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人Kai-1基因真核表达载体的构建及其体外表达
被引量：
2
1
作者
张健
吕飒美
+5 位作者
赵素平
党珊
何小勤
陈倩
易默
史丽萍
《科学技术与工程》
北大核心
2014年第33期16-19,共4页
克隆人Kai-1基因,构建其真核表达载体,并在体外细胞系中进行表达验证。提取人正常肝细胞系HL7702的总RNA,通过RT-PCR其反转录为c DNA;以该c DNA为模板,通过PCR扩增出Kai-1基因的编码区,将该目的片段纯化后亚克隆入真核表达载体pc DNA3.1...
克隆人Kai-1基因,构建其真核表达载体,并在体外细胞系中进行表达验证。提取人正常肝细胞系HL7702的总RNA,通过RT-PCR其反转录为c DNA;以该c DNA为模板,通过PCR扩增出Kai-1基因的编码区,将该目的片段纯化后亚克隆入真核表达载体pc DNA3.1myc-his(-)中,利用菌落PCR及DNA测序分别对Kai-1基因编码区的大小及序列进行鉴定。将所构建的重组质粒通过脂质体瞬时转染Hela细胞,48 h后裂解细胞,利用Western blot检测有无目的蛋白的表达。测序证实所克隆的Kai-1编码区c DNA正确地插入pc DNA3.1myc-his(-)中,经Western blot检测证实其在Hela细胞中得到表达。成功克隆了人Kai-1 c DNA,构建了其真核表达载体,并在Hela细胞中得到有效表达,为进一步研究Kai-1的功能奠定了基础。
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关键词
kai
-
1
真核表达
克隆
cdna
下载PDF
职称材料
题名
人Kai-1基因真核表达载体的构建及其体外表达
被引量：
2
1
作者
张健
吕飒美
赵素平
党珊
何小勤
陈倩
易默
史丽萍
机构
陕西省人民医院消化内二科
出处
《科学技术与工程》
北大核心
2014年第33期16-19,共4页
文摘
克隆人Kai-1基因,构建其真核表达载体,并在体外细胞系中进行表达验证。提取人正常肝细胞系HL7702的总RNA,通过RT-PCR其反转录为c DNA;以该c DNA为模板,通过PCR扩增出Kai-1基因的编码区,将该目的片段纯化后亚克隆入真核表达载体pc DNA3.1myc-his(-)中,利用菌落PCR及DNA测序分别对Kai-1基因编码区的大小及序列进行鉴定。将所构建的重组质粒通过脂质体瞬时转染Hela细胞,48 h后裂解细胞,利用Western blot检测有无目的蛋白的表达。测序证实所克隆的Kai-1编码区c DNA正确地插入pc DNA3.1myc-his(-)中,经Western blot检测证实其在Hela细胞中得到表达。成功克隆了人Kai-1 c DNA,构建了其真核表达载体,并在Hela细胞中得到有效表达,为进一步研究Kai-1的功能奠定了基础。
关键词
kai
-
1
真核表达
克隆
cdna
Keywords
kai
-1
eukaryotic
expression
clone
cdna
分类号
R318.04 [医药卫生—生物医学工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人Kai-1基因真核表达载体的构建及其体外表达
张健
吕飒美
赵素平
党珊
何小勤
陈倩
易默
史丽萍
《科学技术与工程》
北大核心
2014
2
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参考文献
引证文献
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