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抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体对K562细胞在裸鼠体内生长的影响 被引量:4
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作者 徐冬 宋俊敏 +5 位作者 呼莹 郭虹 曹德骏 汪萍 刘辉 赵春华 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期11-14,共4页
目的观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其在裸鼠体内生长的影响。方法应用基因重组技术构建逆转录病毒载体MSCV-ibE-IRES-eGFP,将胞内抗体基因转导K562细胞,观察胞内... 目的观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其在裸鼠体内生长的影响。方法应用基因重组技术构建逆转录病毒载体MSCV-ibE-IRES-eGFP,将胞内抗体基因转导K562细胞,观察胞内抗体的表达和细胞内c-ABL及BCR/ABL蛋白酪氨酸激酶活性的变化;将表达胞内抗体的细胞与对照组K562细胞及转导空载体的细胞分别移植裸鼠,动态观察肿瘤的生长。结果获得表达胞内抗体基因的细胞模型:K562-ibE,其靶蛋白酪氨酸激酶活性明显受抑。移植裸鼠后第14,21,28天肿瘤体积均小于对照组的1/2。结论转导抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的细胞在裸鼠体内生长明显受抑制,这可能与胞内抗体显著抑制细胞内BCR/ABL蛋白酪氨酸激酶活性,阻断BCR/ABL信号途径,促进细胞凋亡,降低了细胞的体内致肿瘤性有关。 展开更多
关键词 胞内抗体 K562细胞 BCR/ABL 酪氨酸激酶 致肿瘤性 慢性粒细胞白血病 裸鼠 体内生长
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内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶胞内抗体对肿瘤细胞侵袭和增殖的抑制作用 被引量:5
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作者 沈恩允 王维刚 +2 位作者 李毅 张胜华 甄永苏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1005-1010,共6页
背景与目的:侵袭转移是恶性肿瘤细胞的重要特性,Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用。我们通过胞内抗体技术,阻断Ⅳ型胶原酶的分泌,以期达到抑制恶性肿瘤细胞侵袭转移的效果。... 背景与目的:侵袭转移是恶性肿瘤细胞的重要特性,Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用。我们通过胞内抗体技术,阻断Ⅳ型胶原酶的分泌,以期达到抑制恶性肿瘤细胞侵袭转移的效果。方法:构建编码可在内质网滞留的抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达载体pcDNA3.1-ER.scFv,并转染入人巨细胞肺癌PG细胞系内。Westernblot检测pcDNA3.1-ER.scFv的表达,免疫共沉淀实验分析胞内抗体ER.scFv在PG细胞内与靶蛋白相互作用情况,明胶酶谱检测Ⅳ型胶原酶的分泌,以及体外侵袭和增殖实验。结果:ER.scFv在PG细胞内表达,而且能够识别和结合靶蛋白基质金属蛋白酶9。通过胞内抗体的基因转染,显著抑制了Ⅳ型胶原酶的功能和活性。ER.scFv转染的PG细胞较野生型和空白质粒组,侵袭能力明显降低,抑制率为76.3%(P<0.05),在Matrigel上进行细胞培养,ER.scFv对PG细胞有明显的抗增殖效果。结论:内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌这一关键通路中抑制肿瘤细胞Ⅳ型胶原酶的活性,进而抑制了肿瘤侵袭和增殖,在肿瘤基因治疗中具有应用前景。 展开更多
关键词 Ⅳ型胶原酶 胞内抗体 肿瘤侵袭 增殖 基因治疗
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纳米抗体应用于感染疾病的研究现状 被引量:3
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作者 王志明 杨立霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期563-568,共6页
纳米抗体独特的分子特性使其适用于疾病诊断治疗的许多不同领域。抗病毒、细菌、寄生虫感染以及毒素中和等应用领域的纳米抗体正处于不同的研发阶段。研发中的纳米抗体不仅以病原体表面抗原为靶点,调动宿主免疫系统的补体固定和调理吞... 纳米抗体独特的分子特性使其适用于疾病诊断治疗的许多不同领域。抗病毒、细菌、寄生虫感染以及毒素中和等应用领域的纳米抗体正处于不同的研发阶段。研发中的纳米抗体不仅以病原体表面抗原为靶点,调动宿主免疫系统的补体固定和调理吞噬杀伤来清除病原体,而且中和病原体产生的毒素,显著降低对宿主细胞结构和功能的损害作用,降低感染的严重程度。抗体工程技术突飞猛进的发展,推动了抗感染纳米抗体的探索及尝试。临床试验中的2个抗病毒纳米抗体均处于试验后期阶段,相关结果尚需进一步观察。不断的研究和推进或将使纳米抗体在未来的感染疾病应用中占据一席之地。 展开更多
关键词 纳米抗体 感染性疾病 胞内抗体 转移抗体 非洲锥虫病 解毒剂
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细胞内单域抗体的研究及应用进展
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作者 潘永刚 刘晓志 +1 位作者 高健 王志明 《实用药物与临床》 CAS 2018年第4期457-463,共7页
来自骆驼或鲨鱼的单域抗体(Single domain antibodies,sd Ab)仅包含抗体的重链可变区,而从人抗体中筛选到的人sd Ab中包含重链(Heavy chain,VH)或轻链(Light chain,VL)的可变区。与完整抗体和sc Fv(Single chain antibody fragment)相比... 来自骆驼或鲨鱼的单域抗体(Single domain antibodies,sd Ab)仅包含抗体的重链可变区,而从人抗体中筛选到的人sd Ab中包含重链(Heavy chain,VH)或轻链(Light chain,VL)的可变区。与完整抗体和sc Fv(Single chain antibody fragment)相比,sd Ab是体外和体内都稳定的非聚合分子。与sc Fv片段不同,sd Ab是细胞质/细胞核蛋白质的新型抑制剂,并可以在细胞质中正确折叠。sd Ab能特异性抑制翻译后修饰,如磷酸化位点,构象异构体或蛋白质的相互作用区域,这些区域不适合使用基因敲除及RNAi技术进行研究。作为细胞质/细胞核蛋白质的抑制剂,使用sd Ab的研究数量持续增加,同时使用无需免疫动物的合成单域抗体文库中,研究者筛选出一些有成药应用前景的药物分子。目前,研究涉及的抗原靶点包括病毒蛋白、癌相关蛋白、毒素、神经系统相关蛋白、植物和果蝇蛋白等,可以针对几乎所有的细胞质/细胞核中的抗原表位,进行功能性sd Ab的筛选。逃逸蛋白结构和细胞穿透肽的高效转染的研究,拓宽了sd Ab的应用领域。新一代细胞特异性纳米颗粒,将携带细胞质/细胞核sd Ab作为蛋白抑制剂,开拓病毒感染及癌症新的治疗领域。 展开更多
关键词 胞内抗体 单域抗体 scFv片段 细胞质/细胞核内抗体 骆驼源VHH 鲨鱼源vNAR 人重链可变区 人轻链可变区
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基因工程抗体片段——谱写抗体家族的新乐章 被引量:3
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作者 崔恒 高磊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期467-472,共6页
随着分子生物学技术的进步和抗体基因结构的阐明,以小分子抗体为基础并经基因工程改建从而用于研究和临床诊治的大量基因工程抗体片段应运而生。其中,可将生物学活性效应桥连于治疗靶标的双特异性抗体、同时增强抗体效能及细胞毒靶向性... 随着分子生物学技术的进步和抗体基因结构的阐明,以小分子抗体为基础并经基因工程改建从而用于研究和临床诊治的大量基因工程抗体片段应运而生。其中,可将生物学活性效应桥连于治疗靶标的双特异性抗体、同时增强抗体效能及细胞毒靶向性的免疫结合物、以独特的单域结构在生物技术和临床医学等方面倍受青睐的纳米抗体,以及在细胞内特定部位表达的细胞内抗体是近年来研究最活跃的几个领域。凭借免疫原性弱、组织渗透性强、低毒性及制备简便等优势,基因工程抗体片段较之单克隆抗体受到了更广泛的关注与认可。尽管大多数处于临床开发的抗体片段的安全性和有效性还有待确定,但基因工程抗体片段的研发必将大大提高人类疾病尤其是肿瘤的诊治水平。 展开更多
关键词 抗体片段 基因工程 双特异性抗体 免疫结合物 纳米抗体 细胞内抗体 抗肿瘤作用
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抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用 被引量:1
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作者 周立宏 朱迅 +4 位作者 曹玉华 王磊 陈勇 杜柏榕 李桂英 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期703-706,711,共5页
目的:构建细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因的真核表达载体并分析其对乳腺癌细胞增殖的抑制效应。方法:利用PCR技术和分子克隆技术,构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因(AD5N)的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导... 目的:构建细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因的真核表达载体并分析其对乳腺癌细胞增殖的抑制效应。方法:利用PCR技术和分子克隆技术,构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因(AD5N)的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法转染MCF-7细胞,RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot和流式细胞术分析该胞内抗体基因AD5N在MCF-7细胞中的表达、定位及抑瘤效应。结果:经限制性内切酶分析及序列分析发现,成功构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体(AD5N)基因的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,基因片段为855 bp,编码285个氨基酸,分子量约为30 kD。RT-PCR、免疫荧光及Western blot实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的MCF-7细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞核区域。与野生型MCF-7细胞和转染空质粒的细胞相比,在MCF-7/pcDNA3.1-AD5N细胞中AD5N的表达可明显抑制MCF-7细胞增殖,显著诱导细胞凋亡(P<0.01),使G0-G1期细胞周期指数增高12.64%,S期指数下降15.22%,凋亡细胞指数上升9.15%。结论:细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,可有效抑制乳腺癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 CYCLIN D1 胞内抗体 核定位 增殖 乳腺癌
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Intracellular expression of a single-chain antibody directed against type IV collagenase inhibits the growth of lung cancer xenografts in nude mice
7
作者 王维刚 张胜华 +3 位作者 李毅 徐琳娜 周京华 甄永苏 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2000年第4期433-441,共9页
It was documented that type IV collagenase with two subtypes of 72 ku/MMP-2 and 92 ku/MMP-9 plays an important role in tumor invasion and metastasis. The endoplasmic reticulum (ER)- retained, single chain Fv antibody ... It was documented that type IV collagenase with two subtypes of 72 ku/MMP-2 and 92 ku/MMP-9 plays an important role in tumor invasion and metastasis. The endoplasmic reticulum (ER)- retained, single chain Fv antibody fragment (scFv) was used to inhibit the function of type IV collagenase. For expression in mammalian cells, the assembled scFv M97 gene with ER retention signal encoding 6 additional amino acids (SEKDEL) was reamplified by PCR. The amplified fragments were cloned into the pcDNA3.1 vector. The resulting plasmid was sequenced and then introduced into PG cells, a highly metastatic human lung cancer cell line, by lipofectAMINE method. The result of intrabody gene therapy showed that type IV collegenase expression was down regulated significantly as measured by ELISA. The biological behavior of PG cell, such as the ability of in vitro invasion through Matrigel, colony formation on soft agar, was also inhibited by scFv M97 transfection. Animal experiments in a xenograft model of human lung cancer showed that scFv M97 transfection significantly prolonged the survival time of nude mice. The results indicate that intracellular antibody technology represents a novel and efficient way to abrogate selectively the activity of type IV collagenase. 展开更多
关键词 INTRACELLULAR ANTIBODY (intrabody) type IV COLLAGENASE cancer invasion and metastasis gene therapy.
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抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌HeLa细胞的影响
8
作者 周立宏 朱迅 +4 位作者 曹玉华 陈勇 田宇 王磊 李桂英 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期942-944,948,共4页
目的:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌细胞增殖的抑制效应分析。方法:将携带抗Cyclin D1胞内抗体AD5N的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法稳定转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性细胞株,进一步通过Westernblot、MTT法及流式细... 目的:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N对宫颈癌细胞增殖的抑制效应分析。方法:将携带抗Cyclin D1胞内抗体AD5N的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法稳定转染宫颈癌HeLa细胞,G418筛选阳性细胞株,进一步通过Westernblot、MTT法及流式细胞术分析该胞内抗体的细胞内表达和抗肿瘤效应。结果:AD5N在稳定筛选的细胞株中有效表达,与空细胞和空质粒转染的细胞株相比,明显抑制HeLa细胞增殖,并诱导细胞凋亡(P<0.01),细胞周期G0-G1期指数增高10.35%,S期指数下降15.77%,凋亡细胞指数上升6.38%。结论:抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,抑制宫颈癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 CYCLIND1 胞内抗体 增殖 宫颈癌
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抗Aβ42细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B的构建
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作者 车丽赫 吴江 +7 位作者 杨弋 李超 王明宇 王旭 杨广笑 王全颖 孙欣 杨宇 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期388-391,共4页
目的构建能够在细胞内特异性拮抗Aβ42的小分子细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B,为细胞内抗体技术用于AD的诊断和治疗提供新依据。方法根据GenBank提供的Aβ42单克隆抗体的已知序列,选取重链和轻链可变区(CDR1和CDR3)进行偶联,应用DNASIS计... 目的构建能够在细胞内特异性拮抗Aβ42的小分子细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B,为细胞内抗体技术用于AD的诊断和治疗提供新依据。方法根据GenBank提供的Aβ42单克隆抗体的已知序列,选取重链和轻链可变区(CDR1和CDR3)进行偶联,应用DNASIS计算机软件设计引物,通过两次PCR获得目的片段mAbA/B。将目的片段与pGEM-Teasy载体相连,限制性内切酶酶切鉴定重组质粒,Sanger单链末端终止法测出克隆的核苷酸序列。结果限制性内切酶EcoR I酶切pGEM-TEasy/mAbA/B,可见132bp或141bp的目的片段,与理论值一致;DNASIS软件分析测序结果与GenBank所报道的结果完全一致。限制性内切酶PamHI和BamH I联合酶切pssHG-CMV/TAT-6His-mAbA/B,琼脂糖凝胶电泳鉴定重组质粒,得到大小约为400bp的融合基因TAT-6His-mAbA/B目的片段,与理论值一致。结论通过PCR方法成功克隆了Aβ42小分子细胞内抗体TAT-6His-mAbA/B片段。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 细胞内抗体 SCFV
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抗ABL胞内抗体对K562细胞酪氨酸激酶活性的影响
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作者 徐冬 付晓达 魏枫 《天津医科大学学报》 2007年第4期539-542,共4页
目的:观察人慢性粒细胞白血病(CML)细胞转导抗ABL胞内抗体基因后,对其酪氨酸激酶活性的影响。方法:构建逆转录病毒载体MSCV-ib-IRES-eGFP,转导K562细胞,分选eGFP+的细胞,用RT-PCR检测胞内抗体mRNA的表达,观察细胞内BCR/ABL、c-ABL酪氨... 目的:观察人慢性粒细胞白血病(CML)细胞转导抗ABL胞内抗体基因后,对其酪氨酸激酶活性的影响。方法:构建逆转录病毒载体MSCV-ib-IRES-eGFP,转导K562细胞,分选eGFP+的细胞,用RT-PCR检测胞内抗体mRNA的表达,观察细胞内BCR/ABL、c-ABL酪氨酸激酶活性及细胞总蛋白酪氨酸激酶活性的变化。结果:获得表达胞内抗体的K562细胞:K562-ib-eGFP。RT-PCR证实胞内抗体mRNA在K562-ib-eGFP细胞内表达。与对照组相比,K562-ib-eGFP细胞内BCR/ABL和c-ABL蛋白酪氨酸激酶活性及总蛋白酪氨酸激酶活性明显受抑制。结论:转导抗ABL胞内抗体能有效降低CML细胞内ABL酪氨酸激酶活性,为进一步研究打下基础。 展开更多
关键词 胞内抗体 K562细胞 BCR/ABL 酪氨酸激酶
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胞内抗体及其研究进展
11
作者 洪美亚 曾冬云 龚兴国 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第3期425-428,共4页
胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内抗体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作。胞内抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗... 胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内抗体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作。胞内抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗的实验研究及潜在的临床治疗方面展示了广泛的应用前景。同时,胞内抗体可以用作分析靶蛋白功能的研究工具,是对传统的“基因剔除”转基因动物的一种有效补充。现从胞内抗体的设计及载体选择、肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗等方面对胞内抗体的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 胞内抗体 基因治疗 HIV-1 SCFV
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9.1C3胞内抗体基因的克隆及其对9.1C3分子表达的抑制作用
12
作者 欧阳为明 金伯泉 +3 位作者 夏海滨 刘飞 李德敏 张建平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期58-61,共4页
目的 获得 9 1C3胞内抗体基因的真核表达载体 ,观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的抑制作用 ,为进一步研究 9 1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法 设计引物 ,以 9 1C3ScFv基因为模板进行PCR扩增 ,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽... 目的 获得 9 1C3胞内抗体基因的真核表达载体 ,观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的抑制作用 ,为进一步研究 9 1C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法 设计引物 ,以 9 1C3ScFv基因为模板进行PCR扩增 ,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标记的E tag序列。回收纯化PCR产物 ,酶切后连接到pUC19载体上 ,并进行序列测定。序列正确后切下胞内抗体基因片段 ,重组到真核表达载体pRc/CMV中 ,酶切鉴定后用DEAE dextran方法瞬时转染真核细胞COS7,用胞内染色和Westernblot方法检测胞内抗体的表达。接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入 9 1C3阳性的Jurkat细胞 ,用FCM观察胞内抗体对 9 1C3分子表达的影响。结果 DNA序列测定证明 ,通过PCR成功地为 9 1C3ScFv引入了内质网定位所需的信号肽、KDEL及E tag序列 ,成功地构建了胞内抗体真核表达载体 ,通过胞内染色方法和Westernblot证明胞内抗体在COS7中得到表达。转入Jurkat细胞后发现胞内抗体能下调 9 1C3分子的表达水平。结论 以 9 1C3ScFv基因为模板PCR扩增得到 9 1C3胞内抗体基因 ,并构建了真核表达载体。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 SCFV 胞内抗体 表达载体 JURKAT细胞
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抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体抑制K562细胞体外生长
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作者 徐冬 付晓达 魏枫 《天津医科大学学报》 2008年第1期87-89,共3页
目的:观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其体外生长的影响。方法:通过表达抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的模型:K562-ibE-eGFP细胞,观察该细胞与对照细胞在有血清培养条件下的细胞生长和无血清培养条... 目的:观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其体外生长的影响。方法:通过表达抗ABL蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的模型:K562-ibE-eGFP细胞,观察该细胞与对照细胞在有血清培养条件下的细胞生长和无血清培养条件下细胞活力,并观察无血清培养24h细胞形态学变化。结果:与对照组相比,K562-ibE-eGFP细胞在有血清培养条件下生长受抑制,在无血清培养条件下细胞活力显著下降,并且无血清培养24h细胞出现早期凋亡形态变化。结论:通过转导抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体的方法能抑制慢性粒细胞白血病细胞体外生长,并促进其在无血清条件诱导下凋亡,这可能是细胞内酪氨酸激酶活性降低,BCR/ABL信号途径被阻断,逆转了BCR/ABL对细胞生长和凋亡的影响作用。 展开更多
关键词 胞内抗体 K562细胞 BCR/ABL 酪氨酸激酶
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MHC-Ⅰ细胞内抗体重组腺相关病毒载体的构建
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作者 王小平 张瑞斌 +5 位作者 朱彬 高庆贞 靖永胜 任万军 王璞 王琪 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第12期37-40,46,共5页
目的构建Ⅰ型主要组织相容性复合体(MHC-Ⅰ)重组腺相关病毒载体(rAAV)。方法合成内质网滞留型MHC-Ⅰ细胞内抗体的基因片段,测序正确后酶切获取该胞内抗体的基因片段,将该基因片段插入质粒pSSHG/CMV的EcoR I-BamH I位点构建pSSHG/MHC-Ⅰ... 目的构建Ⅰ型主要组织相容性复合体(MHC-Ⅰ)重组腺相关病毒载体(rAAV)。方法合成内质网滞留型MHC-Ⅰ细胞内抗体的基因片段,测序正确后酶切获取该胞内抗体的基因片段,将该基因片段插入质粒pSSHG/CMV的EcoR I-BamH I位点构建pSSHG/MHC-Ⅰ。用磷酸钙共沉淀法将腺病毒辅助质1粒pFG140、包装质粒pAAV/Ad及已构建的pSSHG/MHC-Ⅰ三质粒在293细胞系中同源重组包装rAAV。采用地高辛标记的斑点杂交方法测定rAAV滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/MHC-Ⅰ及人类MHC-Ⅰ胞内抗体重组腺相关病毒载体(rAAV-MHCI),经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为6.88×1010PFU/mL。结论通过分子克隆体外重组技术成功构建了rAAV-MHCI,为下一步人体细胞实验及移植免疫的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 Ⅰ型主要组织相容性复合体 细胞内抗体 内质网 腺相关病毒 基因治疗
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MG_7胞内抗体的表达及活性鉴定
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作者 喻召才 丁杰 +1 位作者 樊代明 张学庸 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期410-412,共3页
目的制备 MG7胞内抗体并鉴定其分子量和抗原结合活性。方法以含 MG7sc Fv基因的质粒 p CANTAB5 E为模板 ,PCR扩增 MG7sc Fv基因 ,并在其 3’端引入一段内质网滞留序列 (SEKDEL ) ,即形成 MG7胞内抗体基因。 DNA测序后 ,将 MG7胞内抗体... 目的制备 MG7胞内抗体并鉴定其分子量和抗原结合活性。方法以含 MG7sc Fv基因的质粒 p CANTAB5 E为模板 ,PCR扩增 MG7sc Fv基因 ,并在其 3’端引入一段内质网滞留序列 (SEKDEL ) ,即形成 MG7胞内抗体基因。 DNA测序后 ,将 MG7胞内抗体基因克隆到表达载体 p GEX- 3X中 ,转化宿主菌 HB2 15 1,IPTG诱导 ,SDS- PAGE分析产物分子量 ,EL ISA检测产物的 MG7抗原结合活性。结果电泳分析发现融合基因片段长约 780 bp。DNA序列分析显示 ,SEKDEL与 MG7sc Fv基因正确融合 ;SDS- PAGE分析发现 MG7胞内抗体的分子量为 32 0 0 0 u;EL ISA检测发现 MG7胞内抗体具有明显的抗原结合活性。结论我们成功地制备并表达了 MG7胞内抗体 ,为利用其探讨 展开更多
关键词 胞内抗体 MG7 基因治疗 胃癌
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内质网滞留型抗CyclinD1胞内抗体在HeLa细胞中的表达分析
16
作者 周立宏 朱迅 +4 位作者 田宇 陈勇 曹玉华 冯晶 李桂英 《中国实验诊断学》 2008年第7期821-824,共4页
目的构建内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体并鉴定其在肿瘤细胞中的表达活性。方法利用PCR技术将细胞内质网滞留信号及E-tag检测标签引入抗CyclinD1人源单链抗体,获得抗CyclinD1胞内抗体(AD5E)基因片段,通过分子克隆技术,构建重组真核... 目的构建内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体并鉴定其在肿瘤细胞中的表达活性。方法利用PCR技术将细胞内质网滞留信号及E-tag检测标签引入抗CyclinD1人源单链抗体,获得抗CyclinD1胞内抗体(AD5E)基因片段,通过分子克隆技术,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-AD5E,限制性内切酶分析及DNA测序验证其序列及读码框正确后,利用脂质体介导法转染HeLa细胞,RT-PCR和间接免疫荧光实验分析该胞内抗体在肿瘤细胞中的表达活性。结果限制性内切酶分析及DNA测序发现,正确引入细胞内质网滞留信号和E-tag检测标签序列,该胞内抗体片段为876bp。RT-PCR及免疫荧光实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的HeLa细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞质区域。结论我们成功构建了在肿瘤细胞中能够有效表达的内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体。 展开更多
关键词 CYCLIND1 胞内抗体 表达 肿瘤
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Comparative Study on Galvanic-Coupled Intrabody Channel Characteristic Measurement Methods
17
作者 Yangrong Wen Fengjie Lin +3 位作者 Yueming Gao Sio Hang Pun Mang I Vai Min Du 《Journal of Beijing Institute of Technology》 EI CAS 2022年第1期30-38,共9页
The galvanic-coupled intrabody communication(GCIBC)uses the human body as the channel for data transmission.The signal flow through different paths within different measure-ment schemes,resulting in distinct deviation... The galvanic-coupled intrabody communication(GCIBC)uses the human body as the channel for data transmission.The signal flow through different paths within different measure-ment schemes,resulting in distinct deviations in the experimental results.This method completely uses human body channel to transmit low-power signals,and has good anti-interference perform-ance.However,for a long time,the channel research of GCIBC has not determined a set of recog-nized and accurate measurement methods and standards.However,few researcher analyze the dif-ferences and principles between different measurement methods.This paper aims at three com-monly used measurement methods.Abstract the equivalent schematic diagrams of three measure-ment schemes:direct measurement,using high-precision differential probe and using balun.The sig-nal return paths generated by three measurement methods are analyzed,the impedance matching and energy transmission efficiency are compared.According to the analysis,the empirical expres-sions in different cases are listed.The mechanism between the channel measurement results gener-ated by the set experimental configuration and the comparison experiment is clarified.The compar-ison experiment with complete floating measurement is carried out as a reference to verify the pro-posed opinion.The measurement error caused by different experimental configurations is verified.This study can provide a reference opinions for the experimental error analysis of GCIBC research in the future,and provide suggestions for the selection of experimental configuration. 展开更多
关键词 galvanic-coupled intrabody communication channel characteristic measurement atten-uation return path
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A Comparative Study of the Electrodes Gels’Electrical Properties in the Measurement Issues of Intrabody Communication
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作者 Fengjie Lin Ziliang Wei +5 位作者 Jiejie Yang Yangrong Wen Yueming Gao Sio Hang Pun Mang I Vai Min Du 《Journal of Beijing Institute of Technology》 EI CAS 2022年第1期71-80,共10页
Intrabody communication(IBC)technology is becoming progressively more standard-ized due to its low power consumption and high security features incorporated into the third phys-ical layer of the IEEE 802.15.6 standard... Intrabody communication(IBC)technology is becoming progressively more standard-ized due to its low power consumption and high security features incorporated into the third phys-ical layer of the IEEE 802.15.6 standard.Even then,there are still many challenges in normalizing the measurement issues of IBC.A major concern that should not be overlooked is the electrodes in the IBC,especially the popular use of gel electrodes.In the channel measurements,gel electrodes are commonly employed to improve the signal-to-noise ratio and prevent electrodes from falling off.In this paper,a comparative study of the electrical properties of gel was investigated during the measurement of human channel characteristics and to clarify the differences of them.Firstly,the basis of electrostatic field pole plate measurements and electromagnetic theory were introduced to interpretate how the relative permittivity and conductivity of different gels will influence the meas-urement results.Then the in vivo experiments with different gel or dry electrodes were performed to compare the differences induced by the gel.The results indicate that the influence of the gel on the human channel measurement is mainly concentrated below 400 kHz(the attenuation is re-duced by 16.7 dB on average),and the stability of the permittivity and conductivity of the gel has a direct impact on the stability of its measurement of the human channel.This result may provide a meaningful reference for the standardization of electrode usage in IBC. 展开更多
关键词 intrabody communication channel characteristic measurement gel electrodes permit-tivity CONDUCTIVITY
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个体化伤椎单侧置钉联合植骨术治疗胸腰椎爆裂骨折 被引量:9
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作者 李世梁 杜兰翔 +4 位作者 崔晓荣 孙海东 李悫 李育敏 钟锐 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期1254-1258,共5页
[目的]观察胸腰椎爆裂骨折患者行个体化伤椎单侧置钉联合伤椎内植骨术的临床疗效。[方法]回顾性分析2016年4月~2018年2月胸腰椎爆裂骨折行伤椎置钉短节段固定患者60例,根据术中是否经椎弓根伤椎体内植骨分为二组,30例为植骨组,其余30例... [目的]观察胸腰椎爆裂骨折患者行个体化伤椎单侧置钉联合伤椎内植骨术的临床疗效。[方法]回顾性分析2016年4月~2018年2月胸腰椎爆裂骨折行伤椎置钉短节段固定患者60例,根据术中是否经椎弓根伤椎体内植骨分为二组,30例为植骨组,其余30例为非植骨组。比较两组临床资料。[结果]两组患者均顺利完成手术。植骨组手术时间长于非植骨组,差异有统计学意义(P<0.05);术中出血量和术口长度比较差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者术后随访12~33个月。两组患者VAS评分均随时间推移显著减少(P<0.05),术后相同时间点两组间VAS评分差异无统计学意义(P>0.05)。影像检查方面,术后两组椎体前缘压缩率、Cobb角均较术前显著改善(P<0.05),术后1周时两组间差异无统计学意义(P>0.05),末次随访时植骨组显著优于非植骨组(P<0.05),植骨组有6例,非植骨组有24例残留"空壳"征,差异有统计学意义(P<0.05)。植骨组无内固定松动、断裂等,非植骨组4例椎弓根钉根部断裂,3例连接棒断裂,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]后路个体化伤椎单侧置钉联合打压植骨术治疗胸腰椎爆裂骨折可显著恢复并维持伤椎椎体高度及Cobb角,促进骨折愈合。 展开更多
关键词 胸腰椎爆裂骨折 后路短节段固定 伤椎置钉 经椎弓根椎体内植骨
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经椎弓根椎体内植骨治疗老年骨质疏松性脊柱骨折的疗效分析 被引量:4
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作者 王万红 《国际医药卫生导报》 2016年第11期1576-1579,共4页
目的探讨经椎弓根椎体内植骨治疗老年骨质疏松性脊柱骨折的疗效。方法收集我院2013年1月至2014年9月入院的80例老年骨质疏松性脊柱骨折患者随机分为两组,对照组患者采用单纯短节段弓根钉棒系统内固定治疗,实验组采用经椎弓根椎体内植... 目的探讨经椎弓根椎体内植骨治疗老年骨质疏松性脊柱骨折的疗效。方法收集我院2013年1月至2014年9月入院的80例老年骨质疏松性脊柱骨折患者随机分为两组,对照组患者采用单纯短节段弓根钉棒系统内固定治疗,实验组采用经椎弓根椎体内植骨治疗,比较两组患者治疗前后椎体高度、Cobb角、疼痛程度与相关临床指标。结果实验组患者椎体高度术后丢失[(4.86±0.81)%]与术后Cobb角水平[(3.85±0.68)°]均显著低于对照组[(7.35±1.24)%,(7.55±1.17)°],差异有统计学意义(P〈0.01)。实验组患者术后VAS评分[(1.89±0.52)]显著低于对照组[(5.03±1.67)1,差异有统计学意义(P〈0.01)。实验组患者末次随访椎体高度丢失[(4.77±1.16)%]与末次随访Cobb角水平[(5.19±1.09)°]显著低于对照组[(11.63±4.59)%,(11.42±3.96)°],差异有统计学意义(P〈0.01)。结论经椎弓根椎体内植骨治疗老年骨质疏松性脊柱骨折的疗效显著,具有借鉴性。 展开更多
关键词 经椎弓根椎体内植骨 骨质疏松 脊柱骨折 疼痛
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