Klf4的功能研究进展 被引量：7

1

作者 孙雪萍 曹鸿国 +1 位作者 张运海 刘亚 《生命科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期383-387,共5页

Klf4作为真核生物转录因子,参与调控细胞增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程,是体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS细胞)的重要诱导因子之一。本文综述了Klf4在细胞增殖、分化、肿瘤发生、皮肤屏障、热休克及iPS细胞诱导等方面的研究进... Klf4作为真核生物转录因子,参与调控细胞增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程,是体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS细胞)的重要诱导因子之一。本文综述了Klf4在细胞增殖、分化、肿瘤发生、皮肤屏障、热休克及iPS细胞诱导等方面的研究进展,为深入研究Klf4在重编程中的作用机制和功能提供参考。 展开更多

关键词 klf4 基因结构 IPS细胞 功能

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微小RNA-7-5p靶向调节锌指蛋白核转录因子4基因抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖和诱导凋亡的体外研究 被引量：7

2

作者 尚念红 《安徽医药》 CAS 2021年第12期2470-2474,共5页

目的探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响。方法研究起止时间为2018年3-10月。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF... 目的探讨微小RNA(miR)-7-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及锌指蛋白核转录因子4(KLF4)基因表达调控的影响。方法研究起止时间为2018年3-10月。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-7-5p在人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF及口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量。将miR-7-5p模拟物(miR-7-5p mimics)及阴性对照序列(mimics Control)分别转染至SCC25细胞,分为三组:Control组(未转染的SCC25细胞)、NC组(转染mimics Con-trol的SCC25细胞)、miR-7-5p组(转染miR-7-5p mimics的SCC25细胞)。以qRT-PCR检测miR-7-5p在SCC25细胞中的转染效果;MTT法检测miR-7-5p对SCC25细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-7-5p对SCC25细胞凋亡的影响;通过双荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和蛋白质印迹法(Western blotting)检测miR-7-5p对KLF4的靶向关系。结果miR-7-5p在3种口腔鳞状细胞癌细胞SCC25、Cal127和Tca8113中的表达量[(0.21±0.02)、(0.43±0.04)、(0.48±0.05)]明显低于人正常口腔黏膜成纤维细胞hOMF(1.00±0.09)(P<0.05);转染miR-7-5p mimics能够上调SCC25细胞中miR-7-5p的表达(P<0.05);miR-7-5p过表达能够明显抑制SCC25细胞增殖能力[Control组、NC组72 h吸光度(1.43±0.13)、(1.46±0.15)比miR-7-5p组(0.81±0.09)](P<0.05),并诱导细胞凋亡[Control组、NC组凋亡率(9.48±2.65)%、(10.21±3.02)%比miR-7-5p组(24.41±8.15)%](P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-7-5p过表达可抑制KLF4-Wt报告基因载体细胞相对荧光活性;qRT-PCR和Western blotting进一步证实了miR-7-5p能够靶向调节KLF4 mRNA和蛋白表达。结论miR-7-5p直接靶向调控KLF4基因的表达来抑制口腔鳞状细胞癌SCC25细胞增殖,诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 口腔肿瘤 癌 鳞状细胞 微小RNA-7-5p 锌指蛋白核转录因子4基因 增殖 凋亡

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下调转录因子KLF4抑制前列腺癌细胞上皮-间质转化及细胞迁移和侵袭 被引量：5

3

作者 魏莲子 方煜翔 高维强 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期466-473,共8页

目的:探讨下调Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF 4)对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:构建稳定敲降KLF 4的前列腺癌LNCaP-shKLF4细胞和对照组L... 目的:探讨下调Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF 4)对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:构建稳定敲降KLF 4的前列腺癌LNCaP-shKLF4细胞和对照组LNCaP-con细胞。应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测LNCaPshKLF4和LNCaP-con细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,以及稳定敲降KLF 4的前列腺癌PC3-shKLF4细胞、对照组PC3-con细胞、LNCaPcon细胞和LNCaP-shKLF4细胞中EMT相关分子mRNA和蛋白的表达。Transwell小室法检测PC3-con、PC3-shKLF4、LNCaP-con和LNCaPshKLF4细胞的迁移及侵袭能力。结果:成功构建LNCaP-shKLF4和对照组LNCaP-con细胞。LNCaPshKLF4细胞中KLF4 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组LNCaP-con细胞(P<0.01,P<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)mRNA的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.01),而PC3-shKLF4和LNCaPshKLF4细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)、锌指E-盒结合同源异体框1(Zinc finger E-box-binding homeobox 1,Zeb1)、Snail1、波形蛋白(vimentin,Vim)和基质金属蛋白酶1(matrix metallopeptidase 1,MMP1)mRNA的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-cad的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05),而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-cad、Zeb1、Snail1、Vim和MMP1蛋白的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均<0.05)。PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞的迁移和侵袭能力均分别低于对照组PC3-con和LNCaP-con细胞(P<0.01,P<0.05)。结论:下调前列腺癌细胞中KLF4表达可促进上皮相关基因的表达,抑制间质相关基因的表达,从而在体外抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 上皮-间质转化 细胞迁移分析 肿瘤侵润 klf4基因

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基于CRISPR/Cas9技术构建猪KLF4基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析

4

作者 董娇 陆繁 +3 位作者 方晓敏 陈瑜哲 包文斌 王海飞 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期893-902,共10页

【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(... 【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3),经退火形成的双链DNA与线性化pGK1.1载体连接,产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞进行鉴定,并将重组载体转染至猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)。PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sgRNA敲除效率;利用CruiserTMEnzyme酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中KLF4蛋白表达情况。利用CCK-8和流式细胞术检测KLF4基因敲除后细胞活性和细胞周期的变化。【结果】重组载体测序结果显示,sgRNAs与pGK1.1成功连接。分析敲除效率发现,3个sgRNAs均可对靶序列进行敲除,其中sgRNA3有较高的敲除效率。PCR产物经CruiserTMEnzyme酶切筛选出2个阳性单克隆细胞。TA克隆测序分析发现,KLF4基因2个等位基因序列分别缺失116和137 bp。Western blotting结果表明,KLF4基因敲除细胞中未见KLF4蛋白表达。细胞活性及细胞周期分析显示,敲除KLF4基因极显著抑制了细胞活性(P<0.01),并导致G0/S细胞周期阻滞。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞,且KLF4基因敲除可抑制细胞活性,并引起G0/S细胞周期阻滞。KLF4基因敲除细胞可为进一步探究KLF4基因功能及分子机制提供材料。 展开更多

关键词 猪 klf4基因 CRISPR/Cas9技术 细胞活性 细胞周期

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KLF4 与上皮间质转化的关系在肿瘤中的研究进展 被引量：4

5

作者 司书遥 李春鸣 梁娜 《遵义医科大学学报》 2022年第2期266-269,共4页

KLF4(Krüppel-like factor 4)是一种锌指蛋白转录因子,KLFs家族的重要成员之一。KLF4参与肿瘤的发生、发展及侵袭转移过程。上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞通过特定程序转化为具有侵袭性和迁移性... KLF4(Krüppel-like factor 4)是一种锌指蛋白转录因子,KLFs家族的重要成员之一。KLF4参与肿瘤的发生、发展及侵袭转移过程。上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞通过特定程序转化为具有侵袭性和迁移性间质表型细胞的可逆生物学过程,尤其在促进肿瘤侵袭转移中有重要作用。近来研究发现,KLF4能激活上皮肿瘤相关标记物表达,同时抑制间质肿瘤相关标记物表达,逆转EMT过程进而抑制癌细胞的侵袭和转移。本文对KLF4与EMT的关系在肿瘤中的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 klf4基因 上皮间质转化 肿瘤转移

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KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达及临床意义 被引量：1

6

作者 李凡 杨雄 +1 位作者 杨丽丽 刘述成 《临床泌尿外科杂志》 2014年第7期593-595,600,共4页

目的:观察KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达,并探讨其对膀胱癌发生、发展的影响。方法:采用实时定量荧光PCR技术检测49例膀胱癌手术切除标本癌组织与25例正常膀胱上皮组织内KLF4、KLF6mRNA的表达,并分析其与患者临床病理特征... 目的:观察KLF4、KLF6在人膀胱移行上皮癌组织中的表达,并探讨其对膀胱癌发生、发展的影响。方法:采用实时定量荧光PCR技术检测49例膀胱癌手术切除标本癌组织与25例正常膀胱上皮组织内KLF4、KLF6mRNA的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系,采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果:实时定量荧光PCR结果显示KLF4在膀胱移行上皮癌组织中的相对含量为(0.218±0.046),在膀胱正常上皮组织中的相对含量为(0.311±0.056),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。KLF6在膀胱移行上皮癌组织中的相对含量为(0.198±0.038),在膀胱正常上皮组织中的相对含量为(0.285±0.043),差异有统计学意义(P<0.05)。膀胱移行上皮癌组织中,KLF4与肿瘤的组织学分级、TNM分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者的性别、年龄无关(P>0.05);而KLF6表达与肿瘤的TNM分期有关(P<0.05),与肿瘤组织学分级、淋巴结转移及患者的年龄性别均无关(P>0.05)。结论:KLF4和KLF6表达降低可能与膀胱移行上皮癌的发生和浸润密切相关,通过干预KLF4和KLF6的活性可能成为治疗膀胱移行上皮癌的新靶点。 展开更多

关键词 膀胱移行上皮癌 klf4基因 klf6基因 实时定量荧光PCR

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KLF4过表达对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响 被引量：2

7

作者 刘梅冬 刘瑛 +2 位作者 刘俊文 张华莉 肖献忠 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1002-1006,共5页

目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采... 目的:探讨Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,KLF4)对热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法:构建pcDNA3.1-KLF4真核表达质粒,采用脂质体转染法建立KLF4过表达Raw264.7巨噬细胞株,用免疫印迹法检测KLF4的过表达,采用热应激(42℃)处理稳定表达小鼠KLF4基因的Raw264.7巨噬细胞1h,37℃恢复12h,采用流式细胞术、Hoechest33258染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:获得了KLF4过表达的Raw264.7细胞株,流式细胞术结果显示,转空载体组和KLF4过表达组细胞凋亡百分率较热应激前均升高,但与转空载体组相比较KLF4过表达组升高更明显;荧光染色可见细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学改变;KLF4过表达细胞琼脂糖凝胶电泳能检测到明显的DNA"梯状条带"。结论:KLF4可以促进热应激所致Raw264.7巨噬细胞凋亡。 展开更多

关键词 klf4 基因转染 RAW264.7细胞 细胞凋亡 热应激

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一种肺血管基因敲减动物模型的构建及在肺动脉高压中的运用 被引量：1

8

作者 罗志梅 刘虹延 孙得胜 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期404-409,共6页

目的 探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法 根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然... 目的 探讨经大鼠的气道注入1型腺相关病毒(AAV1)携带的KLF4-shRNA能否有效构建肺血管基因敲减动物模型以及其在肺动脉高压中的运用。方法 根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,并以细胞计数和细胞迁移实验加以验证,然后进一步构建AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体。将44只清洁级SD大鼠随机分为4组:健康对照组、盐水模型组、对照病毒载体组、基因敲减组。后3组大鼠分别气管内注入生理盐水(盐水模型组)、AAV1-control vector(对照病毒载体组)、AAV1-KLF4-shRNA(基因敲减组)。1个月后对后3组进行烟熏造模,烟熏4个月后麻醉各组大鼠,分别检测右心室收缩压和平均右心室压,并取肺组织以免疫荧光法观察病毒载体在肺血管中的表达情况,通过PCR方法测定肺动脉中KLF4水平,通过HE染色比较肺小血管中膜厚度评估肺血管肥厚程度。取大鼠心脏计算右心肥厚指数。结果 细胞计数和细胞迁移实验证实选用的KLF4-siRNA链有效。免疫荧光实验显示,经大鼠气道注入的1型腺相关病毒载体均沿肺血管分布。荧光定量PCR实验显示,基因敲减(AAV1-KLF4-shRNA)组大鼠肺小动脉中KLF4的mRNA表达量明显低于其他两组。血流动力学检测结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的右心室收缩压和平均右心室压均明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的右心室收缩压和平均右心室压均明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。HE染色及右心肥厚指数结果显示,盐水模型组及对照病毒载体组的肺小血管重构及心室重构程度明显高于健康对照组,而接受肺血管KLF4基因敲减的大鼠的肺小血管重构及心室重构程度明显低于盐水模型组及对照病毒载体组。结论 肺血管特异性KLF4基因敲减模型构建成功并成功地在肺动脉高压中发挥作用,为进一步深入研究肺动脉高压的发病机制提供了� 展开更多

关键词 肺动脉高压 基因敲减 1型腺相关病毒 klf4

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5-Aza-CdR对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的去甲基化作用 被引量：1

9

作者 石聪聪 《医药论坛杂志》 2017年第4期54-56,59,共4页

目的探讨启动子甲基化对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的作用及5-Aza-CdR干预对启动子甲基化的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞,采用噻唑蓝(MTT)检测去甲基化药物5-Aza-CdRa对CEM/C1细胞增殖的影响,并... 目的探讨启动子甲基化对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的作用及5-Aza-CdR干预对启动子甲基化的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞,采用噻唑蓝(MTT)检测去甲基化药物5-Aza-CdRa对CEM/C1细胞增殖的影响,并利用半定量逆转录聚合反应(RT-PCR)检测去甲基化药物处理后CEM/C1细胞中KLF4基因mRNA的表达水平。结果 5-Aza-CdR抑制体外培养的人急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖,呈浓度依赖性。经5-Aza-CdR处理CEM/C1细胞后,RT-PCR检测KLF4 mRNA恢复了表达。结论启动子区高甲基化是急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞中KLF4基因失活的主要原因,5-Aza-CdR能逆转KLF4基因甲基化状态,从而调控KLF4基因表达并抑制细胞生长。 展开更多

关键词 klf4基因 WNT通路 急性淋巴细胞白血病 5-脱氧氮杂胞苷 去甲基化

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人KLF4基因克隆及重组KLF4慢病毒表达载体的构建 被引量：1

10

作者 王博涵 余虓 +4 位作者 余淦 李恒 肖巍 徐华 叶章群 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第7期1238-1242,共5页

背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细... 背景:KLF4基因在细胞分化过程中有重要作用。目的:构建KLF4基因慢病毒过表达载体。方法:聚合酶链反应扩增(PCR)目的基因KLF4后插入慢病毒表达载体pCDH中,构建重组载体pCDH-KLF4。通过PCR、双酶切和DNA测序方法对其鉴定,共同转染293NT细胞包装病毒,荧光显微镜观察报告基因的表达情况,收集病毒上清,测定病毒的滴度。将重组的慢病毒感染5637细胞,RT-PCR检测KLF4mRNA的表达。结果与结论:重组慢病毒表达载体质粒经限制性酶切和DNA测序分析证实重组慢病毒载体pCDH-KLF4的插入序列完全正确,重组慢病毒载体感染5637细胞后,细胞内KLF4mRNA高表达。结果证实,实验成功构建KLF4基因慢病毒过表达载体。 展开更多

关键词 组织构建 组织构建细胞学实验 慢病毒载体 klf4基因 基因重组 5637细胞 载体质粒 DNA测序 组织工程 泌尿系肿瘤 大肠杆菌 DH5a感受态细胞 国家自然科学基金 组织构建图片文章

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靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体的构建及其在肺动脉高压动物模型中的应用

11

作者 罗志梅 刘虹延 孙得胜 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期30-36,共7页

目的构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体,并应用于肺血管疾病,为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV-U6-MCS-CMV-E... 目的构建靶向敲减KLF4基因的重组腺相关病毒载体,并应用于肺血管疾病,为后期研究肺血管KLF4基因敲减在肺动脉高压大鼠中的作用及相关分子机制奠定基础。方法根据大鼠KLF4基因序列,设计针对大鼠特异性的siRNA序列,以pHBAAV-U6-MCS-CMV-EGFP作为空白载体,通过酶切技术构建带有GFP荧光标记的KLF4干扰腺病毒载体pHBAAV-r-KLF4shRNA-GFP,行测序分析,并进行病毒扩增、纯化及滴度测定。本研究对长时间(3个月)接触香烟烟雾的大鼠进行气道注入AAV1-KLF4-shRNA的干预治疗,观察大鼠右心室收缩压、平均右心室压等血流动力学指标改变。结果经测序检测显示,大鼠AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体构建成功。健康对照组、生理盐水模型组、对照病毒模型组、治疗干预组的右心室收缩压和平均右心室压比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对长时间接触香烟烟雾的肺动脉高压模型大鼠应用AAV1-KLF4-shRNA腺相关病毒载体,能有效改善右心室收缩压和平均右心室压,该载体在相关疾病动物模型中应用有效,为后期顺利开展AAV1-KLF4-shRNA在肺动脉高压中的预防和治疗作用,以及相关分子机制的深入研究提供基础条件。 展开更多

关键词 肺动脉高压 klf4 腺相关病毒 载体 基因敲减

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牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立 被引量：1

12

作者 辛晓玲 吕长荣 +1 位作者 陈冬梅 窦忠英 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1636-1641,共6页

为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo... 为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛 klf4基因 IPS细胞 反转录病毒载体

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大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因的表达及启动子区甲基化观察

13

作者 刘钦成 张梓朗 +5 位作者 潘润华 刘宁 韩晓玉 郭凌宏 王春明 廖彩仙 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第31期13-16,共4页

目的观察大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因表达及启动子区CpG位点的甲基化变化。方法大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外用25μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松诱导其分化,在诱导第0、7、14天分... 目的观察大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞诱导分化为肝细胞过程中Klf4、Nanog基因表达及启动子区CpG位点的甲基化变化。方法大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外用25μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松诱导其分化,在诱导第0、7、14天分别提取细胞DNA和RNA。采用实时荧光定量PCR法检测Klf4、Nanog基因mRNA,甲基化特异性PCR法观察Klf4、Nanog基因启动子区CpG位点甲基化。结果与诱导第0天比较,第7、14天Klf4 mRNA相对表达量降低(P均<0.05);与诱导第0天比较,第7、14天Nanog mRNA相对表达量均降低(P均<0.05)。与诱导第0天比较,诱导第7天Klf4启动子区第1、2个CpG位点甲基化频率升高(P均<0.05);与诱导第7天比较,诱导第14天Klf4启动子区第1个CpG位点甲基化频率升高,第2、3个CpG位点甲基化频率降低,P均<0.05。与诱导第0天比较,诱导第7天Nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率降低,第2个CpG位点甲基化频率升高,P均<0.05;与诱导第7天比较,诱导第14天Nanog启动子区第1个CpG位点甲基化频率升高,第2个CpG位点甲基化频率降低,P均<0.05。结论大鼠CD90^+Lin^-骨髓细胞在体外诱导向肝细胞分化过程中,Klf4、Nanog基因表达随诱导时间增加呈现先下降后回升趋势,两者启动子区CpG位点甲基化程度随诱导时间增加出现不同程度变化;Klf4和Nanog基因启动子区CpG位点的甲基化变化不仅会影响Klf4、Nanog基因的表达,而且起到重要的调控作用。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 CD90^+Lin^-骨髓细胞 NANOG基因 klf4基因

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转录激活因子样效应物敲除klf4 b基因的质粒构建与鉴定

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作者 毛强 邱超 +4 位作者 鲁黎 马海燕 程彬 梁丹 罗大极 《医学分子生物学杂志》 CAS 2015年第3期125-131,共7页

目的： KLF4是哺乳动物细胞中调控和维持全能性的关键因子，构建与鉴定klf4 b基因敲除的有效位点与相关质粒，以期构建klf4 b基因敲除动物模型研究其功能。方法转录激活因子样效应物核酸酶是目前最有效敲除和编辑基因的基因工程技术之... 目的： KLF4是哺乳动物细胞中调控和维持全能性的关键因子，构建与鉴定klf4 b基因敲除的有效位点与相关质粒，以期构建klf4 b基因敲除动物模型研究其功能。方法转录激活因子样效应物核酸酶是目前最有效敲除和编辑基因的基因工程技术之一，设计和组装了klf4 b基因TALENs质粒，在胚胎和整体动物水平验证其有效性。结果成功组装了两对klf4 b基因TALENs质粒，显微注射胚胎后，经检测其中一组成功诱导klf4 b靶向区域突变，突变类型既有插入型也有缺失型；遗传检测显示这些突变型高效的遗传给了下一代。结论在斑马鱼中有效敲除了klf4 b基因，成功获得了斑马鱼klf4 b突变群体；为进一步阐释斑马鱼中klf4 b基因的生物功能提供了良好的研究材料，也为全面理解哺乳类klf4基因的功能提供了研究模型。 展开更多

关键词 klf4基因 基因敲除 转录激活因子样效应物 斑马鱼

原文传递

非NF2突变型颅底脑膜瘤临床病理特点分析

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作者 黄冠又 郝淑煜 +4 位作者 冯洁 王亮 张力伟 张俊廷 吴震 《国际神经病学神经外科学杂志》 2022年第6期40-45,共6页

目的探讨非NF2基因突变AKT1(E17K)、SMO(L412F)、KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)型颅底脑膜瘤的临床病理特点。方法收集92例颅底脑膜瘤患者的临床病理资料,并对所有脑膜瘤样本进行Sanger基因测序,检测4个非NF2点突变:AKT1(E17K)、SMO(L412F)... 目的探讨非NF2基因突变AKT1(E17K)、SMO(L412F)、KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)型颅底脑膜瘤的临床病理特点。方法收集92例颅底脑膜瘤患者的临床病理资料,并对所有脑膜瘤样本进行Sanger基因测序,检测4个非NF2点突变:AKT1(E17K)、SMO(L412F)、KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)。结果92例颅底脑膜瘤中共检测出24例非NF2突变型脑膜瘤,1例为WHO 2级(非典型性),23例为WHO 1级。其中,AKT1(E17K)突变7例,SMO(L412F)突变7例,KLF4(K409Q)突变8例,TRAF7(G536S)突变2例。AKT1(E17K)、SMO(L412F)和KLF4(K409Q)突变型多为脑膜上皮型和过渡型,KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型主要为分泌型。KLF4(K409Q)突变型和TRAF7(G536S)突变型的肿瘤体积较小。较小的肿瘤体积对于预测KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型脑膜瘤有一定特异性和敏感性(AUC分别为0.784和0.955),差异有统计学意义(均P<0.05)。AKT1(E17K)、SMO(L412F)和TRAF7(G536S)突变型多好发于颅底中线。KLF4(K409Q)突变型肿瘤多位于颅内右侧,其中4例(50%)位于岩斜区。结论非NF2基因突变脑膜瘤多好发于颅底中线处,病理级别多为WHO 1级,AKT1(E17K)和SMO(L412F)突变型病理亚型多为脑膜上皮型和过渡型,分泌型多见于KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型。KLF4(K409Q)和TRAF7(G536S)突变型肿瘤体积相对较小。 展开更多

关键词 脑膜瘤 颅底 基因突变 AKT1 klf4 SMO TRAF7

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小鼠Klf4基因的原核表达研究

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作者 孟书燕 郭杰 +2 位作者 高庚渠 刘改霞 马威 《安徽农业科学》 CAS 2016年第12期133-135,共3页

[目的]对小鼠Klf4基因重组蛋白进行原核表达分析。[方法]利用双酶切从重组质粒p MXs-Klf4上回收小鼠Klf4基因片段,克隆入p ET-41a(+)载体后转化BL21大肠杆菌,用IPTG诱导表达,探讨诱导表达最佳浓度和时间,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进... [目的]对小鼠Klf4基因重组蛋白进行原核表达分析。[方法]利用双酶切从重组质粒p MXs-Klf4上回收小鼠Klf4基因片段,克隆入p ET-41a(+)载体后转化BL21大肠杆菌,用IPTG诱导表达,探讨诱导表达最佳浓度和时间,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析。[结果]重组质粒Klf4-p ET-41a(+)在IPTG诱导下可表达与预期相符的约为51 ku的KLF4蛋白;经IPTG刺激后重组蛋白表达增多,以0.8 mmol/L IPTG诱导6 h为佳;重组蛋白以包涵体形式存在于大肠杆菌BL21中。[结论]小鼠Klf4基因可在原核细胞中表达。 展开更多

关键词 小鼠 klf4基因 原核表达 大肠杆菌

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奶牛Klf4基因CDS区和3′UTR的克隆及生物信息学分析

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作者 徐萍 赵俭 +3 位作者 姚竞杰 Fotina Tetiana 王三虎 张晓建 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2021年第3期383-389,共7页

以奶牛乳腺组织cDNA为模板,采用PCR技术扩增奶牛Klf4基因CDS区和3′UTR,同时构建PMIR-Klf4-3′UTR表达质粒;应用生物信息学方法对Klf4基因CDS区及其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位、翻译后的修饰结构和蛋白结构进行生物信息学分析.结... 以奶牛乳腺组织cDNA为模板,采用PCR技术扩增奶牛Klf4基因CDS区和3′UTR,同时构建PMIR-Klf4-3′UTR表达质粒;应用生物信息学方法对Klf4基因CDS区及其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位、翻译后的修饰结构和蛋白结构进行生物信息学分析.结果表明:奶牛Klf4基因CDS区长度为1434 bp,可编码477个氨基酸,分子质量为50759.17 u,理论等电点为8.76,属于亲水性蛋白.Klf4基因3′UTR长度为366 bp,酶切重组PMIR-Klf4-3′UTR表达质粒得到长度分别为366和6470 bp的两条带,表明成功构建了重组质粒.同源性和遗传进化分析可知,牛Klf4基因与山羊、绵羊的亲缘性最近,达到98%以上,与斑马鱼的亲缘关系最远.KLF4蛋白有56个磷酸化位点,包含16个苏氨酸磷酸化位点、37个丝氨酸磷酸化位点和3个酪氨酸磷酸化位点.在二级结构和三级结构中,KLF4蛋白α-螺旋占18.03%,无规则卷曲占68.76%,存在3个锌指结构域.本研究为进一步探讨Klf4基因在奶牛乳腺炎表观遗传学调控过程中的作用提供数据支撑. 展开更多

关键词 klf4基因 中国荷斯坦奶牛 生物信息学分析 克隆

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KLF4对肝癌细胞HepG2化疗和光动力治疗的调节作用

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作者 贾勇圣 刘晓东 +2 位作者 史业辉 董国雷 佟仲生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期397-401,共5页

目的:分析重组人Krüppel类因子4(Krüppel-like factors 4,KLF4)基因在肝癌HepG2细胞中对化疗和光动力治疗的调节作用。方法:构建人KLF4慢病毒pWPTS-KLF4载体,应用RT-PCR、Western blotting检测pWPTS-KLF4感染后HepG2细胞中KLF... 目的:分析重组人Krüppel类因子4(Krüppel-like factors 4,KLF4)基因在肝癌HepG2细胞中对化疗和光动力治疗的调节作用。方法:构建人KLF4慢病毒pWPTS-KLF4载体,应用RT-PCR、Western blotting检测pWPTS-KLF4感染后HepG2细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,MTT实验检测HepG2细胞对顺铂、环磷酰胺或氟尿嘧啶耐受性的变化以及对光动力治疗敏感性的变化,罗丹明123染色检测HepG2细胞线粒体膜电位的变化。结果:成功构建慢病毒pWPTS-KLF4载体。顺铂、环磷酰胺或氟尿嘧啶处理HepG2细胞72 h后,pWPTS-KLF4感染组HepG2细胞存活率较对照组明显增高[(43.43±4.78)%vs(18.09±1.02)%;(110.51±4.58)%vs(75.23±5.92)%;(34.55±2.93)%vs(19.16±1.32)%,P<0.01]。光敏剂艾拉介导的光动力治疗后24 h,pWPTS-KLF4感染组HepG2细胞存活率较对照组明显减少[(37.16±3.26)%vs(57.24±8.01)%,P<0.01],细胞的线粒体膜电位明显降低。结论:重组人KLF4可以提高HepG2细胞化疗耐受性,增加光动力治疗敏感性。 展开更多

关键词 klf4基因 化疗 光动力治疗 肝癌

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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人甲状腺癌TPC-1细胞生长及KLF4基因表达的调节作用

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作者 李明闯 王瑞娟 +5 位作者 陈国 张青松 吴迪 吕晶 霍彦平 殷德涛 《中华内分泌外科杂志》 CAS 2015年第6期480-483,492,共5页

目的抑癌基因甲基化具有可逆性，相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人甲状腺癌TPC-1细胞增殖的影响，及5-iza-CdR对KLF4基因mRNA和蛋白表达水平的影响。... 目的抑癌基因甲基化具有可逆性，相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的人甲状腺癌TPC-1细胞增殖的影响，及5-iza-CdR对KLF4基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理TPC-1细胞，采用MTF检测5-Aza-CdR对细胞增殖的影响，利用RT-PCR及蛋白质印迹法（Westemblot）方法检测KLF4基因mRNA和蛋白表达的水平。结果5-Aga—CdR作用于TPC-1细胞24、48及72h后，TPC-1细胞增殖受抑制，且在一定范围内抑制率呈浓度和时间依赖性；TPC-1细胞经5-Aza．CdR干预后，KLF4基因mRNA和蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论5-Aza-CdR能抑制TPC-1细胞增殖，其作用可能是通过去甲基化上调抑癌基因KLF4的表达实现，为甲状腺癌的治疗提供了新思路。 展开更多

关键词 klf4基因 去甲基化 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 甲状腺癌

原文传递

Klf4抑制Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞增殖的研究

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作者 何旭 薛艳 +3 位作者 王学宗 曹月龙 郑昱新 丁道芳 《现代中西医结合杂志》 CAS 2019年第34期3773-3776,3795,共5页

目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收... 目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收集病毒上清,用其感染大鼠软骨细胞作为Klf4组,用PCDH-GFP慢病毒感染细胞作为对照组。采用CCK8法检测2组细胞生长增殖变化;采用Western blot方法,分别检测2组细胞中Klf4基因表达、增殖相关基因PCNA和CyclinD1蛋白表达、Wnt/β-catenin信号通路上下游基因表达情况。结果原代培养软骨细胞均强表达Col2a1和Sox9基因。慢病毒PCDH-GFP-Klf4和PCDH-GFP成功感染软骨细胞,Klf4基因在软骨细胞过表达。Klf4组软骨细胞生长明显受到抑制,PCNA和CyclinD1蛋白表达和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达均明显下调。结论过表达Klf4基因可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达而抑制软骨细胞增殖。 展开更多

关键词 klf4基因 软骨细胞 细胞增殖 WNT/Β-CATENIN信号通路

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