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山羊痘病毒毒力因子KLP2的表达及多克隆抗体的制备 被引量：3
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作者 李金娜 宋书婷 +3 位作者 陈宏伟 刘涛 赵爱云 李有文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期2851-2857,共7页
为了研究羊痘病毒(capripox virus),制备其毒力因子KLP2的多克隆抗体,试验采用基因同源重组的方法分别构建了羊痘病毒两个结构域(KLP2-1和KLP2-2)的原核表达载体并进行测序鉴定。提取质粒后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并用IPTG诱导表达... 为了研究羊痘病毒(capripox virus),制备其毒力因子KLP2的多克隆抗体,试验采用基因同源重组的方法分别构建了羊痘病毒两个结构域(KLP2-1和KLP2-2)的原核表达载体并进行测序鉴定。提取质粒后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并用IPTG诱导表达,目的蛋白采用SDS-PAGE和Western blotting检测,并用KCl染色切胶纯化,纯化蛋白加弗氏佐剂免疫家兔,制备的抗体用Western blotting和ELISA检测评价。结果表明,试验成功构建了表达载体p ET42b-KLP2-1和p ET42b-KLP2-2,测序结果显示KLP2-1和KLP2-2基因大小分别为657和984 bp,分别表达了约27和38 ku的蛋白,与理论值相符。切胶纯化的蛋白浓度在1~2 mg/m L之间,制备的抗体用Western blotting检测发现,蛋白有明显的特异条带,ELISA检测抗体的效价均为1∶512。说明试验成功表达了KLP2-1、KLP2-2蛋白,制备了相应的多克隆抗体。 展开更多
关键词 羊痘病毒 klp2基因 蛋白表达 抗体制备
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