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K-ras(12-Val)树突状细胞疫苗诱导抗胰腺癌免疫反应 被引量：2
1
作者 杨波 何杨 +4 位作者 孙冬林 邹岩 秦锡虎 黄伯华 吴翼伟 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第5期691-693,700,共4页
目的探讨构建K-ras(12-Val)树突状细胞(DC)疫苗体外诱导抗胰腺癌特异性免疫反应的可行性。方法采用健康人外周人单核细胞(PBMC)体外刺激分化的DC,负载K-ras(12-Val)多肽后诱导成熟,流式细胞仪测定其细胞表型;与PBMC混合培养扩增特异性... 目的探讨构建K-ras(12-Val)树突状细胞(DC)疫苗体外诱导抗胰腺癌特异性免疫反应的可行性。方法采用健康人外周人单核细胞(PBMC)体外刺激分化的DC,负载K-ras(12-Val)多肽后诱导成熟,流式细胞仪测定其细胞表型;与PBMC混合培养扩增特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),MTT法测定CTL对胰腺癌细胞和正常细胞的免疫杀伤活性。结果负载K-ras(12-Val)多肽的DC成熟后能较好表达突变位点并能有效地刺激T淋巴细胞活化,其诱导产生的CTL对表达该突变的胰腺癌细胞有较好的免疫杀伤作用,对正常组织无损伤作用。结论利用K-ras(12-Val)DC疫苗能成功诱导出较强的抗胰腺癌免疫反应,且具有高度特异性。 展开更多
关键词 k-ras多肽 树突状细胞 胰腺癌 免疫治疗
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负载k-ras抗原的树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肺癌细胞的体内杀伤作用 被引量：1
2
作者 朱登彦 党丽峰 +3 位作者 杨洋 刘东雷 吴恺 赵松 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2628-2630,共3页
目的 观察k-ras突变多肽致敏的树突状细胞（DC）诱导活化的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肺癌细胞的体内杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）1000 mg/L和白细胞介素4（IL-4） 500 mg/L诱导外周血DC,分别使用表达... 目的 观察k-ras突变多肽致敏的树突状细胞（DC）诱导活化的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对肺癌细胞的体内杀伤作用.方法 联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）1000 mg/L和白细胞介素4（IL-4） 500 mg/L诱导外周血DC,分别使用表达k-ras突变体的肺癌细胞抗原、单纯k-ras突变体抗原表位肽和k-ras突变体抗原表位肽阳离子纳米颗粒致敏DC,进而通过诱导刺激T淋巴细胞得到特异性的CTL.分别使用肺癌A549、NCH-446细胞株建立荷瘤裸鼠模型,以评价CTL体内抗肿瘤活性.结果 负载全瘤抗原的DC诱导产生的CTL对表达k-ras阳性（A549）的肺癌细胞具有较好的抑制作用,而对k-ras表达阴性（NCH-446）的肺癌细胞抑制作用与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 负载肿瘤抗原的DC诱导CTL能够显著抑制肿瘤的生长速度,进而提高荷瘤裸鼠的生存时间,表明其可增加特异性抗肿瘤作用. 展开更多
关键词 肺癌 树突状细胞 k-ras突变多肽 细胞毒性T细胞
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K-ras抗原致敏的DC诱导CTL对胰腺癌体内杀伤活性的研究
3
作者 谭广 徐立 +3 位作者 方艳秋 陶钢 王忠裕 谭岩 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期421-425,共5页
目的:研究K-ras多肤的致敏树突状细胞(DC)活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对胰腺癌的体内外杀伤作用。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4诱导培养外周血DC。表达K-ras突变体的胰腺癌细胞株全瘤、单纯K-ras突... 目的:研究K-ras多肤的致敏树突状细胞(DC)活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对胰腺癌的体内外杀伤作用。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4诱导培养外周血DC。表达K-ras突变体的胰腺癌细胞株全瘤、单纯K-ras突变体多肽和K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒分别致敏DC。致敏DC刺激T淋巴细胞得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。Patu8988、SW1990细胞系制备荷瘤裸鼠模型评价CTL体内抗肿瘤活性。结果:负载全瘤抗原的DC其诱导产生的CTL对胰腺癌有较好的抑制,负载单纯K-ras(12-Val)突变体多肽、K-ras(12-Val)突变体表位肽阳离子纳米颗粒的DC其诱导产生的CTL对表达K-ras(12-Val)突变体阳性(Patu8988)的胰腺癌有较特异的抑制作用,而对K-ras(12-Val)突变体阴性(SW1990)的胰腺癌的抑制作用与对照组比较无显著性差异结论:负载肿瘤抗原的DC诱导的CTL可显著提高对荷瘤裸鼠的生存时间,抑制肿瘤的生长速度,并显示其可增加抗肿瘤特异性。 展开更多
关键词 胰腺癌 树突状细胞 k-ras多肽 细胞毒T淋巴细胞
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负载K-ras抗原的DCs诱导CTLs对胰腺癌的体外杀伤作用
4
作者 徐立 方艳秋 +2 位作者 谭广 王忠裕 谭岩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1075-1079,1091,共6页
目的:研究负载K-ras(12-Val)抗原的树突状细胞(DCs)活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对胰腺癌的体外杀伤作用。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导培养外周血DCs。表达K-ras突变体的胰腺... 目的:研究负载K-ras(12-Val)抗原的树突状细胞(DCs)活化的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对胰腺癌的体外杀伤作用。方法:联合应用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导培养外周血DCs。表达K-ras突变体的胰腺癌细胞株全瘤、单纯K-ras突变体多肽和K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒分别致敏DCs。流式细胞仪测定DCs表面标志;3H-TdR掺入法检测细胞增殖,125I-UdR法检测CTL杀伤效应,ELISA试剂盒检测IL-12和IFN-γ。结果:与单纯K-ras(12-Val)突变体多肽相比,K-ras(12-Val)突变体表位肽阳离子纳米颗粒在低浓度时即可被DCs有效提呈(P<0.05);负载全瘤抗原的DCs诱导产生的CTL与负载单纯K-ras(12-Val)突变体多肽、K-ras(12-Val)突变体表位肽阳离子纳米颗粒诱导组相比对Patu8988(K-ras+)及SW1990(K-ras-)胰腺癌细胞均有明显杀伤活性(P<0.05),负载单纯K-ras(12-Val)突变体多肽、K-ras(12-Val)突变体表位肽阳离子纳米颗粒的DCs诱导产生的CTL对Patu8988(K-ras+)细胞株有特异性杀伤活性(P<0.05),而对SW1990(K-ras-)细胞株无杀伤作用(P>0.05)。结论:低浓度K-ras(12-Val)突变体表位肽阳离子纳米颗粒作用后,在短时间即可被DCs有效提呈,且诱导产生的CTL对表达K-ras(12-Val)突变体的胰腺癌细胞株有特异性杀伤活性。 展开更多
关键词 胰腺癌 树突状细胞 k-ras多肽
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体外负载HSP70-K-ras突变多肽复合物树突细胞的抗胰腺癌作用 被引量：2
5
作者 魏小雷 郁燕 +2 位作者 曹俊 刘文佳 邹晓平 《胃肠病学》 2009年第1期16-21,共6页
背景：K-ras突变多肽难以很好地被树突细胞（DC）捕获,诱导的抗肿瘤效应有限。目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）-K-ras突变多肽复合物体外负载于DC的抗胰腺癌作用。方法：使HSP70与K-ras突变多肽在体外结合成复合物,负载于由人外周血单... 背景：K-ras突变多肽难以很好地被树突细胞（DC）捕获,诱导的抗肿瘤效应有限。目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）-K-ras突变多肽复合物体外负载于DC的抗胰腺癌作用。方法：使HSP70与K-ras突变多肽在体外结合成复合物,负载于由人外周血单个核细胞体外诱导分化获得的DC。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测DC的细胞因子分泌能力,流式细胞仪分析DC负载抗原前后的细胞表型变化,胆囊收缩素（CCK）-8法检测负载抗原后DC对同基因淋巴细胞的促增殖作用,以及激活的同基因淋巴细胞对人胰腺癌细胞株Patu8988、PANC-1和正常人肝细胞株L-02的细胞毒作用。结果：HSP70-K-ras突变多肽复合物可激活DC,最适浓度为0.75μg/ml,可使DC的白细胞介素（IL）-12、肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌量和细胞表面CD80、CD83、CD86、HLA-DR表达率显著增高。0.75μg复合物可有效激活1×10^6个DC,刺激1×10^7个同基因淋巴细胞增殖,特异性杀伤具有相同12位点突变类型（GGT→GTT）的Patu8988细胞,杀伤率达52.9%±5.1%,对不同突变类型的PANC-1细胞（GGT→GAT）和正常人肝细胞杀伤作用不明显。结论：负载HSP70-K-ras突变多肽复合物的DC活性增强,可刺激同基因淋巴细胞产生高效而特异的抗胰腺癌效应。 展开更多
关键词 HSP70热休克蛋白质类 k-ras突变多肽 树突细胞 胰腺肿瘤
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树突细胞负载K-ras突变多肽诱导抗胰腺癌免疫反应 被引量：6
6
作者 何杨 杨波 阮长耿 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期559-562,共4页
背景与目的:由于大多数肿瘤抗原尚未确定,所以肿瘤的免疫治疗还处于临床探索阶段。k-ras原癌基因在胰腺癌中有特异性的表达,突变位点恒定,不失为一个良好的免疫靶位。本研究探讨以k-ras基因为靶点体外诱导胰腺癌被动免疫治疗的可行性,... 背景与目的:由于大多数肿瘤抗原尚未确定,所以肿瘤的免疫治疗还处于临床探索阶段。k-ras原癌基因在胰腺癌中有特异性的表达,突变位点恒定,不失为一个良好的免疫靶位。本研究探讨以k-ras基因为靶点体外诱导胰腺癌被动免疫治疗的可行性,为临床进行胰腺癌个体化治疗提供实验依据。方法:利用RT-PCR法扩增k-ras基因,通过流式细胞术检测k-ras癌基因突变类型。合成含突变位点的多肽,负载外周血单核细胞来源的树突细胞(dendritic cell,DC),检测其表达率,对T细胞进行激发活化,M TT法检测肿瘤特异性T细胞对胰腺癌细胞Patu8988的杀伤作用。结果:Patu8988胰腺癌细胞株12位密码子点突变为GGT→GTT,12位氨基酸突变为缬氨酸。合成突变多肽能有效地在树突细胞表达突变位点,激发的肿瘤特异性T细胞(cytotoxic T lym phocytes,CTLs)能有效地杀伤相应的肿瘤细胞。结论:突变多肽能有效地诱导免疫细胞杀伤含k-ras突变基因的胰腺癌细胞,从而为胰腺癌的免疫治疗提供实验依据。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 k—ras突变多肽 树突细胞 免疫治疗
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K-ras突变多肽致敏树突状细胞对CCL19、CCL22和fascin-1表达的影响 被引量：1
7
作者 江良县 谭广 +2 位作者 王忠裕 窦春鹏 单路娟 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2010年第9期917-921,共5页
目的探讨K-ras突变多肽致敏树突状细胞(DC)对细胞趋化因子CCL19、CCL22和细胞骨架蛋白fascin-1表达的影响。方法联合应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素(IL)-4诱导培养外周血DC,收集培养7d后的DC并分为未负载组(加入RPMI164... 目的探讨K-ras突变多肽致敏树突状细胞(DC)对细胞趋化因子CCL19、CCL22和细胞骨架蛋白fascin-1表达的影响。方法联合应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素(IL)-4诱导培养外周血DC,收集培养7d后的DC并分为未负载组(加入RPMI1640培养液50μg/ml)和K-ras负载组(加入K-ras突变多肽50μg/ml).流式细胞仪测定负载前、后DC表面标志CD1a、CD80及CD86;扫描电镜和透射电镜观察负载K-ras突变多肽后的DC形态结构;ELISA法检测2组DC培养上清液中IL-12、CCL19和CCL22的表达;Westernblot法测定2组DC骨架蛋白fascin-1的表达。结果①K-ras突变多肽负载DC后,CD1a、CD80及CD86表面分子表达率明显高于负载前(P<0.01).②扫描电镜下见负载后的DC呈花瓣状、树枝样突起;透射电镜下见负载后的DC形态非常不规则,树枝状或毛刺状的突起明显增多。③K-ras负载组负载后不同时相(6、12、24及48h)的IL-12、CCL19及CCL22的表达水平明显高于未负载组(P<0.01).④K-ras负载组fascin-1蛋白的表达水平也高于未负载组(P<0.01).结论K-ras突变多肽能够促进DC成熟,并使细胞趋化因子和骨架蛋白表达水平增加,能够增强DC游走迁移。 展开更多
关键词 树突状细胞 趋化因子 细胞骨架蛋白 k-ras突变多肽
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