松江鲈鱼ISSR-PCR反应体系的建立及优化研究 被引量：8

1

作者 郁建锋 鲍峰 +1 位作者 韩晓磊 徐建荣 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第33期14420-14421,14465,共3页

[目的]建立及优化松江鲈鱼ISSR-PCR的反应体系。[方法]采用ISSR-63引物,通过正交试验设计,分别对TaqDNA聚合酶、Mg2+d、NTPs和引物浓度等4种PCR原料进行优化,以确立松江鲈鱼的ISSR-PCR反应最佳体系,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温... [目的]建立及优化松江鲈鱼ISSR-PCR的反应体系。[方法]采用ISSR-63引物,通过正交试验设计,分别对TaqDNA聚合酶、Mg2+d、NTPs和引物浓度等4种PCR原料进行优化,以确立松江鲈鱼的ISSR-PCR反应最佳体系,并通过温度梯度PCR,筛选适宜的退火温度。[结果]确定了松江鲈鱼的最适ISSR-PCR反应体系,20μl反应体系中含2.5 mmol/L Mg2+,250μmol/L dNTPs,0.25μmol/L引物,1.0UTaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板及1×PCR buffer,确立退火温度为50.8℃。利用所建立的ISSR-PCR反应体系,通过对24份野生松江鲈鱼样本的检验,获得了清晰、重复性好、多态性高的DNA谱带。[结论]该研究为松江鲈鱼的遗传多样性分析及种质资源研究奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 松江鲈鱼 正交试验 issr-pcr体系

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水蛭ISSR-PCR反应体系的建立及优化 被引量：6

2

作者 张香东 刘庚 +3 位作者 常素慧 白秀娟 杨洪雁 朱洪强 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期215-218,共4页

目的建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据。方法使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了... 目的建立并优化水蛭ISSR-PCR反应体系及扩增程序,为水蛭进行遗传多样性研究提供依据。方法使用引物ISSR825,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择。结果在25μL总体积中,其中包括10×PCR缓冲液2.5μL、Mg2+2.0 mmol/L、dNTP0.25 mmol/L、引物0.8μmol/L、Taq DNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2.0 ng/μL,最佳退火温度为49.7℃。结论所建立的最佳ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于水蛭遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析。 展开更多

关键词 水蛭 issr—pcr体系 正交设计 体系优化 种质资源

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灰色家鸽ISSR反应体系的建立与优化 被引量：2

3

作者 杨洪雁 刘诚刚 白秀娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期44-47,共4页

本研究旨在通过正交优化得出灰色家鸽的ISSR-PCR反应的最佳体系。以灰色家鸽为试验材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶、模板进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择,... 本研究旨在通过正交优化得出灰色家鸽的ISSR-PCR反应的最佳体系。以灰色家鸽为试验材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶、模板进行了体系优化,同时对引物的最佳退火温度进行了选择,建立了适合灰色家鸽的ISSR-PCR分析的最佳体系。结果表明,灰色家鸽ISSR-PCR反应的最优体系为:25μL总体积中包括10×PCR Buffer 2.5μL,Mg2+2.6mmol/L,dNTPs 0.2mmol/L,引物0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,DNA模板1.2ng/μL,最佳退火温度为56.2℃。通过对ISSR-PCR反应体系的优化,能为利用该技术进行灰色家鸽遗传多样性评价、不同种源鉴定及亲缘关系分析奠定基础。 展开更多

关键词 灰色家鸽 正交设计 体系优化 issr-pcr体系

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基于PAGE检测技术的平菇ISSR-PCR体系的建立和优化 被引量：2

4

作者 张运峰 屈安姜 付薪蒙 《北方园艺》 CAS 北大核心 2017年第2期91-95,共5页

以平菇"唐平26"基因组DNA为模板,以U836为引物,比较了琼脂糖凝胶电泳和不同浓度聚丙烯酰氨凝胶(PAGE)电泳对ISSR-PCR产物的分离效果,并且采用PAGE电泳技术对影响ISSR反应体系的主要因素进行优化。结果表明:以PAGE电泳技术检... 以平菇"唐平26"基因组DNA为模板,以U836为引物,比较了琼脂糖凝胶电泳和不同浓度聚丙烯酰氨凝胶(PAGE)电泳对ISSR-PCR产物的分离效果,并且采用PAGE电泳技术对影响ISSR反应体系的主要因素进行优化。结果表明:以PAGE电泳技术检测平菇ISSR-PCR产物的效果最好,最佳ISSR-PCR反应体系为,在20μL反应体系中,模板20ng,Mg2+浓度为1.5mmol·L^(-1),引物0.8μmol·L^(-1),dNTPs 200μmol·L^(-1),Taq酶1.0U,30个扩增循环。 展开更多

关键词 平菇 issr-pcr体系 PAGE

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台湾水青冈ISSR-PCR体系的优化 被引量：2

5

作者 宋文静 金则新 +1 位作者 李钧敏 李建辉 《福建林业科技》 2009年第2期18-22,共5页

分析了ISSR-PCR体系中Mg2+、dNTP和BSA浓度,以及模板DNA、引物和TaqDNA聚合酶用量等6个因素对反应结果的影响,建立了适合于台湾水青冈ISSR-PCR扩增的反应体系:10μL PCR反应液中,含10 ng DNA,1.5 mmol.L-1Mg2+,0.125 mmol.L-14×dNT... 分析了ISSR-PCR体系中Mg2+、dNTP和BSA浓度,以及模板DNA、引物和TaqDNA聚合酶用量等6个因素对反应结果的影响,建立了适合于台湾水青冈ISSR-PCR扩增的反应体系:10μL PCR反应液中,含10 ng DNA,1.5 mmol.L-1Mg2+,0.125 mmol.L-14×dNTP,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10 mmol.L-1Tris-HCl,pH值9.0,50 mmol.L-1KCl,0.1%Triton X-100),0.6 UTaqDNA聚合酶,2 mg.mL-1BSA和3pmol引物。应用优化的ISSR-PCR体系从100个ISSR引物中筛选出12个稳定性好,重复性高的引物,对22株台湾水青冈个体的DNA进行扩增,结果表明优化的ISSR-PCR体系完全适合于台湾水青冈的ISSR分析。 展开更多

关键词 台湾水青冈 issr—pcr体系 优化

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红芪ISSR-PCR体系的建立及优化 被引量：1

6

作者 强正泽 王燕 +2 位作者 李硕 王明伟 李成义 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期3117-3128,共12页

通过单因素与中心复合设计相结合的方法建立优化红芪ISSR-PCR反应体系,并筛选引物,优化电泳时间及扩增循环数。建立的红芪ISSR-PCR反应体系为:25μL反应体系中10×PCR Buffer(Mg^(2+))3.5μL、模板DNA(30 ng/μL)2μL、PCR扩增引物2... 通过单因素与中心复合设计相结合的方法建立优化红芪ISSR-PCR反应体系,并筛选引物,优化电泳时间及扩增循环数。建立的红芪ISSR-PCR反应体系为:25μL反应体系中10×PCR Buffer(Mg^(2+))3.5μL、模板DNA(30 ng/μL)2μL、PCR扩增引物2μL、Taq DNA聚合酶为1.25 U、d NTPs为2μL,dd H_2O 14.5μL,建立的扩增程序:94℃预变性5 min,开始34个循环;94℃变性30 s,后据不同退火温度的引物复性45 s,72℃延伸2 min,循环结束后72℃延伸7 min。本研究筛选出红芪扩增的引物17条;PCR反应产物电泳时间为120 min,最佳循环数为34,建立了稳定的体系,为进一步研究红芪的遗传多样性及遗传结构提供了帮助。 展开更多

关键词 红芪 issr-pcr体系 单因素 中心复合设计

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麻疯树ISSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量：1

7

作者 黄勇 肖祥希 +2 位作者 万泉 王志洁 林阿平 《林业科技开发》 2010年第4期119-122,共4页

以2年生的麻疯树嫩叶提取的DNA作为模板,固定ISSR-PCR扩增程序,对影响PCR扩增的模板DNA、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶以及Mg2+浓度等5因素(不同水平)进行单因素设计优化,得到适合于麻疯树ISSR-PCR扩增的体系为:25μL反应体系中,含模板DNA3... 以2年生的麻疯树嫩叶提取的DNA作为模板,固定ISSR-PCR扩增程序,对影响PCR扩增的模板DNA、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶以及Mg2+浓度等5因素(不同水平)进行单因素设计优化,得到适合于麻疯树ISSR-PCR扩增的体系为:25μL反应体系中,含模板DNA300 ng、dNTP 0.15 mmol/L、引物0.20μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0 U及Mg2+3.0 mmol/L。 展开更多

关键词 麻疯树 issr-pcr体系 条件优化

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黑龙江林蛙ISSR反应体系的建立与优化

8

作者 杨洪雁 张宜强 +1 位作者 杜智恒 白秀娟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期121-125,共5页

以黑龙江林蛙为材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,对引物的最佳退火温度进行选择,建立适合黑龙江林蛙的ISSR-PCR分析的最佳体系:在25μL总体积中,包含10×PCR ... 以黑龙江林蛙为材料,使用引物ISSR807,采用正交优化方法对影响PCR反应的Mg2+、dNTPs、引物、DNA聚合酶、模板进行体系优化,对引物的最佳退火温度进行选择,建立适合黑龙江林蛙的ISSR-PCR分析的最佳体系:在25μL总体积中,包含10×PCR Buffer 2.5μL,Mg2+4.0 mmol.L-1,dNTPs 0.15 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,TaqDNA聚合酶0.5 U,DNA模板2.0 ng.μL-1,最佳退火温度53.8℃。为利用该技术对黑龙江林蛙遗传多样性分析和构建遗传图谱提供一定的依据。 展开更多

关键词 黑龙江林蛙 正交设计 体系优化 issr-pcr体系

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睡莲ISSR-PCR体系的优化及后续亲缘关系鉴定

9

作者 杨志娟 李保豫 +3 位作者 王京华 金奇江 王彦杰 徐迎春 《江西农业学报》 CAS 2024年第12期23-30,39,共9页

采用正交实验对睡莲的ISSR体系进行优化,利用ISSR分子标记技术对延药睡莲(海南)、延药睡莲(印度)、延药睡莲(越南)以及其他从国内外引进的29份睡莲种质资源进行遗传多样性分析。结果表明:总体积为25μL(模板DNA浓度15 ng/μL、2×ES... 采用正交实验对睡莲的ISSR体系进行优化,利用ISSR分子标记技术对延药睡莲(海南)、延药睡莲(印度)、延药睡莲(越南)以及其他从国内外引进的29份睡莲种质资源进行遗传多样性分析。结果表明:总体积为25μL(模板DNA浓度15 ng/μL、2×ES Taq Master Mix用量14μL、引物浓度1.0μmol/L、ddH_(2)O补齐)的睡莲ISSR-PCR体系为最优。使用延药睡莲等8份睡莲种质为材料,从100条ISSR引物中筛选出了10条重复性强、多态性好的引物,并优化了退火温度。使用最优优化体系在32份睡莲种质资源中共扩增出154条带,平均每条引物扩增条带数为15.4条,多态性条带149条,多态性比例为96.9%;平均shannon信息指数(Ⅰ)为0.4582,平均等位基因数Na为2.0000,平均有效等位基因数Ne为1.5064,平均Nei’s基因多样性指数H为0.3001,遗传距离在0.0355~0.7908。基于遗传距离构建聚类分析图,对海南延药睡莲和其他31种睡莲的亲缘关系进行了说明,在进化距离为0.2时可将实验材料分为三类。研究结论阐明了不同种质间的亲缘关系,可为后续睡莲的群体遗传分析奠定实验基础,并为亲缘关系的鉴定和种质资源的保护与利用提供参考。 展开更多

关键词 延药睡莲 issr-pcr体系优化 亲缘关系

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山豆根ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

10

作者 李金梅 关妙娟 +3 位作者 黄鼎 明如宏 李良波 谭勇 《安徽农业科学》 CAS 2024年第18期78-82,共5页

以山豆根为试验材料,采用正交试验考察DNA、引物、Mg^(2+)、dNTPs、Taq酶5个因素对ISSR-PCR反应体系的影响,建立并优化山豆根ISSR-PCR反应体系条件。结果表明:山豆根ISSR-PCR反应体系(20μL)最优条件为Mg^(2+)浓度3 mmol/L,dNTPs 0.2 mm... 以山豆根为试验材料,采用正交试验考察DNA、引物、Mg^(2+)、dNTPs、Taq酶5个因素对ISSR-PCR反应体系的影响,建立并优化山豆根ISSR-PCR反应体系条件。结果表明:山豆根ISSR-PCR反应体系(20μL)最优条件为Mg^(2+)浓度3 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq酶1 U,引物0.5μmol/L,模板DNA 100 ng,运用该体系从100条UBC引物中筛选到10条清晰、多态性好的引物。采用正交试验设计可有效建立山豆根ISSR-PCR反应的最优体系,为山豆根的亲缘关系,种质资源遗传多样性评价及品种鉴定和系统分类等研究提供科学依据。 展开更多

关键词 山豆根 issr-pcr体系优化 正交试验 引物筛选

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铁线莲属植物ISSR分子标记体系优化及指纹图谱的构建 被引量：4

11

作者 王鑫 郑妍 +2 位作者 刘志杰 张存石 刘冬云 《林业与生态科学》 2022年第1期71-79,共9页

为进一步利用ISSR分子标记进行铁线莲遗传多样性分析、种质资源鉴定、遗传图谱构建等研究,本试验以卷萼铁线莲DNA为模板,采取L_(9)(3^(4))正交试验设计,对影响扩增反应的模板DNA含量、目标引物浓度、Master Mix、循环数4个主要因素进行... 为进一步利用ISSR分子标记进行铁线莲遗传多样性分析、种质资源鉴定、遗传图谱构建等研究,本试验以卷萼铁线莲DNA为模板,采取L_(9)(3^(4))正交试验设计,对影响扩增反应的模板DNA含量、目标引物浓度、Master Mix、循环数4个主要因素进行优化,从而得出适宜于铁线莲的ISSR-PCR反应体系。并利用筛选出的12条多态性高的引物构建了16种野生铁线莲的指纹图谱。结果表明,在25μL反应体系中,各因素的最佳配比为模板DNA用量40 ng,引物浓度6μmol/L,Master Mix用量14μL,循环数40个。并且利用最优体系构建了16种野生铁线莲的遗传指纹图谱。该体系的建立为ISSR技术在铁线莲遗传多样性研究、遗传指纹图谱构建、分子标记辅助育种等研究提供了理论基础。指纹图谱的构建可以有效的对16种野生铁线莲进行区分和鉴定。 展开更多

关键词 铁线莲 issr-pcr体系优化 正交试验 单因素试验 指纹图谱

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广西莪术ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：1

12

作者 林敬祯 甘梓静 +3 位作者 谭勇 黄鼎 吴霞 黄晓东 《生物技术》 CAS 2023年第4期422-428,441,共8页

[目的]建立和优化广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G·Lee et C·F.Liang)的ISSR-PCR反应体系。[方法]通过单因素及正交试验设计研究模板DNA含量、Mg^(2+)浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度对广西莪术ISSR-PCR反应... [目的]建立和优化广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G·Lee et C·F.Liang)的ISSR-PCR反应体系。[方法]通过单因素及正交试验设计研究模板DNA含量、Mg^(2+)浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度对广西莪术ISSR-PCR反应的影响。[结果]25μL广西莪术的ISSR-PCR最佳反应体系为模板DNA用量30 ng,Mg^(2+)2.25 mol/L,dNTPs 2.5 mol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.25 U;利用该体系从100条ISSR引物中进行初筛和复筛,筛选出14条引物。[结论]优化建立的广西莪术ISSR-PCR反应体系稳定可靠,可用于广西莪术遗传多样性分析及种质资源保护研究。 展开更多

关键词 广西莪术 issr-pcr体系优化 正交设计 引物筛选 种质资源

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地龙ISSR-PCR体系的建立与优化 被引量：1

13

作者 刘涛 张伟 +2 位作者 刘娟 张磊 周清波 《黑龙江医药科学》 2014年第3期12-14,共3页

目的:确立地龙ISSR-PCR最佳反应体系。方法:通过单因素设计试验对影响ISSR-PCR的不稳定性因素进行处理与优化,其中包括模板DNA浓度的优化,ISSR引物的筛选以及其最佳退火温度的确定,从而确定了ISSR-PCR最佳反应体系。结果:模板DNA最佳浓... 目的:确立地龙ISSR-PCR最佳反应体系。方法:通过单因素设计试验对影响ISSR-PCR的不稳定性因素进行处理与优化,其中包括模板DNA浓度的优化,ISSR引物的筛选以及其最佳退火温度的确定,从而确定了ISSR-PCR最佳反应体系。结果:模板DNA最佳浓度为10 ng/μL,共筛选出7个地龙ISSR-PCR反应体系最佳引物及其最佳退火温度。结论:对地龙ISSR-PCR反应体系进行优化与建立,以更好地应用于地龙遗传多样性实验研究。 展开更多

关键词 地龙issr—pcr体系 建立 优化

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五针松胚乳ISSR—PCR反应体系的建立 被引量：12

14

作者 吕艳芳 刘桂丰 +1 位作者 姜静 侯英杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期429-432,共4页

采用改良的CTAB法提取 5种五针松胚乳DNA ,经检测 ,该方法提取的DNA纯度和含量较高 ,单粒种子胚乳DNA得率基本满足大量PCR扩增的需要。建立了稳定的、可重复的五针松ISSR—PCR最佳反应体系及PCR扩增程序 ,筛选出了扩增条带清晰、多态性... 采用改良的CTAB法提取 5种五针松胚乳DNA ,经检测 ,该方法提取的DNA纯度和含量较高 ,单粒种子胚乳DNA得率基本满足大量PCR扩增的需要。建立了稳定的、可重复的五针松ISSR—PCR最佳反应体系及PCR扩增程序 ,筛选出了扩增条带清晰、多态性丰富的 1 6个ISSR引物 ,为今后利用五针松种子胚乳开展遗传图谱构建等分子生物学研究提供一个标准化程序。 展开更多

关键词 五针松 胚乳 DNA提取 issr-pcr反应体系

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珍珠黄杨DNA的提取方法比较及ISSR反应体系的优化 被引量：11

15

作者 吕乐燕 季孔庶 黄焱 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第1期145-149,150,共6页

为从珍珠黄杨幼叶中提取高质量的总DNA,比较了1%CTAB、2%CTAB、4%CTAB和1.5%SDS4种DNA提取方法。结果表明:2%CTAB提取的DNAA260/A280值最好,ISSR-PCR扩增效果最佳,是有效提取珍珠黄杨基因组DNA的方法。并在此基础上,以(CT)8G为引物,采... 为从珍珠黄杨幼叶中提取高质量的总DNA,比较了1%CTAB、2%CTAB、4%CTAB和1.5%SDS4种DNA提取方法。结果表明:2%CTAB提取的DNAA260/A280值最好,ISSR-PCR扩增效果最佳,是有效提取珍珠黄杨基因组DNA的方法。并在此基础上,以(CT)8G为引物,采用单因素实验法,确立了适合珍珠黄杨的ISSR-PCR反应体系:在总体积20μL的反应体系中,含30ngDNA模板,2.0mmol/LMg2+,0.30μmol/L引物,0.20mmol/LdNTPs,1UTaq酶。 展开更多

关键词 珍珠黄杨(Buxus sinic vat.parvifolia) DNA提取 issr-pcr反应体系

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党参基因组DNA提取、ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选 被引量：13

16

作者 安娜 郭宏波 +1 位作者 周铜水 吴千红 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期346-351,共6页

对党参基因组DNA提取方法优化、ISSR体系形成及引物筛选三方面进行探讨,为研究党参居群遗传多样性及药材DNA鉴定奠定基础。经比较改良CTAB法、改进的高盐SDS法和试剂盒三种常用DNA提取方法,发现改良CTAB法效果最佳;利用优化设计并结合... 对党参基因组DNA提取方法优化、ISSR体系形成及引物筛选三方面进行探讨,为研究党参居群遗传多样性及药材DNA鉴定奠定基础。经比较改良CTAB法、改进的高盐SDS法和试剂盒三种常用DNA提取方法,发现改良CTAB法效果最佳;利用优化设计并结合有关文献优化ISSR反应体系,最优反应体系为:50μL总反应体积中含约20ng DNA模板,1.25UTaq DNA聚合酶,2.25mmol.L-1Mg2+,200μmol.L-1dNTP,0.50μmol.L-1引物。以此体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR引物中筛选出13条扩增条带清晰、多态性较高、重复性好的引物。 展开更多

关键词 党参 DNA提取 issr—pcr反应体系 引物筛选

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玄参ISSR-PCR反应体系的建立与优化 被引量：9

17

作者 赵志新 梁宗锁 +2 位作者 姜在民 薛媛菲 杨永宙 《药物生物技术》 CAS CSCD 2007年第5期318-323,共6页

为了建立稳定的玄参ISSR-PCR反应体系,本试验采用5因素（dNTPs、Taq DNA聚合酶、MgCl2、引物及模板）5水平正交设计筛选PCR体系,并利用单因子梯度进一步优化反应体系各因素浓度和扩增程序（退火温度、延伸时间和循环次数）。结果表明：... 为了建立稳定的玄参ISSR-PCR反应体系,本试验采用5因素（dNTPs、Taq DNA聚合酶、MgCl2、引物及模板）5水平正交设计筛选PCR体系,并利用单因子梯度进一步优化反应体系各因素浓度和扩增程序（退火温度、延伸时间和循环次数）。结果表明：在20μl反应体系中含10×buffer,0.3 mmol/L dNTPs,0.5-1.0 UTaq DNA聚合酶,2.0 mmol/L MgCl2,0.2μmol/L引物,150 ng模板,扩增效果最好。PCR扩增程序：94℃预变性5 min;94℃变性30 s,50-61℃退火（退火温度随引物不同而变化）45 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸7 min。从而建立了适合玄参的ISSR-PCR反应体系,为采用ISSR-PCR分子标记技术研究参种质资源遗传多样性提供了技术依据。 展开更多

关键词 玄参 issr-pcr反应体系 pcr扩增程序 优化

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华仁杏ISSR-PCR反应体系的正交优化分析 被引量：9

18

作者 刘梦培 傅大立 +2 位作者 李芳东 傅建敏 田敏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期128-132,共5页

为有效利用ISSR技术开展华仁杏种质资源与遗传多样性研究,通过L16(45)正交试验设计,对华仁杏ISSR-PCR反应体系中的5个主要因素进行了最优条件的筛选试验,借助极差分析和方差分析,建立了华仁杏最佳的ISSR-PCR反应体系(25μL):10×PCR... 为有效利用ISSR技术开展华仁杏种质资源与遗传多样性研究,通过L16(45)正交试验设计,对华仁杏ISSR-PCR反应体系中的5个主要因素进行了最优条件的筛选试验,借助极差分析和方差分析,建立了华仁杏最佳的ISSR-PCR反应体系(25μL):10×PCR Buffer without MgCl22.5μL、MgCl22.0 mmol/L、TaqDNA Polymerase 2.0 U、dNTPMiX 100μmol/L、ISSR Primer 0.2μmol/L、DNA2.4 ng/μL。 展开更多

关键词 华仁杏 杏属 issr-pcr反应体系 正交设计

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阳春砂ISSR-PCR反应体系的建立和优化 被引量：7

19

作者 黄琼林 杨锦芬 +3 位作者 严萍 詹若挺 徐晖 陈蔚文 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期2478-2480,共3页

目的建立起适合阳春砂的ISSR-PCR反应体系。方法综合运用单因素实验和L9(34)正交实验两种方法,对DNA模板、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶等因素进行优化,以及采用温度梯度筛选引物的退火温度。结果最终获得的阳春砂的最优ISSR-PCR体系为:... 目的建立起适合阳春砂的ISSR-PCR反应体系。方法综合运用单因素实验和L9(34)正交实验两种方法,对DNA模板、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶等因素进行优化,以及采用温度梯度筛选引物的退火温度。结果最终获得的阳春砂的最优ISSR-PCR体系为:总体积为20μl,其中包括10×ExTaqBuffer(含15mmol·L-1Mg2+)2μl,25ngDNA模板,0.50μmol·L-1引物,0.75mmol·L-1dNTPs和1.0UExTaq酶。通过温度梯度筛选出引物UBC808的最佳退火温度为52.0℃。结论这一优化体系为阳春砂的ISSR分析奠定了基础。 展开更多

关键词 阳春砂 issr-pcr反应体系 单因素实验 正交实验 温度梯度

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万寿菊雄性不育系ISSR-PCR体系建立与优化 被引量：7

20

作者 伍亚平 唐道城 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期273-280,共8页

以9个万寿菊雄性不育系总DNA为材料,利用单因素试验和正交试验设计对Mg2+、dNTPs、引物和Taq酶的浓度进行筛选,然后在此基础上筛选模板DNA浓度及ISSR引物并对引物退火温度进行梯度检测,优化得到最佳的ISSR-PCR反应体系,各个因素的最佳... 以9个万寿菊雄性不育系总DNA为材料,利用单因素试验和正交试验设计对Mg2+、dNTPs、引物和Taq酶的浓度进行筛选,然后在此基础上筛选模板DNA浓度及ISSR引物并对引物退火温度进行梯度检测,优化得到最佳的ISSR-PCR反应体系,各个因素的最佳水平为:在25μL反应体系中,Mg2+浓度为1.5mmol/L、dNTPs浓度为0.20mmol/L、引物浓度为0.5μmol/L、模板DNA为60ng、TaqDNA聚合酶含量为1U。 展开更多

关键词 万寿菊 雄性不育系 issr-pcr反应体系 正交试验

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