建立了分析肝癌患者血浆中低丰度差异蛋白的新的多维色谱串联质谱方法。以5例肝细胞癌(HCC)患者血浆为研究对象,选用免疫亲和色谱Agilent MARS Spin Cartridge去除血浆中6种主要高丰度蛋白;离线RP-HPLC预分级血浆低丰度蛋白并收集差异...建立了分析肝癌患者血浆中低丰度差异蛋白的新的多维色谱串联质谱方法。以5例肝细胞癌(HCC)患者血浆为研究对象,选用免疫亲和色谱Agilent MARS Spin Cartridge去除血浆中6种主要高丰度蛋白;离线RP-HPLC预分级血浆低丰度蛋白并收集差异表达蛋白组;液相色谱-芯片(HPLC-CHIP,包含一支纳升级Zorbax300SB-C18富集柱和一支纳升级Zorbax 300SB-C18分析柱)富集、分离差异表达蛋白组胰酶酶解肽混合物,线性离子阱质谱在线分析,以Spectrum Mill MS Proteomics Workbench自动分析MS和MS/MS数据后在UniProtKB/SWISS-PORT数据库中进行搜索,鉴定得到27种差异蛋白,其中23种蛋白与各种疾病或肿瘤相关,IMP3、ARNT2和GRIP1可能成为诊断HCC的潜在生物标志物。展开更多
通过正交设计对毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌的发酵条件（菌体密度、甲醇诱导浓度、初始pH值、诱导时间）进行优化。采用重组人骨唾液蛋白（recombinant human bone sialoprotein，rhBSP）单克隆抗体与Aldehyde-Resin HP FF介...通过正交设计对毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌的发酵条件（菌体密度、甲醇诱导浓度、初始pH值、诱导时间）进行优化。采用重组人骨唾液蛋白（recombinant human bone sialoprotein，rhBSP）单克隆抗体与Aldehyde-Resin HP FF介质偶联制备免疫亲和层析柱，纯化非融合型rhBSP，并用Western blotting和补体抑制实验检测非融合型rhBSP的抗原性和活性。毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌最佳发酵优化为：菌体密度OD600达到45甲醇诱导剂量为1．5％，pH值6．0，诱导时间2d，最大表达量为0．126mg／ml。经免疫亲和层析法纯化后，SDS-PAGE显示非融合型rhBSP为43～66ku的分散条带，纯度在90％以上，Western-blotting显示rhBSP具有良好的抗原性，补体实验证明纯化的非融合型rhBSP活性很好。毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌发酵条件经优化后能高效表达非融合型rhBSP，应用免疫亲和层析方法纯化的非融合型rhBSP纯度好，活性高，为进一步研究非融合型rhBSP打下了基础。展开更多
文摘建立了分析肝癌患者血浆中低丰度差异蛋白的新的多维色谱串联质谱方法。以5例肝细胞癌(HCC)患者血浆为研究对象,选用免疫亲和色谱Agilent MARS Spin Cartridge去除血浆中6种主要高丰度蛋白;离线RP-HPLC预分级血浆低丰度蛋白并收集差异表达蛋白组;液相色谱-芯片(HPLC-CHIP,包含一支纳升级Zorbax300SB-C18富集柱和一支纳升级Zorbax 300SB-C18分析柱)富集、分离差异表达蛋白组胰酶酶解肽混合物,线性离子阱质谱在线分析,以Spectrum Mill MS Proteomics Workbench自动分析MS和MS/MS数据后在UniProtKB/SWISS-PORT数据库中进行搜索,鉴定得到27种差异蛋白,其中23种蛋白与各种疾病或肿瘤相关,IMP3、ARNT2和GRIP1可能成为诊断HCC的潜在生物标志物。
文摘通过正交设计对毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌的发酵条件（菌体密度、甲醇诱导浓度、初始pH值、诱导时间）进行优化。采用重组人骨唾液蛋白（recombinant human bone sialoprotein，rhBSP）单克隆抗体与Aldehyde-Resin HP FF介质偶联制备免疫亲和层析柱，纯化非融合型rhBSP，并用Western blotting和补体抑制实验检测非融合型rhBSP的抗原性和活性。毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌最佳发酵优化为：菌体密度OD600达到45甲醇诱导剂量为1．5％，pH值6．0，诱导时间2d，最大表达量为0．126mg／ml。经免疫亲和层析法纯化后，SDS-PAGE显示非融合型rhBSP为43～66ku的分散条带，纯度在90％以上，Western-blotting显示rhBSP具有良好的抗原性，补体实验证明纯化的非融合型rhBSP活性很好。毕赤酵母GS115／pPICZαAN-hbsp工程菌发酵条件经优化后能高效表达非融合型rhBSP，应用免疫亲和层析方法纯化的非融合型rhBSP纯度好，活性高，为进一步研究非融合型rhBSP打下了基础。
