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检测脑脊液结核抗体对结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：6
1
作者 王文科 杨昆胜 《实用预防医学》 CAS 2008年第3期873-874,共2页
目的观察脑脊液中结核分枝杆菌特异性抗体检测对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法按照TBM的临床诊断标准和排除标准,选择临床确诊TBM病例30例为研究对象,并选择35例非结核性中枢神经系统疾病作为对照组。收集... 目的观察脑脊液中结核分枝杆菌特异性抗体检测对结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的诊断价值。方法按照TBM的临床诊断标准和排除标准,选择临床确诊TBM病例30例为研究对象,并选择35例非结核性中枢神经系统疾病作为对照组。收集每个病人在首次腰穿的脑脊液和当天的静脉血标本,用胶体金标记方法进行检测。结果实验组脑脊液检测的阳性率显著高于对照组(P<0.01),实验组血清的检测阳性率也显著高于对照组(P<0.01)。脑脊液的敏感度为83.33%,特异度为88.57%;血清的敏感度为70%,特异度为77.14%。脑脊液与血清的检测的阳性率比较无显著差异(P>0.05)。结论此种混合抗原是一种简便、快捷的诊断TBM的辅助方法。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 脂阿拉伯甘露糖 38 kda蛋白 结核性脑膜炎 诊断
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内蒙古地区鼠类体表革螨携带立克次体研究 被引量：2
2
作者 王彬 李贵昌 +7 位作者 董利 母群征 赵宁 宋秀平 鲁亮 栗冬梅 李兴洲 刘起勇 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2023年第2期244-249,共6页
目的通过检测内蒙古自治区(内蒙古)鼠体革螨携带立克次体种类和阳性率,为当地相关传染病防控提供依据。方法对内蒙古不同地区鼠类体表革螨提取DNA,用巢式PCR扩增17 kDa基因序列,对17 kDa阳性样本再进行外膜蛋白A(ompA)序列扩增。对扩增... 目的通过检测内蒙古自治区(内蒙古)鼠体革螨携带立克次体种类和阳性率,为当地相关传染病防控提供依据。方法对内蒙古不同地区鼠类体表革螨提取DNA,用巢式PCR扩增17 kDa基因序列,对17 kDa阳性样本再进行外膜蛋白A(ompA)序列扩增。对扩增所得PCR产物进行测序,测序结果与美国国立生物技术信息中心(NCBI)中序列进行同源性比对后构建系统发育树。结果在536只革螨中,有11只革螨检出立克次体,总阳性率为2.05%,包括黑龙江立克次体、猫立克次体近缘种和1种未知立克次体。其宿主包括东北血革螨、仓鼠真厉螨、北野血革螨、格氏血厉螨以及1种寄螨属种类的第二若螨,阳性率分别为8.89%、3.39%、2.22%、0.68%和12.50%。阳性革螨宿主包括达乌尔黄鼠、五趾跳鼠和布氏田鼠。结论内蒙古地区鼠体革螨携带多种立克次体,其中包括对人类致病的种类。 展开更多
关键词 革螨 立克次体 17 kda蛋白 外膜蛋白A 内蒙古
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利用酵母双杂交系统筛选与辣椒轻斑驳病毒126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子
3
作者 何勇 范晓珠 +5 位作者 陈新月 段书静 胡婷婷 谢如雪 王宇晴 陈静 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期2986-2996,共11页
【目的】辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)是世界范围内危害辣椒的主要病毒之一。126 kDa蛋白是PMMoV编码的重要致病因子,但致病机制目前仍不清楚。本研究旨在筛选与126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子,为解析PMMoV的致病机... 【目的】辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)是世界范围内危害辣椒的主要病毒之一。126 kDa蛋白是PMMoV编码的重要致病因子,但致病机制目前仍不清楚。本研究旨在筛选与126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子,为解析PMMoV的致病机制提供理论依据。【方法】首先,通过同源重组法构建诱饵载体pGBK-126 kDa;并以辣椒叶片为试验材料,利用Trizol法提取辣椒叶片总RNA,制备辣椒酵母cDNA文库;之后,使用pGBK-126 kDa对cDNA文库进行筛选,并通过NCBI和Uniprot等对筛选结果进行序列比对和生物信息学功能分析,根据比对分析结果,选取可能参与到植物抗病通路的寄主因子,克隆其全长CDS构建到pGADT7载体,酵母双杂交(Y2H)、双分子荧光互补(BiFC)和荧光素酶互补(LCI)进一步验证126 kDa与寄主因子之间的互作;最后,通过瞬时过表达寄主蛋白分析其在PMMoV侵染过程中的作用。【结果】提取获得高质量辣椒RNA,无降解;获得高质量酵母cDNA文库,成功构建诱饵质粒pGBK-126 kDa,筛选得到与126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子18个;生物信息学分析结果显示,18个寄主因子广泛参与到植物酶系统、物质及能量代谢调节过程、DNA结合转录过程、激素合成过程以及防御响应等多个通路;选取的其中3个寄主因子(LA2、PDHE1、BXL1)在一对一酵母双杂交互作验证中均存在与126 kDa的相互作用,表明初筛的结果可靠;通过BiFC和LCI进一步验证了126 kDa与BXL1之间体内外互作;瞬时过表达BXL1发现PMMoV的侵染受到了显著抑制。【结论】成功构建了pGBK-126 kDa诱饵质粒,基于该质粒对酵母cDNA文库进行筛选得到18个互作的寄主因子,广泛涉及植物生命活动过程中的多个通路,筛选结果验证可靠,其中,BXL1存在与126 kDa的体内外相互作用,并能够抑制PMMoV的侵染。研究结果可为深入探究PMMoV的侵染机制提供良好的理论和材料基础。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 辣椒 酵母双杂交 126 kda蛋白 致病机制
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重组结核分枝杆菌11 kDa蛋白皮肤试验与结核菌素皮肤试验的比较研究 被引量：3
4
作者 赵淑娟 李春 +3 位作者 关永春 张悦琴 郭金红 郑素华 《医学综述》 2017年第20期4146-4149,共4页
目的比较重组结核分枝杆菌11 kDa蛋白(重组11 kDa蛋白)皮肤试验与结核菌素皮肤试验(PPD)两种检测方法,探讨更适合结核分枝杆菌潜伏感染者的筛查方法。方法选取2015年9月北京市大兴区某大学新生共461名,进行重组11 kDa蛋白和PPD的同体双... 目的比较重组结核分枝杆菌11 kDa蛋白(重组11 kDa蛋白)皮肤试验与结核菌素皮肤试验(PPD)两种检测方法,探讨更适合结核分枝杆菌潜伏感染者的筛查方法。方法选取2015年9月北京市大兴区某大学新生共461名,进行重组11 kDa蛋白和PPD的同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1 mL重组11 kDa蛋白(10μg/L)和0.1 mL结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)(50 U/mL),观察注射后72 h后皮肤反应。于皮肤试验前采集461名志愿者的静脉血,进行体外γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)检测,采用T-SPOT.TB试剂盒进行。比较重组11 kDa蛋白皮肤试验、结核菌素PPD皮肤试验的差异性。结果以注射72 h后的硬结反应进行统计,2种检测结果显示男女阳性率比较,差异无统计学意义。重组11 kDa蛋白皮肤试验中阳性反应者为17名,阳性率为3.68%;PPD皮肤试验中强阳性反应者为8名,强阳性率为1.74%。以T-SPOT检测结果为标准,重组11 kDa蛋白皮肤试验灵敏度、特异度、准确度分别为39.53%,100.00%,94.36%;PPD皮肤试验灵敏度、特异度、准确度分别为16.28%,99.76%,91.97%。结论重组11 kDa蛋白皮肤试验灵敏度高,与体外T-SPOT.TB检测结果一致且简便易行,有望成为结核分枝杆菌潜伏感染的新的筛查方法。 展开更多
关键词 重组结核分枝杆菌11 kda蛋白 结核菌素纯蛋白衍生物 体外γ干扰素释放试验 皮肤试验 筛查
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重组11 kDa蛋白对结核分枝杆菌感染豚鼠皮肤试验的动态观察 被引量：1
5
作者 卢锦标 都伟欣 +3 位作者 沈小兵 苏城 陈保文 徐苗 《微生物学免疫学进展》 CAS 2020年第6期16-20,共5页
目的探讨重组11 kDa蛋白(简称11 kDa)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb,简称结核菌)感染豚鼠皮试反应的动态变化和意义。方法在攻毒Mtb H37Rv后将豚鼠分为治疗组和对照组。治疗组为潜伏感染的复发模型,在攻毒后2周开始抗... 目的探讨重组11 kDa蛋白(简称11 kDa)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb,简称结核菌)感染豚鼠皮试反应的动态变化和意义。方法在攻毒Mtb H37Rv后将豚鼠分为治疗组和对照组。治疗组为潜伏感染的复发模型,在攻毒后2周开始抗生素治疗,结束后再注射地塞米松诱导结核复发。对照组为自然感染模型,所有动物不予药物干预。在攻毒后第2、3、4、6、10、14、22周,每组取若干豚鼠进行11 kDa和结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative of tuberculin,TB-PPD,简称PPD)皮试,记录24 h反应大小;同时将部分动物安乐死后解剖,检测脾肺脏器的活菌载量。结果对照组豚鼠的11 kDa皮试在感染后第2周阳性率达到87.5%(7/8),第3周全部转阳;PPD皮试则在第4周才全部转阳。豚鼠皮试反应大小与其体内结核菌载量在感染初期呈较一致的变化趋势。治疗组豚鼠的11 kDa皮试在抗生素停药后不同时间点的反应均大于PPD皮试,阳性率总体上也高于PPD皮试。结论重组11 kDa蛋白皮试对自然感染动物的诊断时间早于PPD皮试,对结核潜伏感染动物具有优于PPD的诊断敏感性,因此有望发展为结核病诊断和潜伏感染筛查的新方法。 展开更多
关键词 重组11 kda蛋白 纯蛋白衍生物 豚鼠 结核感染 动态观察 皮试检测
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杂色鲍血蓝蛋白多克隆抗体的制备与血蓝蛋白35kDa片段鉴定 被引量：1
6
作者 姜敬哲 韩焘 +2 位作者 王江勇 杨慧英 刘金叶 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期67-73,共7页
以杂色鲍(Haliotis diversicolor Reeve)为研究对象,通过密度梯度离心方法纯化得到高纯度血蓝蛋白,以其作为抗原皮下注射免疫新西兰大白兔,从而获得高效价的兔源多克隆抗血清。进一步通过Protein A抗原亲和纯化的方法对该抗血清纯化,最... 以杂色鲍(Haliotis diversicolor Reeve)为研究对象,通过密度梯度离心方法纯化得到高纯度血蓝蛋白,以其作为抗原皮下注射免疫新西兰大白兔,从而获得高效价的兔源多克隆抗血清。进一步通过Protein A抗原亲和纯化的方法对该抗血清纯化,最终获得效价更高、检测特异性更好的血蓝蛋白多克隆抗体。应用该抗体进行Western检测发现,鲍血淋巴中存在着多样的血蓝蛋白衍生产物;进一步结合质谱技术对其中35 kDa条带进行鉴定发现,其来源于血蓝蛋白I型亚基的H结构域。 展开更多
关键词 杂色鲍(Haliotis diversicolor Reeve) 血蓝蛋白 亲和纯化 多克隆抗体 35 kda蛋白
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血吸虫成虫31/32kDa蛋白分子研究的进展
7
作者 沈定文 石佑恩 《国外医学（寄生虫病分册）》 CAS 北大核心 1992年第1期4-7,共4页
曼氏血吸虫成虫31/32kDa蛋白的基因已经克隆和表达,核苷酸和氨基酸序列分析表明:31kDa蛋白在多肽水平上与哺乳动物组织蛋白酶B有同源性,32kDa蛋白的核苷酸顺序与血红蛋白酶相同。来源于成虫肠道的血吸虫31/32kDa蛋白可用于三种人体血吸... 曼氏血吸虫成虫31/32kDa蛋白的基因已经克隆和表达,核苷酸和氨基酸序列分析表明:31kDa蛋白在多肽水平上与哺乳动物组织蛋白酶B有同源性,32kDa蛋白的核苷酸顺序与血红蛋白酶相同。来源于成虫肠道的血吸虫31/32kDa蛋白可用于三种人体血吸虫病时免疫诊断。 展开更多
关键词 血吸虫 kda蛋白
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结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白原核载体的构建及在E.coli中的高效表达
8
作者 李兵 刘威龙 +7 位作者 张晶 张明霞 邓群益 李晓鹤 罗瑞玲 余卫业 陈心春 周伯平 《临床肺科杂志》 2010年第6期823-825,共3页
目的获得高效表达的结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白(ESAT-6)。方法利用PCR方法扩增出ESAT-6基因片段,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),酶切分析和序列测定鉴定出ESAT-6基因的阳性重组子,将其转化入E.coliB... 目的获得高效表达的结核分枝杆菌早期分泌抗原靶6kDa蛋白(ESAT-6)。方法利用PCR方法扩增出ESAT-6基因片段,将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-21b(+),酶切分析和序列测定鉴定出ESAT-6基因的阳性重组子,将其转化入E.coliBL21(DE3),阳性菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析靶蛋白的表达;重组蛋白经Ni-NTAHis.BindResins纯化。结果成功扩增出ESAT-6基因片段,构建了重组表达质粒pET-ESAT-6,SDS-PAGE显示表达产物分子量约为6kD,经亲和纯化后的ESAT-6重组蛋白纯度高,且能被结核病人血清所识别。结论利用pET原核表达系统成功的对结核分枝杆菌ESAT-6重组蛋白进行高效表达和纯化,重组蛋白具有良好的免疫活性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 早期分泌抗原靶6 kda蛋白 原核表达
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牛种布鲁氏菌31KD_a蛋白基因引物的PCR试验(Ⅰ) 被引量：37
9
作者 李兰玉 邱海燕 尚德秋 《中国地方病防治》 2000年第4期196-198,共3页
目的 检查Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓ３１ＫＤａ蛋白基因引物ＰＣＲ的特异性和敏感性。方法　　用煮沸法和酚提法分别从６个种布鲁氏菌和耶氏菌Ｏ３、Ｏ９、大肠菌 Ｏ１５７．Ｈ７以及鼠伤寒沙门氏菌４７ ７２９中提取ＤＮＡ进行ＰＣＲ试验。... 目的 检查Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓ３１ＫＤａ蛋白基因引物ＰＣＲ的特异性和敏感性。方法　　用煮沸法和酚提法分别从６个种布鲁氏菌和耶氏菌Ｏ３、Ｏ９、大肠菌 Ｏ１５７．Ｈ７以及鼠伤寒沙门氏菌４７ ７２９中提取ＤＮＡ进行ＰＣＲ试验。结果３１ＫＤａ蛋白基因引物Ｂ４、Ｄ５对６个种布鲁氏菌ＤＮＡ均能扩增，对非布鲁氏菌ＤＮＡ呈阴性。该扩增反应与提取ＤＮＡ方法无关，与在一定范围内酶量关系不大。Ｂ４、Ｂ５引物的ＰＣＲ可查０．９５ｏｇ／μｌ的布鲁氏菌ＤＮＡ。结论Ｂ４、Ｂ５引物的ＰＣＲ具有良好的特异性和敏感性，可在现场中试用。 展开更多
关键词 牛种布鲁氏菌 31kda蛋白基因引物 聚合酶链反应
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日本血吸虫SjC21.7核酸疫苗诱导小鼠保护性免疫作用的研究 被引量：6
10
作者 余传信 朱荫昌 +4 位作者 殷旭仁 任建功 司进 许永良 沈林南 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期201-204,共4页
目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 1.7k Da膜蛋白分子 (Sj C2 1.7)核酸疫苗对 BAL B/ c小鼠的免疫保护性作用。　方法　采用 PCR方法扩增出特异性 Sj C2 1.7基因的开放阅读框序列 ,在其起始密码子处引入 Kozark序列。将目的基因片段亚... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株 2 1.7k Da膜蛋白分子 (Sj C2 1.7)核酸疫苗对 BAL B/ c小鼠的免疫保护性作用。　方法　采用 PCR方法扩增出特异性 Sj C2 1.7基因的开放阅读框序列 ,在其起始密码子处引入 Kozark序列。将目的基因片段亚克隆到真核表达质粒 pc DNA3.1中 ,构建重组真核表达质粒 Sj C2 1.7- pc DNA3.1。 4 8只 BAL B/ c小鼠分为对照组、实验组和加强组。对照组小鼠的股四头肌注射接种 pc DNA3.1,实验组同法注射重组质粒 Sj C2 1.7- pc D-NA3.1,加强组除注射重组质粒 Sj C2 1.7- pc DNA3.1外 ,同时注射重组质粒 P35 - pc DNA3.1及 P4 0 - pc DNA。每隔 2 wk免疫 1次 ,共免疫 3次。第 3次免疫后第 30天 ,每只鼠感染 4 5± 1条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各组小鼠成虫数及肝卵数。通过 EL ISA和免疫组化分析观察小鼠免疫学特征的变化。　结果　免疫组化分析显示 ,实验组小鼠股四头肌局部组织有特异性抗原蛋白表达。EL ISA分析表明 ,免疫后实验组和加强组有部分小鼠出现特异性 Ig G抗体。与对照组比较 ,实验组减虫率及减卵率分别为 2 9.9%及 13.8% ,加强组分别为 31.9%及 2 8.0 %。加强组减卵率显著高于实验组(P<0 .0 5 )。　结论　 Sj C2 1.7核酸疫苗能诱导 BAL B/ 展开更多
关键词 日本血吸虫 21.7kda蛋白分子 核酸疫苗 免疫保护作用 IL-12 白细胞介素-12 血吸虫病
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恙虫病东方体Gilliam株56kDa蛋白部分基因的原核表达及初步鉴定 被引量：4
11
作者 操敏 郭恒彬 +5 位作者 郁兴明 张云 朱进 王长军 吴光华 唐家琪 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期82-85,共4页
目的　对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa蛋白部分基因进行原核表达 ,以获得高效表达、有生物活性目的蛋白 ,为恙虫病诊断试剂的研制打下基础。方法　根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码5 6kDa抗原... 目的　对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa蛋白部分基因进行原核表达 ,以获得高效表达、有生物活性目的蛋白 ,为恙虫病诊断试剂的研制打下基础。方法　根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码5 6kDa抗原富含亲水区及同源性高的C端一段长约 70 0bp的DNA ,插入原核载体PGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌TGI ,抽提质粒 ,酶切鉴定 ,含插入片段的重组质粒进行序列分析 ,再转化表达宿主菌大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,用SDS -PAGE及Western -blot进行分析鉴定。结果　SDS -PAGE检测表明该截短片段以融合蛋白的方式得到成功表达 ,在相对分子量 5 8kDa处有表达条带 ,经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 30 5 %。Western -blot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清识别。结论　表达产物初步鉴定具有生物活性 。 展开更多
关键词 恙虫病东方体 Gilliam 56kda蛋白 基因原核表达 鉴定
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试述鲍类前合子生殖隔离 被引量：6
12
作者 李太武 苏秀榕 +2 位作者 杨文新 张健 刘艳 《辽宁师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2001年第3期298-301,共4页
生殖隔离是一个最重要的生物过程 .虽然有许多机理还是未知的 ,但已研究清楚了物种之间的生殖隔离有两种方式 .即通过配子不成熟、不受精的前合子生殖隔离和杂交后代的不育、不成活的后合子生殖隔离 .在动物受精过程中 ,两个配子的质膜... 生殖隔离是一个最重要的生物过程 .虽然有许多机理还是未知的 ,但已研究清楚了物种之间的生殖隔离有两种方式 .即通过配子不成熟、不受精的前合子生殖隔离和杂交后代的不育、不成活的后合子生殖隔离 .在动物受精过程中 ,两个配子的质膜在接触融合之前 ,精子必须穿透包绕在卵细胞外的物质 ,为完成这一过程 ,大多数种类的动物都发展了精子结构 ,使其带有顶体泡 ,它通过泡吐作用释放具有溶解作用的蛋白质 ,由它担任穿透卵细胞外被的作用 .成熟的鲍精子具有发达的顶体泡 ,里面含有多种蛋白质 ,但其中的两种蛋白质———细胞溶素 ( 16kDa)和 18kDa蛋白质与生殖有关 ,是生殖隔离的主要分子结构 .当精子粘附到卵黄外膜上时就诱发了顶体反应 ,释放的 16kDa蛋白质利用非酶解反应 ,在卵黄膜上穿一个小孔 ,精细胞便从此处穿过卵黄膜与卵细胞融合 .鲍类的卵细胞由一层又厚又复杂的细胞外基质包被 ,并由胶状物、卵黄膜和细胞表面壳等几种成分组成 .超微结构研究发现 :胶状物位于卵细胞的最外层 ,由疏松排列的纤维组成 ,它在鲍类受精中的作用还没有研究清楚 .鲍类的ESC层与海胆的卵黄膜十分相似 ,含有精子结合受体 ,它是不分支的糖蛋白 ,是同细胞溶素结合的惟一成分 ,它具有种属特异性 .每个受体大约同 6 0个细胞溶素? 展开更多
关键词 鲍 生殖隔离 前合子生殖 软体动物 有性生殖 细胞溶素 18kda蛋白质
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HSP70 TNF-αIL-4与妊娠期高血压患者体液免疫的关系研究 被引量：5
13
作者 王影 洪海漫 孟斐 《河北医学》 CAS 2020年第11期1776-1779,共4页
目的:分析热休克70kDa蛋白(HSP70)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)与妊娠期高血压患者体液免疫的关系。方法:选取2016年12月至2019年6月108例医院收治妊娠期高血压患者作为观察组,并选取同时期108例正常妊娠孕妇作为对照... 目的:分析热休克70kDa蛋白(HSP70)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)与妊娠期高血压患者体液免疫的关系。方法:选取2016年12月至2019年6月108例医院收治妊娠期高血压患者作为观察组,并选取同时期108例正常妊娠孕妇作为对照组,观察两组患者体液免疫指标以及血清HSP70、TNF-α、IL-4差异,并分析HSP70、TNF-α、IL-4与妊娠期高血压患者体液免疫的相关性。结果:观察组与对照组的C3、C4、IgA、IgG、IgM等体液免疫指标间的比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组与对照组的血清HSP70、TNF-α和IL-4水平差异有统计学意义(P<0.05);通过相关性分析发现,HSP70、TNF-α、IL-4与妊娠期高血压患者体液免疫存在正相关性(均P<0.05)。结论:妊娠期高血压患者体液免疫水平与HSP70、TNF-α、IL-4存在正相关性,可以通过HSP70、TNF-α、IL-4检查筛查高危孕妇,从而尽早给予有效的干预措施,保护母婴健康安全。 展开更多
关键词 70kda蛋白 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-4 妊娠期高血压 体液免疫
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HSPA1A受HOTAIR/miR-590-3p轴调控促进I/R诱导的心肌梗死大鼠体内NF-κB介导的炎症反应
14
作者 刘超群 梁丽艳 +1 位作者 刘顺民 钟小兰 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2023年第5期696-705,共10页
目的:探讨热休克70 kDa蛋白1A(HSPA1A)受长链非编码RNA(lncRNA)高温转录物反义RNA(HOTAIR)/微小RNA(miR)-590-3p轴的调控,对心肌缺血/再灌注(I/R)诱导的急性心肌梗死大鼠模型的调控作用。方法:建立大鼠心肌I/R损伤模型,将SD大鼠随机分为... 目的:探讨热休克70 kDa蛋白1A(HSPA1A)受长链非编码RNA(lncRNA)高温转录物反义RNA(HOTAIR)/微小RNA(miR)-590-3p轴的调控,对心肌缺血/再灌注(I/R)诱导的急性心肌梗死大鼠模型的调控作用。方法:建立大鼠心肌I/R损伤模型,将SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组、I/R组、I/R联合siRNA沉默的HSPA1A组(I/R+si-HSPA1A组)、I/R联合siRNA沉默的HOTAIR组(I/R+si-HOTAIR组)、I/R联合si-HSPA1A的阴性对照组(I/R+si-NC组)、I/R联合siRNA沉默的HOTAIR的阴性对照组(I/R+si-NC2组)。建立H9C2细胞缺氧/复氧(H/R)模型,将H9C2细胞随机分为Ctrl组、H/R组、H/R联合si-HOTAIR组(H/R+si-HOTAIR组)、H/R联合si-HOTAIR和过表达HSPA1A组(I/R+si-HOTAIR+pc-HSPA1A组)4组。将常规培养的H9C2细胞分为miR-590-3p的拟似物组(mimic组)、mimic阴性对照组(mimic-NC组)、si-NC2组和si-HOTAIR组4组。用苏木素-伊红(HE)染色进行心肌组织病理学检查。用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测心肌组织中肌酸激酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达以及血清中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测H9C2细胞的活力。用Western blot分析HSPA1A、核因子-κB(NF-κB)P65、磷酸化的NF-κB P65(p-NF-κB P65)、IL-6、IL-1β、TNF-α的表达。用实时定量PCR(RT-qPCR)法分析HOTAIR和miR-590-3p的表达。利用双荧光素酶报告实验检测miR-590-3p与HSPA1A的3′非翻译区(UTR)以及HOTAIR与miR-590-3p的结合作用。结果:与假手术组比,I/R诱导后明显增加了心肌组织损伤和炎症(均P<0.05)。与I/R+si-NC组比,I/R+si-HSPA1A组的HSPA1A、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平都下调(均P<0.05),缓解了心肌损伤和炎症反应。与假手术组比,I/R诱导后明显增加了HOTAIR表达并下调了miR-590-3p的表达(均P<0.05)。与I/R+si-NC2组比,I/R+si-HOTAIR组的HSPA1A、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平都下调(均P<0.05),miR-590-3p� 展开更多
关键词 热休克70 kda蛋白1A 高温转录物反义RNA 核因子-κB 急性心肌梗死 炎症反应 大鼠
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日本血吸虫32kDa蛋白质基因在真核表达载体中的亚克隆 被引量：4
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作者 汪学龙 蒋作君 +1 位作者 沈际佳 姚涌 《生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第3期25-26,28,共3页
设计和合成特定寡核苷酸引物 ,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA ,RT—PCR法扩增日本血吸虫 32kDa蛋白质 (Sj32 )基因编码序列 ,将扩增产物连接pGEM—T克隆载体 ,再亚克隆到真核表达载体 pBKCMV中。结果 :RT—PCR法特异性扩增出Sj32编码基... 设计和合成特定寡核苷酸引物 ,TRIZOL提取日本血吸虫成虫RNA ,RT—PCR法扩增日本血吸虫 32kDa蛋白质 (Sj32 )基因编码序列 ,将扩增产物连接pGEM—T克隆载体 ,再亚克隆到真核表达载体 pBKCMV中。结果 :RT—PCR法特异性扩增出Sj32编码基因片段 ,其大小约为1 2 70bp ,经双酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pGEM—Sj32和pBK—Sj32中含有目的基因。pBK—Sj32重组质粒的成功构建 ,为进一步表达Sj32及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 32kda蛋白质 基因克隆 真核表达载体
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日本血吸虫31/32KDa蛋白质基因扩增及克隆 被引量：4
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作者 王维 汪学龙 +2 位作者 沈际佳 蒋作君 汤中圣 《疾病控制杂志》 2000年第4期302-306,共5页
目的　克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法　以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆... 目的　克隆日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质的编码基因 ,用于血吸虫病免疫诊断和预防。方法　以日本血吸虫成虫 RNA为模板逆转录合成 c DNA链 ,参照 S.m 31/ 32编码序列设计合成引物 ,用 PCR法扩增 31/ 32 KDa蛋白质基因编码序列 ,将其克隆入 p GEM- T载体 ,并用双酶切和以质粒为模板的 PCR进行鉴定。结果　 RT- PCR扩增出一条约 12 70 bp大小的特异性条带 ,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的 PCR均获得了一条与 RT- PCR扩增出的条带大小相同。结论　日本血吸虫 31/ 32 KDa蛋白质重组 p GEM- T克隆载体的成功构建 ,为进一步研究提供条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 31/32kda蛋白质 基因克隆
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马铃薯X病毒湖南分离物的鉴定与分组研究 被引量：3
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作者 杜志游 陈集双 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期119-123,共5页
从湖南石门采集表现重花叶症状的马铃薯叶片中分离纯化到一株线状病毒HN021.经双链RNA(ds-RNA)抽提、寄主反应测定、病毒粒子和内含体的形状观察, 初步确定该病毒为马铃薯X病毒 (Potato virus X).以ds-RNA作为模板,用相应引物对HN021分... 从湖南石门采集表现重花叶症状的马铃薯叶片中分离纯化到一株线状病毒HN021.经双链RNA(ds-RNA)抽提、寄主反应测定、病毒粒子和内含体的形状观察, 初步确定该病毒为马铃薯X病毒 (Potato virus X).以ds-RNA作为模板,用相应引物对HN021分离物的ORF4-UTR-ORF5片段进行RT-PCR,得到1kb左右的双链cDNA片段.对该片段进行克隆和测序,并将测序所得的核苷酸序列与Genbank登录的11株不同分离物的相应片段的核苷酸序列进行同源性比较和分析.结果表明,HN021与分离自南美洲的三株分离物(COAT,KPA和HB)的同源性为78.4%~79.4%,与其它8株(分离自亚洲、欧洲、大洋州和北美洲)分离物的同源性为96.4%-97.8%.从氨基酸水平比较,HN021与COAT,KPA和HB三者CP和8kDa蛋白氨基酸序列同源性分别为86.5%~89.0%和74.3%~75.7%,相应地与其它8株分离物的同源性分别为97.1%-98.7% 和97.1%-100%.序列分析的结果证实了HN021分离物为马铃薯X病毒,同时表明PVX明显存在两个组(组Ⅰ和组Ⅱ),HN021和其它来自亚洲、欧洲、大洋州、北美洲分离物的组II,3个南美洲分离物属于组I. 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 湖南分离物 鉴定 分组 外壳蛋白 8kda蛋白
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重组结核分枝杆菌11kDa蛋白皮肤试验与体外干扰素γ检测方法的比较 被引量：4
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作者 都伟欣 崔颖杰 +6 位作者 卢锦标 杨晰朦 杨蕾 丁敏 沈小兵 苏城 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第11期1183-1186,共4页
目的对重组结核分枝杆菌11k Da蛋白(以下简称重组11k Da蛋白)皮肤试验与体外干扰素γ(interferonγ,IFNγ)检测方法进行比较。方法选取32名健康志愿者进行重组11k Da蛋白和TB-PPD的同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1 ml重组11... 目的对重组结核分枝杆菌11k Da蛋白(以下简称重组11k Da蛋白)皮肤试验与体外干扰素γ(interferonγ,IFNγ)检测方法进行比较。方法选取32名健康志愿者进行重组11k Da蛋白和TB-PPD的同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1 ml重组11k Da蛋白(10μg/ml)和0.1 ml TB-PPD(50 IU/ml),注射后24、48、72 h测量志愿者皮肤反应(硬结和红晕)的两个直径(最大径和最大径的垂直径),并取其均值。于皮肤试验前采集32名志愿者的静脉血,分离外周血单个核细胞,采用T-SPOT.TB试剂盒进行检测。比较重组11k Da蛋白皮肤试验与体外IFNγ检测结果的一致性。结果以注射72 h后的硬结反应统计重组11k Da蛋白皮肤试验中阳性人数为8名,阳性率为25%,TB-PPD皮肤试验中阳性人数为24名,阳性率为75%,其中强阳性人数为8名;体外IFNγ检测(T-SPOT.TB)阳性人数为7名,阳性率为22%。重组11k Da蛋白皮肤试验结果和体外IFNγ检测结果一致性良好(Fleiss Kappa值=0.913),这两种检测方法的阳性率远低于TB-PPD皮肤试验(Fleiss Kappa值=0.266)。结论重组11k Da蛋白皮肤试验的检测结果与体外IFNγ检测结果基本一致,有潜力成为结核分枝杆菌潜伏感染者的新筛查方法。 展开更多
关键词 重组结核分枝杆菌11kda蛋白 皮肤试验 体外干扰素γ检测
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苏云金芽胞杆菌以色列亚种20kDa蛋白质对CytA蛋白溶细胞作用的影响 被引量：2
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作者 刘子铎 孙明 +4 位作者 陈亚华 喻子牛 R.Manassherob E.Ben-Dov A.Zaritsky 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第1期81-86,共6页
为了证明苏云金芽胞杆菌以色列亚种２０ｋＤｅ蛋白质对ＣｙｔＡ蛋白溶细胞作用的影响， 根据２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因的核苷酸序列，用ＡＭＰＬＩＦＹ程序设计了一套带有酶切位 点的引物，经ＰＣＲ扩增分别获得了２０ｋＤｅ... 为了证明苏云金芽胞杆菌以色列亚种２０ｋＤｅ蛋白质对ＣｙｔＡ蛋白溶细胞作用的影响， 根据２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因的核苷酸序列，用ＡＭＰＬＩＦＹ程序设计了一套带有酶切位 点的引物，经ＰＣＲ扩增分别获得了２０ｋＤｅ蛋白质和ｃｙｔＡ蛋白基因。将其基因与表达载体 ｐＵＨＥ２４连接并转化到大肠杆菌ＸＬＩ和ＤＨＳ 分别获得含２０ｋＤａ蛋白质基因的克隆子 ＬＺ２９；含ｃｙｔＡ基因的克隆子ＬＺｃｙｔＡ和含有二者基因的重组子ＬＺ２０Ａ．在ＩＰＴＧ诱导下，测定 了不同克隆株基因表达产物对大肠杆菌细胞生长的影响。结果表明：ＬＺ２０的细胞生长不受影 响；ＬＺｃｙｔＡ的细胞被杀死；ＬＺ２０Ａ的细胞生长也不受影响。这表明２０ｋＤａ蛋白质基因与ｃｙｔＡ 蛋白基因重组后，２０ｋＤａ蛋白质基因表达产物可保护ＣｙｔＡ蛋白对大肠杆菌的溶细胞作用，而 巳这种作用并不因不同大肠杆菌受体而改变。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 20kda蛋白质 cytA蛋白
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猪链球菌2型溶血素基因与38KDa蛋白基因克隆及联合表达 被引量：2
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作者 王华 王君玮 +5 位作者 陈义平 赵永刚 徐天刚 赵云玲 张维 王志亮 《现代生物医学进展》 CAS 2007年第7期977-980,共4页
目的:研究有效的猪链球菌病疫苗。方法:以四川株猪链球菌2型基因组DNA为模板分别扩增溶血素基因和38KDa基因主要功能区基因;并经连接、克隆及酶切鉴定。分别构建原核表达载体pET32a-Sly、pET32a-38KDa,提取阳性克隆质粒分别进行双酶切... 目的:研究有效的猪链球菌病疫苗。方法:以四川株猪链球菌2型基因组DNA为模板分别扩增溶血素基因和38KDa基因主要功能区基因;并经连接、克隆及酶切鉴定。分别构建原核表达载体pET32a-Sly、pET32a-38KDa,提取阳性克隆质粒分别进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片断,将目的片断定向克隆到表达载体pET32a中,经测序正确后,重组质粒转化入大肠杆菌BL21 (DE3),用IPTG进行诱导表达。结果:重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量约为60Ku的重组蛋白,表达产物经纯化后,免疫印迹法(Western-blotting)证实该重组蛋白可以与SS2阳性血清发生特异性反应。结论:本研究为重组蛋白的免疫保护应用奠定基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶血素 38kda蛋白 克隆 表达
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