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基于HepG2细胞胰岛素抵抗模型探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用 被引量：8
1
作者 吴亚柳 马玉 +3 位作者 于曼丽 王文栋 郝敏 常晓彤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1317-1322,1328,共7页
目的:通过体外建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,检测胰岛素抵抗状态下微小RNA-7-5p(miR-7-5p)及其预测靶基因Itch的差异表达,初步探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用及其与胰岛素抵抗的关系。方法:采用适宜浓度的软脂酸诱导Hep G2细胞,建... 目的:通过体外建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,检测胰岛素抵抗状态下微小RNA-7-5p(miR-7-5p)及其预测靶基因Itch的差异表达,初步探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用及其与胰岛素抵抗的关系。方法:采用适宜浓度的软脂酸诱导Hep G2细胞,建立体外胰岛素抵抗模型;基于生物信息学分析预测miR-7-5p可能作用的靶基因及其富集的相关信号通路;运用RT-q PCR和Western blot技术检测在胰岛素抵抗状态下miR-7-5p和Itch的表达变化。结果:0.25 mmol/L的软脂酸作用于Hep G2细胞24 h可诱导细胞产生胰岛素抵抗,RT-q PCR检测表明,与阴性对照组相比,胰岛素抵抗组的miR-7-5p表达下调(P<0.01)。生物信息学分析结果表明,miR-7-5p有相当数量的靶基因富集于泛素-蛋白酶体系统,其中E3泛素连接酶Itch基因是与胰岛素抵抗最为相关的靶基因;Western blot结果揭示,在胰岛素抵抗状态下,Hep G2细胞中Itch蛋白表达上调(P<0.01)。结论:miR-7-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过靶向调控Itch基因的表达,进而直接或间接影响胰岛素信号通路的正常转导。 展开更多
关键词 胰岛素抵抗 HEPG2细胞 微小RNA-7-5p itch基因
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超声微泡介导沉默T淋巴细胞Itch基因对胃癌MFC细胞免疫杀伤作用的实验研究 被引量：1
2
作者 刘丹 张煜 +2 位作者 彭莉晴 周静 邹庆伟 《中国现代医学杂志》 CAS 2018年第9期22-27,共6页
目的利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)沉默T淋巴细胞Itch基因表达,观察转染T细胞对胃癌MFC细胞的免疫杀伤效率。方法免疫磁珠分离T淋巴细胞,构建靶向Itch基因的sh RNA表达质粒,超声微泡介导转染48 h后,流式细胞仪分析T细胞转染成功率,Wes... 目的利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)沉默T淋巴细胞Itch基因表达,观察转染T细胞对胃癌MFC细胞的免疫杀伤效率。方法免疫磁珠分离T淋巴细胞,构建靶向Itch基因的sh RNA表达质粒,超声微泡介导转染48 h后,流式细胞仪分析T细胞转染成功率,Western blot测定T细胞Itch蛋白表达。转染24 h后,流式细胞仪检测T淋巴细胞活化早期标志CD69表达。转染72 h后,观察对比单纯T淋巴细胞、阴性对照T淋巴细胞及转染T淋巴细胞与小鼠胃癌MFC细胞共培养时肿瘤杀伤率。结果利用UTMD技术介导sh RNA转染效率达到51.9%,Itch蛋白表达能被有效抑制。转染24 h后,转染组T淋巴细胞早期活化标志CD69表达较其他组更高。转染72 h后,与阴性对照组和空白组相比,在不同的效靶比水平(10∶1、20∶1、40∶1),转染T淋巴细胞杀瘤活性均增强。结论利用UTMD技术介导sh RNA转染能有效沉默Itch基因表达,促进T淋巴细胞免疫活性,增强T淋巴细胞对胃癌MFC细胞的免疫杀伤效率。 展开更多
关键词 itch 超声介导微泡破裂技术 基因沉默 胃癌 免疫治疗
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特异性小干扰RNA沉默Itch基因增强小鼠T细胞对MFC胃癌细胞的免疫杀伤作用
3
作者 粟英 兰亚明 +2 位作者 卢义琼 田国红 胡烈献 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期777-782,共6页
背景与目的:Itch蛋白是一种具有调节T细胞免疫应答起始的关键分子,属于E3泛素转移酶家族,广泛参与细胞内多种信号蛋白如ZAP70、P85、VAV、PLC-γ和PKC-θ等的泛素化修饰过程,在肿瘤诱导机体免疫耐受中起着重要作用。Itch通过调节T细胞... 背景与目的:Itch蛋白是一种具有调节T细胞免疫应答起始的关键分子,属于E3泛素转移酶家族,广泛参与细胞内多种信号蛋白如ZAP70、P85、VAV、PLC-γ和PKC-θ等的泛素化修饰过程,在肿瘤诱导机体免疫耐受中起着重要作用。Itch通过调节T细胞表面受体活性及转移生长因子-β信号通路来介导T细胞免疫无反应性,诱导外周组织Treg细胞增殖。因此,通过改变Itch蛋白表达活性有望成为一种治疗自体免疫性疾病和肿瘤的有效途径。我们利用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默T细胞Itch基因的表达,观察转染T细胞对小鼠MFC胃癌细胞的体外免疫杀伤作用。方法:分离615小鼠脾脏T细胞,筛选高效特异性沉默Itch基因的siRNA序列转染T细胞,蛋白质印迹法检测各分组Itch蛋白的表达水平;转染72 h后,利用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IL-2、INF-γ分泌情况,比较空白组、空转组及转染组T细胞与小鼠MFC胃癌细胞混合培养肿瘤杀伤率。结果:转染48 h后,与对照组相比,转染T细胞Itch蛋白表达率降低至16%;转染72 h后,检测转染组、空转组、空白组细胞因子IL-2分泌水平分别为(1 891.96±141.91)pg/mL,(1 241.69±91.67)pg/mL,(1 175.03±89.14)pg/mL(P<0.001),转染组、空转组、空白组细胞因子INF-γ分泌水平分别为(958.33±75.46)pg/mL,(683.33±66.67)pg/mL,(691.72±68.72)pg/mL(P<0.05)。在体外实验中,与空白组及空转组T细胞相比,转染组T细胞能更高效地杀伤小鼠MFC胃癌细胞,最高杀瘤率达到(54.18±2.96)%。结论:利用特异性siRNA技术沉默Itch基因能够促进小鼠T细胞因子IL-2、INF-γ分泌,增强T细胞对小鼠MFC胃癌细胞的体外免疫杀伤作用。 展开更多
关键词 基因沉默 T淋巴细胞 胃肿瘤 免疫疗法
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超声微泡介导Itch基因沉默增强T细胞对肺腺癌细胞LA795免疫杀伤作用
4
作者 毛宁 熊弢 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第4期516-521,共6页
目的利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)沉默T细胞Itch基因表达,观察转染T细胞对肺腺癌细胞LA795的体外免疫杀伤效率。方法磁珠分选纯化T细胞,构建靶向Itch基因的shRNA表达质粒,超声微泡介导转染48 h后,荧光显微镜和流式细胞仪评估细胞转... 目的利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)沉默T细胞Itch基因表达,观察转染T细胞对肺腺癌细胞LA795的体外免疫杀伤效率。方法磁珠分选纯化T细胞,构建靶向Itch基因的shRNA表达质粒,超声微泡介导转染48 h后,荧光显微镜和流式细胞仪评估细胞转染效率,Western blot检测Itch蛋白表达。转染72 h后,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-2和IFN-γ分泌水平,观察对比单纯T细胞、阴性对照T细胞及转染T细胞与小鼠肺腺癌细胞LA795共培养时肿瘤杀伤率。结果利用UTMD技术介导shRNA转染效率达到52.3%±3.8%,Itch蛋白表达能够有效被抑制。转染72 h后,超声微泡介导沉默Itch基因显著增加T细胞因子IL-2和IFN-γ分泌水平(P<0.05);与空白组或阴性对照组T细胞相比,在不同的靶效比水平(10∶1、20∶1、40∶1),转染T细胞杀瘤活性均明显增高(P<0.05)。结论利用UTMD技术介导shRNA转染能有效沉默Itch基因表达,促进T细胞免疫活性,增强T细胞对小鼠肺腺癌细胞LA795的体外免疫杀伤效率。 展开更多
关键词 itch 超声介导微泡破裂技术 基因沉默 肺肿瘤 免疫治疗
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