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题名体外合成mRNA高效电转人胚胎干细胞
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作者
吴栋
马石楠
杨梦洁
王小莉
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机构
湖北医药学院附属太和医院胚胎干细胞研究湖北省重点实验室
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出处
《药物生物技术》
CAS
2019年第6期477-480,共4页
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基金
湖北省科技重大专项(No.2016ACA157)
湖北医药学院博士启动金(No.2018QDJZR02)
+1 种基金
湖北医药学院国家级创新训练项目(No.201610929009)
国家级创新训练项目(No.201710929010)。
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文摘
建立体外合成mRNA高效转染人胚胎干细胞(h ESCs)的方法,为高效基因转染h ESCs提供一种新选择。体外合成绿色荧光蛋白mRNA(e GFP mRNA)通过脂质体和电转的方法转染h ESCs,流式检测阳性率,台盼蓝染色检测细胞存活率。HN4人胚胎干细胞中转染不同剂量的e GFP mRNA和e GFP质粒,流式检测阳性率和荧光强度。将e GFP mRNA转染HN4和i PS细胞系,流式检测其转染效率。免疫荧光检测电转e GFP mRNA对HN4细胞干性的影响。体外合成红色荧光蛋白(DsRed mRNA)和e GFP mRNA共转HN4细胞荧光显微镜观察共转效果。体外合成e GFP mRNA可通过电转的方式高效进入HN4细胞中,并且电转后细胞状态良好,细胞存活率为94.6%±0.67%,在h ESCs和i PS细胞系中转染效率均达到99%以上。HN4细胞中电转低剂量的e GFP mRNA即可高效进入细胞并持续高效表达4 d。电转e GFP mRNA的HN4细胞可保持良好的干细胞特性,并且多种体外合成mRNA可高效共转h ESCs。体外合成mRNA可通过电转的方式高效转入h ESCs中,体外合成mRNA技术为h ESCs高效基因转染提供了一个新思路。
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关键词
体外合成mrna
电转
人胚胎干细胞
基因转染
高效
共转
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Keywords
in vitro synthesized mrna
Electroporation
h ESCs
Gene transfection
High efficiency
Co-transfection
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分类号
Q522.2
[生物学—生物化学]
Q7
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