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鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
1
作者
牛金鹏
王惠川
吴国娟
《北京农学院学报》
2010年第4期21-23,62,共4页
应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结...
应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。
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关键词
干扰素α受体Ⅱ
胞外域
克隆
融合蛋白
原核表达
下载PDF
职称材料
猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备
被引量：
1
2
作者
杨青原
张军杰
+3 位作者
秦运杰
王冬梅
夏平安
崔保安
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期420-424,共5页
为了克隆表达猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域(IFN2EC)基因,试验采用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中扩增出猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的cDNA序列,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株,IFN2EC重组蛋白...
为了克隆表达猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域(IFN2EC)基因,试验采用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中扩增出猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的cDNA序列,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株,IFN2EC重组蛋白得到高效表达.将融合蛋白IFNR2EC免疫BALB/C小鼠,获得鼠抗IFN2EC融合蛋白多克隆抗体,将得到的融合蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测.本研究成功构建重组表达质粒pET-IFNR2EC,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶12800,Western-blotting试验结果表明,制备的鼠抗IFNR2EC融合蛋白多克隆抗体可以与融合蛋白进行特异性结合,从而证明融合蛋白具有很好的免疫原性.
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关键词
猪I型干扰素受体
ii
胞外域
克隆
原核表达
下载PDF
职称材料
题名
鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
1
作者
牛金鹏
王惠川
吴国娟
机构
北京农学院动物科学技术学院
出处
《北京农学院学报》
2010年第4期21-23,62,共4页
基金
北京市自然科学基金项目(6092004)
国家自然科学基金项目(30771625)
文摘
应用RT-PCR技术扩增鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域(CHIFNAR2 EC)基因片段,将扩增产物克隆至pMD-18T,转化J M109感受态。重组质粒与表达载体pGEX-6P-1经双酶切后构建重组表达质粒pGEX-6P-CHIF-NAR2EC,转入BL21,提取质粒酶切和测序鉴定。测序结果与参考序列比较,核苷酸同源性为99%。用IPTG诱导表达,对诱导条件进行初步优化,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。通过切胶的方法进行纯化,获取具有较高纯度的融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western Blot检测显示融合蛋白分子量大小约为50 KD,采用抗GST抗体进行Western Blot,成功检测到特异性目的条带。
关键词
干扰素α受体Ⅱ
胞外域
克隆
融合蛋白
原核表达
Keywords
interferon
receptor
ii
extracellular
region
cloning
recombinant
protein
prokaryotic
expression
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
Q786 [农业科学—畜牧兽医]
下载PDF
职称材料
题名
猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备
被引量：
1
2
作者
杨青原
张军杰
秦运杰
王冬梅
夏平安
崔保安
机构
河南农业大学牧医工程学院
出处
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期420-424,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31172346)
文摘
为了克隆表达猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域(IFN2EC)基因,试验采用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中扩增出猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的cDNA序列,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,并将阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株,IFN2EC重组蛋白得到高效表达.将融合蛋白IFNR2EC免疫BALB/C小鼠,获得鼠抗IFN2EC融合蛋白多克隆抗体,将得到的融合蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测.本研究成功构建重组表达质粒pET-IFNR2EC,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶12800,Western-blotting试验结果表明,制备的鼠抗IFNR2EC融合蛋白多克隆抗体可以与融合蛋白进行特异性结合,从而证明融合蛋白具有很好的免疫原性.
关键词
猪I型干扰素受体
ii
胞外域
克隆
原核表达
Keywords
porcine
type
I
interferon
receptor
ii
ectodomain
cloning
prokaryotic
expression
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡干扰素α受体Ⅱ胞外域的克隆及GST融合蛋白原核表达
牛金鹏
王惠川
吴国娟
《北京农学院学报》
2010
0
下载PDF
职称材料
2
猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备
杨青原
张军杰
秦运杰
王冬梅
夏平安
崔保安
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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职称材料
已选择
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参考文献
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