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反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列
被引量：
8
1
作者
李秋莉
高晓蓉
+3 位作者
范琦
袁晓东
刘大伟
安利佳
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2001年第11期17-19,共3页
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法...
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。
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关键词
反向嵌套
pcr
辽宁碱蓬
甜菜碱醛脱氢酶
5′cDNA
末端序列
基因工程
RACE
反转录
克隆
扩增效率
下载PDF
职称材料
骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增
被引量：
1
2
作者
杨银凤
唐博
+1 位作者
曹贵方
王永胜
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期264-268,共5页
获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设...
获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设计一条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功的克隆了骆驼β_防御素caBD_1cD NA的5′末端序列。本研究扩增出的caBD_1cDNA序列全322bp,其中包含一个由192bp组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD_1肽。
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关键词
反向嵌套
pcr
5’RACE
3’RACE
Β-防御素
骆驼
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职称材料
反向嵌套PCR技术扩增驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列
3
作者
朱雪敏
张义
+1 位作者
张剑平
杨银凤
《经济动物学报》
CAS
2008年第2期72-75,共4页
为了研究Ghrelin在驯鹿生长发育过程中的作用和功能,以驯鹿为研究对象,采用反向嵌套PCR RACE技术原理,根据已知的序列设计1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将反转录成的cDNA进行...
为了研究Ghrelin在驯鹿生长发育过程中的作用和功能,以驯鹿为研究对象,采用反向嵌套PCR RACE技术原理,根据已知的序列设计1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地扩增了驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列。与锚定PCR相比,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。
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关键词
反向嵌套
pcr
5′RACE
GHRELIN
驯鹿
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职称材料
富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达
被引量：
3
4
作者
杨键
曾丽娟
+4 位作者
廖思明
王青艳
杜丽琴
韦宇拓
黄日波
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期56-60,共5页
利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连...
利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接,导入Escherichia coliJM109中,IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、SephacrylS-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别。
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关键词
宏基因组
反向-巢式
pcr
侧翼序列
Α-淀粉酶
原文传递
题名
反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列
被引量：
8
1
作者
李秋莉
高晓蓉
范琦
袁晓东
刘大伟
安利佳
机构
大连理工大学生物工程系
宝生物工程大连有限公司
出处
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2001年第11期17-19,共3页
基金
辽宁省教育厅资助项目 (项目编号为 2 0 0 42 0 98)
文摘
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。
关键词
反向嵌套
pcr
辽宁碱蓬
甜菜碱醛脱氢酶
5′cDNA
末端序列
基因工程
RACE
反转录
克隆
扩增效率
Keywords
inverse
nested pcr
,
S.
Liaotungensis,
Betaine
aldehyde
dehydrogenase,
5′cDNA
end
分类号
Q503 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增
被引量：
1
2
作者
杨银凤
唐博
曹贵方
王永胜
机构
内蒙古农业大学动物胚胎与发育生物学研究室
乌兰察布盟农牧学校
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期264-268,共5页
基金
国家自然科学基金(30160063)
内蒙古自治区高等学校科学研究重点领域(ZL010144)资助项目
文摘
获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设计一条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功的克隆了骆驼β_防御素caBD_1cD NA的5′末端序列。本研究扩增出的caBD_1cDNA序列全322bp,其中包含一个由192bp组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD_1肽。
关键词
反向嵌套
pcr
5’RACE
3’RACE
Β-防御素
骆驼
Keywords
inverse
nested pcr
5′RACE
3′RACE
β_defensin
camel
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
反向嵌套PCR技术扩增驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列
3
作者
朱雪敏
张义
张剑平
杨银凤
机构
内蒙古农业大学动物科学与医学学院
出处
《经济动物学报》
CAS
2008年第2期72-75,共4页
基金
内蒙古农业大学博士启动基金(BJ04-2)
文摘
为了研究Ghrelin在驯鹿生长发育过程中的作用和功能,以驯鹿为研究对象,采用反向嵌套PCR RACE技术原理,根据已知的序列设计1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功地扩增了驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列。与锚定PCR相比,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。
关键词
反向嵌套
pcr
5′RACE
GHRELIN
驯鹿
Keywords
inverse
nested pcr
5′
RACE
ghrelin
reindeer
分类号
Q523.8 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达
被引量：
3
4
作者
杨键
曾丽娟
廖思明
王青艳
杜丽琴
韦宇拓
黄日波
机构
广西大学生命与科学技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室
广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期56-60,共5页
基金
国家科技支撑计划课题(2007BAD75B05)
国际科技合作项目(2008DFA30710)资助项目
文摘
利用反向-巢式PCR(IN-PCR)从富集土壤宏基因组DNA中克隆到一种α-淀粉酶基因的全序列,其基因登录号为GU045523,测序分析显示与来自Bacillussp.KR-8104耐酸淀粉酶不完整基因同源性为99%。将获得的α-淀粉酶成熟肽基因与表达载体pSE380连接,导入Escherichia coliJM109中,IPTG诱导表达。粗酶液经Ni-NTA、SephacrylS-200纯化后测定酶学性质:重组酶GXAA的最适作用pH为7.0,最适作用温度为75℃,对可溶性淀粉的Km值为11.6g/L。构建突变子E27G、A450T、E27G-A450T,其酶学性质与原始酶没有显著差别。
关键词
宏基因组
反向-巢式
pcr
侧翼序列
Α-淀粉酶
Keywords
Metagenome
inverse
-
nest
pcr
Flanking
unknown
sequence
α-Amylase
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列
李秋莉
高晓蓉
范琦
袁晓东
刘大伟
安利佳
《高技术通讯》
EI
CAS
CSCD
2001
8
下载PDF
职称材料
2
骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增
杨银凤
唐博
曹贵方
王永胜
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
1
下载PDF
职称材料
3
反向嵌套PCR技术扩增驯鹿Ghrelin cDNA 5′末端序列
朱雪敏
张义
张剑平
杨银凤
《经济动物学报》
CAS
2008
0
下载PDF
职称材料
4
富集宏基因组DNA中α淀粉酶全长基因的克隆及重组表达
杨键
曾丽娟
廖思明
王青艳
杜丽琴
韦宇拓
黄日波
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
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