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食品中黄曲霉毒素B_1单克隆抗体酶联免疫测定方法的建立及初步应用 被引量：23
1
作者 路戈 计融 刘春霞 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期162-165,共4页
用抗 AFB_1的单克隆抗体 AFB_1-2H8,建立了检测食品(玉米、花生、小麦、大米、植物油)中 AFB_1的 ELISA 间接竞争法。该方法最低检出浓度为0.01ng/g,敏感范围为0.2～50ng/g,平均回收率为83.0%～110.3%,精密度为2.0%～24.3%。用该法测定... 用抗 AFB_1的单克隆抗体 AFB_1-2H8,建立了检测食品(玉米、花生、小麦、大米、植物油)中 AFB_1的 ELISA 间接竞争法。该方法最低检出浓度为0.01ng/g,敏感范围为0.2～50ng/g,平均回收率为83.0%～110.3%,精密度为2.0%～24.3%。用该法测定了分布于淮河以北地区的145份样品,并对25份植物油样品用 TLC 和 ELISA 两种方法进行了对比测定。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 elisa
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牛乳过敏原β-乳球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：23
2
作者 布冠好 郑喆 +1 位作者 郑海 罗永康 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期71-76,共6页
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了牛乳中... 检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺（TMB）为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法（ELISA）。确定了包被抗原质量浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000。结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05～1.00μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好的准确性和重复性。 展开更多
关键词 牛乳 Β-乳球蛋白 过敏原 多克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究 被引量：24
3
作者 谢珲 章先 +3 位作者 王歆 凡鹏程 时玉菲 方维焕 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2033-2040,共8页
【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤... 【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%-120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 单克隆抗体 间接竞争elisa
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水体中微囊藻毒素-LR的间接竞争ELISA检测 被引量：14
4
作者 盛建武 何苗 +2 位作者 余少青 施汉昌 钱易 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1166-1170,共5页
在自制包被完全抗原浓度为5μg／mL、单克隆抗体工作稀释度为1：3000、酶标二抗鼠工作稀释度为1：3000、微囊藻毒素-LR浓度在0．001-30μg／L、显色底物为邻苯二胺，采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测，结... 在自制包被完全抗原浓度为5μg／mL、单克隆抗体工作稀释度为1：3000、酶标二抗鼠工作稀释度为1：3000、微囊藻毒素-LR浓度在0．001-30μg／L、显色底物为邻苯二胺，采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测，结果表明，该方法与高效液相色谱的检测结果相关系数大于0．99，多次重复实验相对标准偏差小于10％，最低检测限能达到0．01μg／L。定量检测区间为0．01～3μg／L，该方法对[4-精氨酸]微囊藻毒素能特异性识别，对来自实际水样中的干扰有相当的耐受力． 展开更多
关键词 微囊藻毒素-LR 单克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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基于单克隆抗体的三聚氰胺ELISA检测方法的建立 被引量：14
5
作者 王黎丽 陈芳芳 +1 位作者 吴超 余为一 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期962-966,共5页
建立三聚氰胺直接和间接竞争ELISA检测方法。三聚氰胺(melamine)-BSA免疫BALB/c小鼠,通过融合小鼠脾细胞与SP2/0细胞,制备分泌MEL单克隆抗体(monoclonal anti-body)的细胞株;体内诱生腹水制备MEL-mAb。用高碘酸钠法制备MEL-OVA-HRP偶联... 建立三聚氰胺直接和间接竞争ELISA检测方法。三聚氰胺(melamine)-BSA免疫BALB/c小鼠,通过融合小鼠脾细胞与SP2/0细胞,制备分泌MEL单克隆抗体(monoclonal anti-body)的细胞株;体内诱生腹水制备MEL-mAb。用高碘酸钠法制备MEL-OVA-HRP偶联物并对其活性进行鉴定。分别用MEL-OVA和制备的MEL-mAb包被,用三聚氰胺标准液作为抑制物,做直接和间接竞争ELISA,并对两种ELISA方法在灵敏度、线性检测范围、检测时间进行比较。筛选出4株可以稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。其中的C4株腹水效价达到1∶104,亲和力常数(Ka)为2.92×108L/mol。三聚氰胺间接竞争ELISA和直接竞争ELISA检测法的IC50分别为3.12μg/L和56.88μg/L,线性检测范围分别为0.05～10μg/L和0.1～1 000μg/L。两种竞争ELISA方法都能应用于三聚氰胺的快速检测,但间接竞争ELISA比直接竞争ELISA更加灵敏。 展开更多
关键词 三聚氰胺 单克隆抗体 间接竞争elisa 直接竞争elisa
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伏马毒素B_1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法的建立 被引量：15
6
作者 王雨晨 王君 +1 位作者 王元凯 严亚贤 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2011年第2期69-74,共6页
采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）和蛋白卵清白蛋白（OVA）偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1。OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备... 采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）和蛋白卵清白蛋白（OVA）偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1。OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体。经三次亚克隆后,筛选出两株（6H3,6H11）能特异、稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体,经检测表明单克隆抗体的亚型为IgG1,轻链为κ型。采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达l∶16 000,抗体对伏马毒素的半数阻断浓度（IC50）为8.26 ng/mL,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素B1等结构类似物几乎不存在交叉反应,与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应。利用获得的抗FB1单克隆抗体,建立了间接竞争ELISA检测方法,检测灵敏度为0.44 ng/mL,检测线性范围为0.93~73.06 ng/mL,加标回收率在线性范围内达到回收率可达78.4%~102%。 展开更多
关键词 伏马毒素B1 半抗原 单克隆抗体 间接竞争elisa
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重金属铜的单抗的制备及免疫学检测方法的建立 被引量：11
7
作者 郝代玲 黄建芳 +4 位作者 杨浩 冯沛然 张宇 王宏 向军俭 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第19期245-248,255,共5页
目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/c小鼠;细胞融合... 目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对Cu2+的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/c小鼠;细胞融合后,通过间接及间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中G8制备出腹水型单抗效价为5×105倍,抗体亚型为Ig G1型,轻链类型为κ型,特异性检测结果表明该单抗对NOTA及Mn2+、Pb2+、Cd2+、Zn2+等其金属离子交叉反应率远低于2%,与Mg2+交叉反应率小于8%,表明单克隆抗体G8对重金属Cu2+具有很强的特异性,不会干扰结果的准确性;建立间接竞争ELISA的检测灵敏度为29.8 ng/m L,检测限为2.4 ng/m L,线性范围为4.5~196.7 ng/m L;直接竞争ELISA检测法的检测灵敏度为12.89 ng/m L,检测限为0.88 ng/m L,检测范围为1.72~96.58 ng/m L。结论:成功制备出抗重金属铜离子的单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。 展开更多
关键词 铜离子 单克隆抗体 间接竞争elisa 直接竞争elisa
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氟喹诺酮类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：11
8
作者 姜金庆 杨雪峰 +3 位作者 王自良 常新耀 王三虎 刘兴友 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期887-892,共6页
为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数... 为建立同时检测多种氟喹诺酮药物的免疫学分析方法,本研究以碳二亚胺(EDC)二步法合成环丙沙星人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立氟喹诺酮类药物多残留检测方法。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.2 ng/mL～376 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为8 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL;抗体对恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星均能特异性识别,IC50值分别为7.3 ng/mL、10.6 ng/mL、和13.2 ng/mL;标准品稀释液中NaOH和甲醇的最高容忍度分别为10%和30%;牛奶基质中添加5 ng/mL、20 ng/mL和50 ng/mL的标准品,环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和培氟沙星的回收率分别为93%～108%、96%～110%、92.5%～104%和93%～102%。 展开更多
关键词 环丙沙星 多克隆抗体 间接竞争elisa 氟喹诺酮药物 多残留检测
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沙丁胺醇单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立 被引量：10
9
作者 彭述辉 袁利鹏 +4 位作者 孙远明 雷红涛 王保玲 徐振林 庞杰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期171-175,共5页
制备抗沙丁胺醇单克隆抗体,鉴定其特异性并建立间接竞争ELISA检测方法。以合成的沙丁胺醇完全抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选克隆得到稳定分泌抗沙丁胺醇抗体的单克隆杂交瘤细胞,命名为4E4和3A2。经鉴定,两个抗体... 制备抗沙丁胺醇单克隆抗体,鉴定其特异性并建立间接竞争ELISA检测方法。以合成的沙丁胺醇完全抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选克隆得到稳定分泌抗沙丁胺醇抗体的单克隆杂交瘤细胞,命名为4E4和3A2。经鉴定,两个抗体亚类都为IgG1,其腹水纯化后效价分别达到2.56×10^5和1.28×10^5。以效价高且特异性较好的4E4细胞株获得的抗体建立间接竞争ELISA方法,经条件优化后得到标准曲线,检测范围为4.76-84.99ng/mL,IC50为20.12ng/mL,检测限为3.25ng/mL,与克伦特罗交叉反应率为253.62%,与其它结构类似物没有明显交叉反应。本研究制备的单克隆抗体和建立的间接ELISA方法,可用于开发同时检测沙丁胺醇和克伦特罗的试剂盒。 展开更多
关键词 沙丁胺醇 单克隆抗体 间接elisa
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孔雀石绿间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：10
10
作者 王权 郭德华 +2 位作者 李健 蒋蔚 赵新宇 《畜牧与兽医》 北大核心 2010年第2期6-9,共4页
采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时... 采用无色孔雀石绿(Leucomalachite green,LMG)单克隆抗体建立了水产品中孔雀石绿(Malachite green,MG)残留的间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法。结果表明,LMG-McAb最佳稀释倍数为1∶80 000,包被抗原最佳质量浓度为0.80μg/mL;竞争反应时的LMG理想稀释液为40%乙腈水溶液;标准曲线呈线性相关,相关系数R2=0.9823,最适检测范围1 ng/mL^256 ng/mL,最低检测限为1.29 ng/mL,批内和批间变异系数分别为4.307%和4.566%;鳗鱼肉样的平均添加回收率为90%~110%;该检测方法与隐性结晶紫、孔雀石绿、结晶紫的交叉反应(CR%)分别为40.67%、13.50%和5.89%,与其他抗生素无交叉反应。 展开更多
关键词 孔雀石绿 残留检测 间接竞争elisa
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拉沙里菌素单克隆抗体的研制及间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：8
11
作者 杨小康 张绘艳 +4 位作者 顾建红 袁燕 卞建春 刘宗平 刘学忠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期3049-3056,共8页
为制备拉沙里菌素(LAS)单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA(Ci-ELISA)方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分泌抗... 为制备拉沙里菌素(LAS)单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA(Ci-ELISA)方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分泌抗LAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株C11。经鉴定,C11的抗体类型为Ig G1,轻链为κ链;所制腹水效价为1∶16 000,与莫能菌素钠、盐霉素钠、马杜霉素胺、头孢噻吩钠和硫酸链霉素均无交叉反应。用此单克隆抗体建立LAS Ci-ELISA检测方法显示,Ci-ELISA标准工作曲线为y=0.376x-0.2374(R2=0.9914),LAS在5~1 000 ng/m L时,线性关系良好,IC50为90.22 ng/m L,加标回收率为81.76%~102.41%,表明方法精确度好、灵敏度高。LAS单克隆抗体的制备和Ci-ELISA方法的建立为下一步试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 拉沙里菌素 半抗原 单克隆抗体 间接竞争elisa
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鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用 被引量：7
12
作者 孙法良 刁有祥 +2 位作者 孙宁 马艳芳 纪巍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1813-1819,共7页
【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫... 【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1:102400。最佳包被抗原浓度为0.5μg·ml-1,最佳抗体工作浓度为1:6400,酶标二抗的工作浓度为1:20000。回归方程Y=-0.1516X+0.788(R2=0.9859),检测范围为0.18～500ng·ml-1,检出限为0.18ng·ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500ng·g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%～106.1%,变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。 展开更多
关键词 氟苯尼考 残留检测 间接竞争 elisa 鸡肉 食品安全
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伏马菌素B1免疫学检测方法的研究 被引量：4
13
作者 许金俊 陈飞 +5 位作者 秦爱建 陶建平 彭金彪 邵红霞 金文杰 戴先礼 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1118-1122,共5页
目的制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体,在此基础上建立一种可用于定量检测玉米中FB1含量的间接竞争ELISA方法。方法人工合成免疫原BSA-FB1和包被抗原OVA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的单抗,并对... 目的制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体,在此基础上建立一种可用于定量检测玉米中FB1含量的间接竞争ELISA方法。方法人工合成免疫原BSA-FB1和包被抗原OVA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的单抗,并对其特性进行鉴定。以OVA-FB1作为包被抗原,FB1为竞争抗原,两者与一定量的抗FB1单抗竞争反应,建立检测FB1的间接竞争ELISA方法,对玉米样品进行初步检测应用。结果获得了1株稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2)。对间接竞争ELISA方法进行反应条件优化后,建立了检测FB1的标准曲线,回归方程为y=1.113-0.313x,相关系数R2为-0.990,最适可测范围为10ng/ml^1000ng/ml,灵敏度为90.88ng/nl,最低检测限为7.83ng/ml,方法的批内和批间平均变异系数分别为3.24%和2.45%,样品添加平均回收率为94.32%。结论成功地制备了抗FB1特异性单抗,建立了FB1的间接竞争ELISA检测方法,为进一步研制FB1检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 单克隆抗体 间接竞争elisa 检测
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重金属铬单克隆抗体特异性ELISA免疫检测方法的建立 被引量：7
14
作者 俞华齐 王娟 +2 位作者 姜忍忍 姚刚 刘少伟 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期460-466,共7页
为了利用抗体库筛选技术制备检测重金属铬的单克隆抗体，本研究利用螯合剂DTPA成功制备了重金属Cr的完全抗原，并利用制备的完全抗原结合噬菌体展示技术成功筛选到了特异性识别Cr？DTPA的噬菌体抗体Cr？DTPA？VHH 4？63。结果显示，获... 为了利用抗体库筛选技术制备检测重金属铬的单克隆抗体，本研究利用螯合剂DTPA成功制备了重金属Cr的完全抗原，并利用制备的完全抗原结合噬菌体展示技术成功筛选到了特异性识别Cr？DTPA的噬菌体抗体Cr？DTPA？VHH 4？63。结果显示，获得的抗体亲和常数为1．279×109 L／mol，与载体蛋白BSA／OVA及无金属抗原DTPA？BSA／OVA均无交叉反应，与其他金属离子也没有交叉反应，特异性强。利用制备的Cr？DTPA噬菌体抗体初步建立了ELISA免疫检测法，其方法最低检测限达到1μg／L，水样加标回收试验平均回收率90％～114％，达到国家饮用水检测标准，可用于农业灌溉用水及生活饮用水中的重金属铬的检测。 展开更多
关键词 重金属Cr 纳米抗体 噬菌体展示 间接竞争性elisa
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快速检测软骨藻酸的间接ELISA方法 被引量：7
15
作者 刘淑娟 赵晓祥 +2 位作者 程金平 王茜 王文华 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期404-408,共5页
分别对抗原、一抗、二抗的最佳稀释倍数、温育温度与时间、包被条件及其显色条件进行了优化,建立了一种快速检测软骨藻酸(Domoic acid,DA)的酶联免疫分析法(ELISA).结果表明:抗原、一抗和二抗(HRP-IgG)最佳稀释度分别为1∶12800倍、1∶... 分别对抗原、一抗、二抗的最佳稀释倍数、温育温度与时间、包被条件及其显色条件进行了优化,建立了一种快速检测软骨藻酸(Domoic acid,DA)的酶联免疫分析法(ELISA).结果表明:抗原、一抗和二抗(HRP-IgG)最佳稀释度分别为1∶12800倍、1∶400倍和1∶3000倍;最佳包被条件为4℃包被12 h;抗原抗体最佳反应温度为37℃,反应时间为60 min;二抗最佳反应温度为43℃,反应时间为30 min;最佳显色条件为室温不避光显色20 min.该方法的样品加标回收率高达86.8%～103.2%,其最低检测限(LOD)为4.86 ng·mL-1,光吸收值(OD值)的变异系数(CV)在2.46%～7.08%之间. 展开更多
关键词 软骨藻酸 间接竞争elisa法 快速检测
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恩诺沙星在鸡肉组织中残留的ELISA检测方法研究 被引量：7
16
作者 蒋兴东 陈玉飞 +4 位作者 涂健 彭开松 王涓 祁克宗 朱良强 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第8期30-34,共5页
分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星（ENR）与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明：抗ENR血清... 分别用N-羟基琥珀酰亚胺法和氯甲酸异丁酯法把恩诺沙星（ENR）与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔得到ENR的多克隆抗体,建立了ENR间接竞争ELISA方法。结果表明：抗ENR血清效价达达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为Y=-0.2341X＋0.1193（R2=0.9878）,中值（IC50）为36 ng/mL,最低检测限（LOD）为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10-1000 ng/mL。批内变异系数为3.18%-7.64%,批间变异系数为9.69%-11.94%,鸡组织中的ENR的回收率为76.5%-89.42%。本试验建立的ELISA方法能够满足恩诺沙星兽药残留检测要求。 展开更多
关键词 恩诺沙星 多克隆抗体 间接竞争elisa
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雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：6
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作者 白宇 胡景炎 +4 位作者 许永鹏 何杰 金俊杰 李培德 刘素贞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第10期3100-3105,共6页
为建立敏感、特异、快速的雌二醇(estradiol,E2)残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原(E2-BSA)免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA(ic ELISA)方... 为建立敏感、特异、快速的雌二醇(estradiol,E2)残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原(E2-BSA)免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA(ic ELISA)方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗雌二醇抗体的杂交瘤细胞株(3H3),抗体效价可达1∶320 000,利用3H3腹水抗体优化间接竞争ic ELISA反应条件,检测抗体的敏感度,IC50为1.636 ng/m L,IC20~IC80线性范围为0.202~13.281 ng/m L。雌二醇腹水抗体与雌三醇、乙炔雌二醇的交叉反应率分别达0.31%和0.25%,而与雌酮、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、炔雌醚、己烯雌酚、壬基酚的交叉反应率均<0.1%。结果表明,利用本研究制备的单克隆抗体建立雌二醇间接竞争ELISA检测方法,可满足食品中雌二醇残留高灵敏度的检测要求。 展开更多
关键词 雌二醇 单克隆抗体 间接竞争elisa
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大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：6
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作者 布冠好 朱婷伟 +3 位作者 陈复生 张楠 刘昆仑 张丽芬 《河南工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第4期1-5,11,共6页
建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法（ELISA）,为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化... 建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法（ELISA）,为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础.以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔,自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体,并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗,四甲基联苯胺（TMB）显色液为底物,建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法.确定了抗原的包被浓度为0.025μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶3 200,酶标二抗稀释度为1∶10 000.检测结果达到板内误差3.82%,板间误差10.22%,在允许的误差范围之内;其检测的线性范围为0.01~0.05μg/mL.结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度,可用于大豆蛋白制品过敏原的检测. 展开更多
关键词 大豆球蛋白 过敏原 多克隆抗体 间接竞争elisa
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β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立 被引量：6
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作者 王瑞 曹旭敏 +11 位作者 徐军 李锐 高海侠 张泽宇 苏扣 孙晓亮 李木子 秦立德 王晓茵 王淑婷 李琳 赵思俊 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2020年第7期37-43,共7页
【目的】建立β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。【方法】以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、... 【目的】建立β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。【方法】以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗与妥布特罗等12种β2-受体激动剂类药物的间接竞争ELISA检测方法。【结果】建立的β2-受体激动剂类药物间接竞争ELISA检测方法的最佳反应条件为:37℃,抗原以1∶10000倍包被1 h,抗体以1∶40000稀释作用40 min,酶标抗体以1∶20000稀释作用40 min。采用建立的间接竞争ELISA最佳反应条件对猪尿中的β2-受体激动剂类药物残留进行检测,结果表明12种β2-受体激动剂类药物在0.1~20μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为0.15μg/L,定量限为0.5μg/L;在0.5与1.0μg/L的添加浓度下,回收率为68.4%~114.2%,批内、批间RSD分别为0.4%~10.1%和0.4%~12.5%。【结论】所建立的β2-受体激动剂类药物残留ELISA检测方法操作简单、快速,灵敏度高,适用于猪尿中β2-受体激动剂药物的筛选与检测。 展开更多
关键词 Β2-受体激动剂 间接竞争elisa 多残留检测 猪尿
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乙基香兰素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备
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作者 赵银丽 陈盼盼 +2 位作者 王金荣 段二珍 甘丽平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第6期173-180,共8页
为研究检测乙基香兰素(EV)的免疫学方法,采用活性酯(AE)和混合酸酐(MA)2种方法,将乙基香草酸(EVA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备乙基香兰素人工免疫抗原BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA),并采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行... 为研究检测乙基香兰素(EV)的免疫学方法,采用活性酯(AE)和混合酸酐(MA)2种方法,将乙基香草酸(EVA)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备乙基香兰素人工免疫抗原BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA),并采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行鉴定。将BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA)分别免疫BALB/c小鼠,3免后10 d断尾采血并分离血清制备鼠源多克隆抗体。采用间接ELISA法测定血清抗体效价,间接竞争ELISA法测定血清抗体敏感性和特异性。结果显示,乙基香兰素人工抗原制备成功,BSA-EV(AE)和BSA-EV(MA)的偶联比分别为1∶2.92和1∶37.95。BSA-EV(AE)免疫组3号血清效价最高为1∶51 200,对EV的半数抑制浓度(IC_(50))为173.78μg/L,线性范围为14.79~2 041.74μg/L。BSA-EV(MA)免疫组1号血清效价最高为1∶102 400,对EV的IC_(50)为617.00μg/L,线性范围为42.66~8 709.64μg/L。2个免疫组的血清抗体与香兰素、甲基香兰素、麦芽酚、乙基麦芽酚、BSA、鸡卵清蛋白(OVA)的交叉反应率均小于1%。综上,人工抗原BSA-EV合成成功,并成功制备了对EV灵敏特异的鼠源多克隆抗体。 展开更多
关键词 乙基香兰素 人工抗原 活性酯法 混合酸酐法 多克隆抗体 间接竞争elisa
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