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结肠癌细胞株HT-29与Colo-205增殖的分子机制研究 被引量：1
1
作者 李小文 曹琼 +4 位作者 徐凝馨 胡艳芬 朱剑军 刘铭 李莉 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2022年第2期130-136,共7页
目的通过蛋白激酶抑制分析探讨了结肠癌细胞株HT-29与Colo-205增殖的分子机制。方法选择多种蛋白激酶抑制剂(剂量从0.0006μmol/L开始,倍增到20μmol/L,共16个剂量组)作用于HT-29与Colo-205细胞,CCK8法检测细胞增殖,筛选有效抑制2种细... 目的通过蛋白激酶抑制分析探讨了结肠癌细胞株HT-29与Colo-205增殖的分子机制。方法选择多种蛋白激酶抑制剂(剂量从0.0006μmol/L开始,倍增到20μmol/L,共16个剂量组)作用于HT-29与Colo-205细胞,CCK8法检测细胞增殖,筛选有效抑制2种细胞增殖的药物;转染siRNA敲低HT-29细胞中酪氨酸蛋白激酶SRC的表达,并采用慢病毒表达质粒在Colo-205细胞中过表达SRC,检测蛋白激酶抑制剂对两种细胞增殖的影响;构建HT-29细胞裸鼠荷瘤模型,检测抑制剂对小鼠肿瘤生长的影响。结果达沙替尼(Dasatinib)或BMS-754807单独作用于HT-29细胞后,抑制效果不明显,而两者联合使用,可有效抑制HT-29细胞增殖(P=0.005)。AZD-6244单独作用于Colo-205细胞,可明显抑制细胞增殖(P=0.027)。BMS-754807单独作用于敲低SRC的HT-29细胞株,与联合使用BMS-754807和Dasatinib组相比,对细胞的抑制效果基本一致。Colo-205过表达SRC后,与对照组相比,AZD-6244抑制细胞增殖效果更明显(P=0.021)。HT-29裸鼠荷瘤实验结果表明,与对照组和BMS-754807组相比,联合用药组的小鼠肿瘤体积增长率明显降低(P=0.03)。结论HT-29细胞与Colo-205细胞的增殖受不同信号通路的调控,其中,HT-29细胞的增殖同时受胰岛素受体信号通路与SRC信号通路调控,且两条通路相互独立;Colo-205细胞增殖主要受MEK信号通路调控。 展开更多
关键词 结肠癌 蛋白激酶抑制剂 HT-29细胞 胰岛素受体信号通路 SRC
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IGF-1R对甲状腺相关眼病眼眶成纤维细胞合成HA的影响及其作用机制 被引量：5
2
作者 陈小玲 何为民 李薇 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期727-731,共5页
目的探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞合成透明质酸(HA)的影响及其作用的信号通路。方法体外培养19例(23只眼)TAO患者(TAO组)及5例(5只眼)正常对照(对照组)眼眶成纤维细胞,并采用免疫荧光染色进... 目的探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)对甲状腺相关眼病(TAO)眼眶成纤维细胞合成透明质酸(HA)的影响及其作用的信号通路。方法体外培养19例(23只眼)TAO患者(TAO组)及5例(5只眼)正常对照(对照组)眼眶成纤维细胞,并采用免疫荧光染色进行鉴定;细胞培养液中分别加入不同浓度重组人IGF-1,ELISA检测细胞培养上清液中HA质量浓度;细胞培养液中分别加入IGF-1受体阻断剂1H7、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)阻断剂LY294002或蛋白激酶B(PKB)抑制剂(即Akt抑制剂)Ⅳ对细胞进行预处理,再加入重组人IGF-1,ELISA检测培养上清液中HA质量浓度,Western blot检测PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达情况。结果TAO组HA质量浓度在重组人IGF-1 0~5nmol/L处理时逐渐增加,在IGF-1 10nmol/L时达到最大值,随后在IGF-120~50nmol/L时出现波动。与正常对照组相比,0~50nmol/L重组人IGF-1处理的TAO组HA质量浓度均增高,差异有统计学意义(P<0.01)。IGF-1受体阻断剂1H7和Akt抑制剂Ⅳ对细胞预处理后,再加入重组人IGF-1,其细胞培养上清液中的HA质量浓度较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.01),PI3K阻断剂LY294002预处理后,细胞培养上清液中HA质量浓度约有降低,但差异无统计学意义(P=0.390)。与空白对照组相比,IGF-1处理组细胞p-Akt蛋白表达水平升高,而对PI3K和总Akt蛋白表达无明显影响;1H7和LY294002可降低PI3K及p-Akt蛋白的表达水平,对总Akt蛋白表达的抑制作用不明显;Akt抑制剂Ⅳ处理组,PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达水平均较对照组明显降低。结论 TAO患者眼眶成纤维细胞合成HA增加,IGF-1能促进HA合成,且这种促进作用部分通过PI3K/Akt信号通路实现。 展开更多
关键词 甲状腺相关眼病 透明质酸 胰岛素样生长因子受体 信号通路
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胰岛素样生长因子结合蛋白4转基因小鼠脑内细胞分化的研究 被引量：3
3
作者 张贺 勾荣彬 +3 位作者 牛含虚 孙晓红 徐群渊 段德义 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第6期910-916,共7页
目的研究神经元特异性启动子血小板源性生长因子-β(platelet derived growth factor-β,PDGF-β)介导的胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP4)转基因小鼠脑内神经元和神经胶质细胞分化情况... 目的研究神经元特异性启动子血小板源性生长因子-β(platelet derived growth factor-β,PDGF-β)介导的胰岛素样生长因子结合蛋白4(insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP4)转基因小鼠脑内神经元和神经胶质细胞分化情况。方法PCR扩增并测序鉴定PDGF-β启动子和IGFBP4 c DNA表达框的整合,Isotropic Fractionator细胞计数法分析海马少突胶质前体细胞比例,Western blotting法分析生后28 d小鼠海马等部位神经元和神经胶质细胞的分化、胰岛素样生长因子-1(insulin-like factor-1,IGF-1)受体通路激活以及细胞存活相关分子表达,Rotarod实验观察小鼠运动能力。结果 IGFBP4 c DNA稳定整合于小鼠基因组,转基因小鼠海马少突胶质前体细胞数目和成熟细胞髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)均明显增多,神经元和星形胶质细胞标志物Neu N和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达改变不明显; Erk1,2和Akt磷酸化升高,p38的激活不明显; Caspase-3表达下调,β-catenin和Bcl-2表达无明显改变,12月龄小鼠Rotarod运动能力明显增强,其小脑和皮质Neu N表达增多。结论神经元过表达IGFBP4促进小鼠脑少突胶质细胞和神经元的分化。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子结合蛋白-4 神经分化 胰岛素样生长因子-Ⅰ型受体信号通路 转基因小鼠
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