沉默SPINK7能够抑制IL-22诱导的细胞增殖和炎症应答反应,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关,这为银屑病的诊断提供了新的标志物和治疗靶点。 展开更多

关键词 银屑病 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子7(SPINK7) 异常增殖 炎症应答

下载PDF 职称材料

丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型1对肝癌细胞增殖的影响及其机制

9

作者 赵卫明 李晓 +2 位作者 余国营 王改平 常翠芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期695-702,共8页

目的探讨丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型1(SPINK1)对肝癌细胞RH-35增殖的影响及其分子机制。方法利用基因表达综合(GEO)数据库分析Spink1基因在肝癌患者和大鼠肝癌模型中的表达,用重组大鼠SPINK1蛋白(rrSPINK1)处理RH-35细胞,采用MTT、流式... 目的探讨丝氨酸肽酶抑制因子Kazal型1(SPINK1)对肝癌细胞RH-35增殖的影响及其分子机制。方法利用基因表达综合(GEO)数据库分析Spink1基因在肝癌患者和大鼠肝癌模型中的表达,用重组大鼠SPINK1蛋白(rrSPINK1)处理RH-35细胞,采用MTT、流式细胞术、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)等方法检测SPINK1对RH-35细胞增殖的影响,Real-time PCR和Western blotting检测SPINK1信号通路、细胞增殖和凋亡相关基因的表达。结果SPINK1在肝癌和大鼠肝癌模型中显著高表达;与对照组相比,rrSPINK1处理的RH-35细胞活力,EdU阳性细胞率,S期和G_2/M期细胞比例明显增加;而RH-35细胞凋亡无显著变化;rrSPINK1上调RH-35细胞中p38 MAPK和STAT信号通路相关基因/蛋白的表达;并且在肝癌中Spink1基因的表达与Mapk13、Stat1和Stat3基因正相关。结论SPINK1促进肝癌细胞中p38 MAPK和Janus激酶/信号转导及转录激活因子(JAK/STAT)的表达,促进肝癌细胞的增殖。 展开更多

关键词 丝氨酸肽酶抑制因子kazal型1 肝癌 细胞增殖 流式细胞术 人 大鼠

下载PDF 职称材料

丙种球蛋白治疗Netherton综合征一例并文献复习

10

作者 任韵清 刘吉鹏 +1 位作者 郭小璇 李明 《实用皮肤病学杂志》 2023年第3期180-182,188,共4页

4岁2个月龄男性患儿,全身红斑、脱屑伴瘙痒4年余。皮肤镜示:头发呈竹节状改变。血清IgE升高(>1140.0 IU/ml),嗜酸粒细胞百分比升高(35.0%)。基因检测提示患儿SPINK5基因第24号外显子携带c.A2260T(p.K754^(*))和第26号外显子c.2459del... 4岁2个月龄男性患儿,全身红斑、脱屑伴瘙痒4年余。皮肤镜示:头发呈竹节状改变。血清IgE升高(>1140.0 IU/ml),嗜酸粒细胞百分比升高(35.0%)。基因检测提示患儿SPINK5基因第24号外显子携带c.A2260T(p.K754^(*))和第26号外显子c.2459delA(p.E820fs)复合杂合突变,其中c.A2260T突变遗传自母亲,c.2459delA突变遗传自父亲。诊断:Netherton综合征。治疗:给予丙种球蛋白7.5g静脉注射,每月1次,共3次,治疗期间红斑、鳞屑消退,瘙痒显著改善。随访6个月,停药1个月后皮损有反复,但可自行缓解。 展开更多

关键词 Netherton综合征 基因 丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型5 突变

下载PDF 职称材料

人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子抗肿瘤作用研究进展

11

作者 冯洁 伦永志 《大连大学学报》 2012年第3期48-52,共5页

围绕人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的结构、主要成员及其抗肿瘤作用做一综述。Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子在机体内发挥重要的生理作用,具有广泛的研究和应用价值。它们在各种肿瘤中有着或高或低的表达,与肿瘤发生、发展相关,可能成... 围绕人Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子的结构、主要成员及其抗肿瘤作用做一综述。Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子在机体内发挥重要的生理作用,具有广泛的研究和应用价值。它们在各种肿瘤中有着或高或低的表达,与肿瘤发生、发展相关,可能成为肿瘤治疗的新标靶。 展开更多

关键词 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子 结构 抗肿瘤作用

下载PDF 职称材料

中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal)的重组表达及活性分析

12

作者 黄明 刘逸尘 +2 位作者 张亦陈 孙妍 孙金生 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1310-1319,共10页

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂可以通过精确调控丝氨酸蛋白酶的活力,在生物体的防御应答等众多生物过程中发挥重要作用。以前期克隆的中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal,GenBank注册号为DQ318856)为基础,对其功能结构域进... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂可以通过精确调控丝氨酸蛋白酶的活力,在生物体的防御应答等众多生物过程中发挥重要作用。以前期克隆的中国明对虾Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因(Fc-Kazal,GenBank注册号为DQ318856)为基础,对其功能结构域进行序列比对和进化分析;组织表达分析结果表明,该基因在血细胞、鳃和淋巴器官等组织中高水平表达,而在眼柄、神经和肌肉中无表达;利用原核表达系统对该基因成熟肽区域成功进行了重组表达,纯化后的目的蛋白最终得率为0.4 g/L培养液;活性分析结果显示,复性后的rFc-Kazal对鳗弧菌、金黄色葡萄球菌、杀鲑气单胞菌、苏云金芽孢杆菌有明显的抑菌作用。 展开更多

关键词 中国明对虾 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 先天免疫 重组表达 抑菌活性

下载PDF 职称材料

SPINK3促进体外培养的原代大鼠肝细胞增殖

13

作者 常翠芳 罗亚茹 +7 位作者 郗玲玲 杨婧 郭建林 王改平 李青青 王雪 郭萃 徐存拴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1280-1288,共9页

肝病是威胁人类健康的主要疾病之一,而肝具有强大的再生能力,因此开发肝再生的药物靶标对肝病防治具有重大意义。本室前期采用大鼠全基因组芯片检测发现,丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ(serine protease inhibitor Kazal typeⅢ,SPINK3)... 肝病是威胁人类健康的主要疾病之一,而肝具有强大的再生能力,因此开发肝再生的药物靶标对肝病防治具有重大意义。本室前期采用大鼠全基因组芯片检测发现,丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型Ⅲ(serine protease inhibitor Kazal typeⅢ,SPINK3)在大鼠肝再生中表达显著改变。研究表明,SPINK3是一类结构与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)相似的生长因子,能够与表皮生长因子受体(EGFR)结合促进细胞增殖。本文通过基因过表达和干涉的方法处理原代大鼠肝细胞,通过CCK8法、Ki67免疫荧光法、PI单染法和Annexin V/PI双染法检测SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞活力、增殖、周期和凋亡的影响。结果显示SPINK3过表达时能够显著提高原代大鼠肝细胞的细胞活力,促进其细胞周期和增殖,并抑制其细胞凋亡,而干涉SPINK3表达则显著降低原代大鼠肝细胞的细胞活力,抑制其细胞周期和增殖,并促进其细胞凋亡。以上结果表明,SPINK3能够促进体外培养的原代大鼠肝细胞的增殖,并抑制其凋亡。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型Ⅲ 原代大鼠肝细胞 细胞周期 细胞凋亡

下载PDF 职称材料

应用dsRNA干扰技术对旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因功能的初步研究

14

作者 于鹏成 刘畅 +7 位作者 吴丽佳 伊娜娜 孙益春 张金鹏 魏雅婷 杨莹 庞紫璇 路义鑫 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期589-595,共7页

为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活... 为研究旋毛虫Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的功能,通过电转法将dsRNA导入旋毛虫体内,应用实时荧光定量PCR和Western-blot检测经dsRNA-TsKaSPI电转法处理后肌幼虫TsKaSPI基因转录和表达水平。体外培养观察TsKaSPI基因沉默对肌幼虫存活的影响。将dsRNA导入后的幼虫经口接种小鼠,观察TsKaSPI基因沉默对幼虫存活、发育及雌虫生殖力的影响。实时荧光定量PCR和Western-blot检测结果显示,旋毛虫肌幼虫经30μg/mL dsRNA电转处理后TsKaSPI基因的转录和表达分别降低63.36%和69.24%(P<0.05)。TsKaSPI基因在dsRNA-TsKaSPI转入肌幼虫后第1天转录水平明显降低,第2和第3天仍处于较低的水平。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的肌幼虫死亡率分别为61%、58%、52%(P>0.05)。将dsRNA电转处理的肌幼虫接种小鼠后6 d肠道成虫和35 d肌幼虫的减虫率分别为36.22%和31.87%。PBS组、dseGFP对照组和dsRNA-TsKaSPI处理组的感染小鼠收集到的雌虫新生幼虫量分别为49.20±5.93、49.40±4.62、50.80±4.32(P>0.05)。结果表明,dsRNA可明显抑制Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的转录和表达及幼虫在小鼠体内的存活和发育。 展开更多

关键词 旋毛虫 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 DSRNA

原文传递

过表达SPINK5对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

15

作者 朱丽娜 王勇 朱月华 《山东医药》 CAS 2019年第31期51-54,共4页

目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型5(SPINK5)在宫颈癌组织中的差异表达及其过表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法基于GEO数据库获取宫颈癌基因表达芯片GSE9750数据集,通过蛋白互作网络分析筛选出关键差异表达基因SPINK5。采... 目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型5(SPINK5)在宫颈癌组织中的差异表达及其过表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法基于GEO数据库获取宫颈癌基因表达芯片GSE9750数据集,通过蛋白互作网络分析筛选出关键差异表达基因SPINK5。采用PCDNA3.1-SPINK5、PCDNA3.1-NC慢病毒稳定转染宫颈癌HeLa细胞,采用实时荧光定量PCR法、Western blotting法鉴定转染效率。取上述转染细胞,分别记为观察组和对照组,采用MTT法检测细胞增殖活性,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果在GSE9750数据集中共筛选出665个差异表达基因,蛋白互作网络分析确定宫颈癌组织SPINK5低表达。观察组SPINK5 mRNA和蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05)。观察组培养48、72 h时细胞增殖活性明显低于对照组(P均<0.05);观察组细胞凋亡率明显高于对照组,细胞侵袭能力明显低于对照组(P均<0.05)。结论SPINK5在宫颈癌组织中低表达;过表达SPINK5能够抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭并促进其凋亡。 展开更多

关键词 宫颈癌 丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型5 恶性生物学行为

下载PDF 职称材料

SPINK家族成员在肿瘤发病中的研究进展 被引量：1

16

作者 胡榜利 利基林 谢明智 《微创医学》 2019年第2期179-181,共3页

丝氨酸蛋白酶抑制物Kazal型(SPINK)家族参与多种疾病的发生、发展过程,其中SPINK1、SPINK2、SPINK5、SPINK6、SPINK7、SPINK8在肿瘤中的作用报道较多。本文对上述SPINK家族成员在肿瘤发病中的作用进行综述。

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制物kazal型 肿瘤 综述

下载PDF 职称材料

人新基因SPINK13的克隆和表达分析

17

作者 沈佳怡 何四明 +2 位作者 王艺潼 吴紫薇 吴志宏 《浙江科技学院学报》 CAS 2023年第1期7-13,共7页

丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型(serine protease inhibitors Kazal-type, SPINKs)能够调控激肽释放酶相关蛋白酶(kallikrein-related peptidases, KLKs)的活性,与皮肤炎症相关疾病密切相关。SPINK5基因的功能缺失会导致内瑟顿综合征的发生... 丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型(serine protease inhibitors Kazal-type, SPINKs)能够调控激肽释放酶相关蛋白酶(kallikrein-related peptidases, KLKs)的活性,与皮肤炎症相关疾病密切相关。SPINK5基因的功能缺失会导致内瑟顿综合征的发生。【目的】为深入了解SPINKs在皮肤屏障功能中的作用,采用生物学手段对其进行探究。【方法】采用互补脱氧核糖核酸(complementary deoxyribonucleic acid, cDNA)末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)及结合生物信息学获得全长序列,再通过逆转录聚合酶链式反应技术(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)分析基因在不同组织的表达情况。【结果】发现了一个SPINKs新成员,即SPINK13(在核苷酸序列数据库(GenBank)登记号为OM275352)。SPINK13含有1个典型的Kazal功能单元,在肺部组织中高度表达,在皮肤和结肠中也有表达;在皮肤中,角质形成细胞是产生SPINK13的源泉;在皮肤肿瘤患者中,SPINK13的表达异常,在癌前病变患者皮肤中表达不编码蛋白的剪接体SPINK13-v3(在GenBank登记号为OM275354),而在鳞状细胞癌和基底细胞癌患者皮肤中表达不编码蛋白的剪接体SPINK13-v2(在GenBank登记号为OM275353)。【结论】SPINK13基因与皮肤肿瘤发生发展有一定的相关性,新发现的剪接体SPINK13-v2和SPINK13-v3有望成为诊断皮肤肿瘤的标志物。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型13 角质形成细胞 皮肤肿瘤

下载PDF 职称材料

人源SPINK6在大肠杆菌中的表达优化 被引量：1

18

作者 郑戎秉 李旦 +2 位作者 沈佳怡 Ulf Meyer-Hoffert 吴志宏 《浙江科技学院学报》 CAS 2020年第6期516-522,共7页

丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达... 丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal型6(serine protease inhibitor Kazal-type 6,SPINK6)蛋白是医学上的重要蛋白。为了高效制备具有生物活性的SPINK6蛋白,使用大肠杆菌表达系统重组表达SPINK6蛋白,经过纯化和酶切后测定了其生物活性,并对其表达条件进行了优化。结果表明,飞行时间质谱测得产物的分子量为6061.51 Da,通过此法成功制备获得了重组SPINK6蛋白,并且重组SPINK6蛋白对激肽释放酶相关肽酶5(kallikrein-related peptidase 5,KLK5)(K i=3.02±0.26 nmol/L)和KLK14(K i=1.85±0.05 nmol/L)有较强的抑制作用,具有生物活性。采用pE-SUMO3质粒为载体,在菌体OD 600=0.4时加入1 mmol/L异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达3 h,重组SPINK6蛋白获得最大表达量,1 L培养液中获得重组SPINK63.32 mg。研究结果可为SPINK6蛋白功能及应用研究提供操作性强的制备方法和稳定的蛋白来源。 展开更多

关键词 丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal型6 激肽释放酶相关肽酶 重组表达

下载PDF 职称材料

运用SPINK5突变分析对致死型Netherton综合征的产前诊断

19

作者 黄峥 《国外医学（计划生育分册）》 2003年第3期188-189,共2页

Netherton综合征(NS)是一种严重的常染色体隐性遗传角化病。它包括临床三联征:先天性干皮病,内折性脆发症(TI)及异位表现(如异位皮炎,高热,血管性水肿,荨麻疹,血清IgE升高及嗜红细胞增多症)。由于致命并发症如高钠性脱水,支气管肺炎及... Netherton综合征(NS)是一种严重的常染色体隐性遗传角化病。它包括临床三联征:先天性干皮病,内折性脆发症(TI)及异位表现(如异位皮炎,高热,血管性水肿,荨麻疹,血清IgE升高及嗜红细胞增多症)。由于致命并发症如高钠性脱水,支气管肺炎及脓毒血症的出现使该病死亡率极高,因而预后极差且至今无特效治疗。最新发现。 展开更多

关键词 Netherton综合征 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子5 基因突变 产前诊断

下载PDF 职称材料

三角帆蚌KSPI cDNA的分子特征及表达分析

20

作者 徐龙威 王芹 +1 位作者 汪桂玲 李家乐 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第4期10-14,共5页

Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(KSPI)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但在三角帆蚌中尚未进行其相关研究与报道,为研究KSPI对三角帆蚌免疫过程的影响,采用RACE法克隆了三角帆蚌KSPI c DNA全序列(登录号:KT901291),获得了1029 b... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制因子(KSPI)在生物体的免疫应答过程中发挥着重要作用,但在三角帆蚌中尚未进行其相关研究与报道,为研究KSPI对三角帆蚌免疫过程的影响,采用RACE法克隆了三角帆蚌KSPI c DNA全序列(登录号:KT901291),获得了1029 bp的全长,其中包含5'、3'端非翻译区分别为61 bp、206 bp,开放阅读框762bp,共编码氨基酸253个,分子质量为27 397.5 u,氨基酸序列包含5个Kazal结构域,与一些已知物种的KSPI编码的氨基酸序列进行同源性分析后发现,与各种物种间具有相似的结构域,属于典型的KSPI。实时荧光定量PCR分析结果表明KSPI在外套膜、血液、肝、腮、闭壳肌、性腺、斧足7个组织中均存在一定的表达量,表达量最高的是外套膜,表达量最低的是肝脏。利用嗜水气单胞菌诱导后检测发现,各个组织呈现出先升高再降低的趋势,在12或24 h达到最大值,之后开始逐渐下降并趋于稳定,推测出KSPI对三角帆蚌的免疫反应发挥重要作用。 展开更多

关键词 三角帆蚌 kazal型丝氨酸蛋白酶抑制子基因 RACE克隆 荧光定量

下载PDF 职称材料