外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞体内致瘤抑制作用 被引量：5

1

作者 李文玲 赵文清 +4 位作者 周娜静 韩硕 王彦玲 蒋常文 闫蕴力 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第1期95-99,共5页

将转IL-18基因的C6/IL-18细胞接种于SD大鼠颅内,以接种C6细胞为对照。致瘤21天后磁共振成像下测量肿瘤大小。然后行病理切片,HE染色观察肿瘤组织形态学变化;应用免疫组织化学技术检测增殖性细胞核抗原(proliferation cell nuclear antig... 将转IL-18基因的C6/IL-18细胞接种于SD大鼠颅内,以接种C6细胞为对照。致瘤21天后磁共振成像下测量肿瘤大小。然后行病理切片,HE染色观察肿瘤组织形态学变化;应用免疫组织化学技术检测增殖性细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)。应用流式细胞(flow cytometer,FCM)技术检测细胞周期和细胞凋亡的改变,以及记忆性T淋巴细胞抗原CD45RO表达。结果显示,C6/IL-18细胞成瘤体积为(49.3±11.5)mm3;亲代C6细胞成瘤体积为(232.6±22.3)mm3,二者差异明显。HE染色观察可见C6/IL-18细胞形成的肿瘤区内少见病理性核分裂相;瘤组织内肿瘤血管较亲代C6细胞明显减少。C6/IL-18肿瘤细胞核PCNA表达为+++;对照组为++。FCM检测结果表明,C6/IL-18细胞形成的肿瘤S期和G2/M细胞明显减少,细胞凋亡程度明显增加;记忆型T淋巴细胞明显增多。表明IL-18基因转染后可直接抑制C6细胞增殖,并可能通过分泌IL-18激发机体免疫系统应答反应、抑制肿瘤血管生长、降低C6胶质瘤细胞的体内致瘤性。 展开更多

关键词 白介素18基因 C6胶质瘤细胞 致瘤性 细胞免疫

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逆转录病毒介导IL-18基因在大鼠胶质瘤细胞C6中的表达 被引量：3

2

作者 李文玲 闫蕴力 +3 位作者 单保恩 郑力芬 李巧霞 周娜静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期522-525,共4页

目的 :建立表达IL 18基因的大鼠胶质瘤细胞C6 /IL 18,并探讨外源性IL 18基因对C6细胞生长的影响。方法 :应用逆转录病毒载体 ,将IL 18基因导入C6细胞。经G4 18筛选后 ,获得表达IL 18分子的细胞克隆C6 /IL 18。用RT PCR法检测目的基因mRN... 目的 :建立表达IL 18基因的大鼠胶质瘤细胞C6 /IL 18,并探讨外源性IL 18基因对C6细胞生长的影响。方法 :应用逆转录病毒载体 ,将IL 18基因导入C6细胞。经G4 18筛选后 ,获得表达IL 18分子的细胞克隆C6 /IL 18。用RT PCR法检测目的基因mRNA的表达 ;用流式细胞和免疫细胞化学染色法检测目的蛋白的表达。用ELISA法检测C6 /IL 18细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN γ的能力 ,以确定IL 18的生物学活性。用MTT比色法检测细胞体外增殖的状况 ,用流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并建立大鼠胶质瘤模型 ,观察C6 /IL 18细胞体内致瘤性的改变。结果 :外源IL 18基因于mRNA水平和蛋白水平可获得稳定表达 ,并可诱生大鼠脾细胞分泌IFN γ。同时 ,该细胞系的体外增殖率及体内致瘤性 ,均较亲代C6胶质瘤细胞明显下降。结论 :外源性IL 18基因能部分地抑制C6细胞的体外增殖率和体内致瘤性。建立了可进一步用于相关肿瘤基因免疫和基因治疗研究的大鼠胶质瘤细胞系C6 /IL 18。 展开更多

关键词 il-18 大鼠 表达 胶质瘤细胞 目的基因 C6细胞 体内致瘤性 体外增殖 MRNA水平 分泌

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鸡IL-18真核表达质粒与新城疫病毒F基因疫苗联合免疫探讨 被引量：3

3

作者 谢安新 尹会方 +4 位作者 温纳相 黄桂菊 赵明秋 郑海华 黄青云 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期82-85,89,共5页

为探讨鸡IL-18基因真核表达质粒pcDNA-chIL-18在新城疫病毒(NDV)F基因疫苗免疫中的作用,克隆了新城疫病毒标准株F48E9的F基因,构建F基因重组真核表达质粒pcDNA-F;将11日龄试验鸡分为4组,每组10只,14日龄一免,28日龄二免,分别肌注pcDNA-F... 为探讨鸡IL-18基因真核表达质粒pcDNA-chIL-18在新城疫病毒(NDV)F基因疫苗免疫中的作用,克隆了新城疫病毒标准株F48E9的F基因,构建F基因重组真核表达质粒pcDNA-F;将11日龄试验鸡分为4组,每组10只,14日龄一免,28日龄二免,分别肌注pcDNA-F、pcDNA-F+pcDNA-chIL-18、新城疫传统疫苗(14日龄NDV弱毒疫苗首免,28日龄NDV油苗二免)、生理盐水,一免疫后第7、14、21、28 d均采血进行ND抗体(ELISA)检测和T淋巴细胞转化(MTT)试验;第29 d均肌注50LD50NDV强毒F48E9株.结果显示:免疫保护效率,生理盐水组0/10,pcDNA-F免疫组3/10,pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组5/10,新城疫传统疫苗免疫组10/10;ND抗体水平,pcDNA-F免疫组与pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组无差异(P>0.05),均显著低于传统疫苗免疫组(P<0.05);T细胞转化水平,pcDNA-F+pcDNA-chIL-18免疫组明显高于pcDNA-F免疫组(P<0.05),pcDNA-F免疫组与传统疫苗免疫组无差异(P>0.05).试验结果综合显示pcDNA-F免疫试验鸡可产生一定程度的免疫保护;pcDNA-chIL-18对pcD-NA-F具有一定的免疫增强作用. 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 基因疫苗 白细胞介素18基因

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共表达Asia1口蹄疫病毒P1-2A-3C基因和猪IL-18基因重组鸡痘病毒构建及表达 被引量：2

4

作者 鲁会军 霍晓伟 +3 位作者 任静强 常巧呈 金扩世 金宁一 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期30-35,共6页

为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A... 为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF),通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 Asia1口蹄疫病毒 鸡痘病毒载体 P1-2A基因 3C基因 il-18基因 表达

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IL-18基因多态性与首发精神分裂症患者的临床精神症状的相关性 被引量：2

5

作者 王小琼 钱正康 +4 位作者 惠李 朱程 吴兢琴 尹晓莉 刘芹 《中国现代医生》 2018年第10期1-4,共4页

目的探讨白介素-18(interleukin-18,IL-18)基因rs1946518多态性是否是首发精神分裂症的易感基因位点,并进一步检测其是否影响精神分裂症患者的临床症状。方法招募首发精神分裂症患者348例和健康对照者419名,临床症状采用阳性与阴性症状... 目的探讨白介素-18(interleukin-18,IL-18)基因rs1946518多态性是否是首发精神分裂症的易感基因位点,并进一步检测其是否影响精神分裂症患者的临床症状。方法招募首发精神分裂症患者348例和健康对照者419名,临床症状采用阳性与阴性症状量表(postive and negative syndrome scale,PANSS)进行评估,采用TaqMan SNP方法对IL-18基因rs1946518多态性进行基因分型为GG、GT、TT。制定CRF表,收集一般人口学和临床数据。结果 IL-18基因rs1946518位点基因型和等位基因的频率分布在首发精神分裂症患者与健康对照组间无显著性差异(χ~2=1.60,df=2,P=0.45;χ~2=0.73,df=1,P=0.39)。首发精神分裂症组按IL-18基因rs1946518位点的基因型进行分组分析:阳性症状(F=5.57,P=0.004)和临床症状总分(F=4.57,P=0.01)在组间出现显著差异。结论 IL-18基因rs1946518位点可能不参与首发精神分裂症的发病,但它影响首发精神分裂症患者的临床精神症状,尤其阳性症状。 展开更多

关键词 首发精神分裂症 il-18基因 临床症状 rs1946518

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人白介素18基因启动子多态性与儿童1型糖尿病的相关性研究

6

作者 董关萍 梁黎 +2 位作者 余钟声 邹朝春 周笑君 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期974-977,987,共5页

目的研究IL-18基因单核苷酸多态性与儿童1型糖尿病(T1DM)的关系。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和测序的方法,检测118例1型糖尿病患儿和150例正常儿童IL-18基因-137位点C/G和-607位点C/A单核苷酸的多态性。结果①IL-18... 目的研究IL-18基因单核苷酸多态性与儿童1型糖尿病(T1DM)的关系。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和测序的方法,检测118例1型糖尿病患儿和150例正常儿童IL-18基因-137位点C/G和-607位点C/A单核苷酸的多态性。结果①IL-18基因-607位点C/A的-607A等位基因在T1DM和对照组中的发生率分别为41%和53%,差异有统计学意义(P=0.01),两组间-137位点C/G的等位基因差异无统计学意义(P=0.37);②IL-18基因-137位点的CC、CG和GG基因型在T1DM和对照组中差异均无统计学意义(P>0.05);-607位点的CC基因型T1DM组显著高于正常对照组(P=0.03),AA基因型T1DM组显著低于正常对照组(P=0.03);IL-18基因-607位点的CC基因型的新发糖尿病患儿更易发生酮症酸中毒。③IL-18基因的-137G/-607C单体基因型在T1DM和正常对照组间的分布频率差异有统计学意义(P=0.03)。结论IL-18基因-607位点的CC基因型和-137G/-607C单体基因型可能与儿童1型糖尿病的发病有关,而-607位点的AA基因型可能是T1DM的保护性基因型。-607位点的CC基因型与儿童1型糖尿病患者临床表型存在显著的相关性。[临床儿科杂志,2007,25(12):974-977] 展开更多

关键词 il-18基因 单核苷酸多态性 1型糖尿病 儿童

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IL-18基因转染人膀胱癌T-24细胞及其表达的研究 被引量：1

7

作者 倪晓辰 刘爽 +1 位作者 张爱莉 刘铁军 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期652-655,共4页

目的:建立表达IL-18基因的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,探讨外源性IL-18基因对T-24细胞生长及其生物学性状的影响。方法:将插入IL-18基因的质粒,应用逆转录病毒载体LXSN感染ψ2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞,通过药物G418... 目的:建立表达IL-18基因的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,探讨外源性IL-18基因对T-24细胞生长及其生物学性状的影响。方法:将插入IL-18基因的质粒,应用逆转录病毒载体LXSN感染ψ2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞,通过药物G418筛选获得表达IL-18蛋白的PA317阳性细胞克隆,用IL-18/PA317培养上清转染T-24细胞,获得表达IL-18的IL-18/T-24细胞。分别用RT-PCR、ELISA和免疫组化染色分析IL-18/T-24细胞表达IL-18的mRNA和蛋白的水平,筛选出高表达IL-18的IL-18/T-24细胞克隆用于下层研究中;用流式细胞仪检测转染前后细胞的周期变化及细胞凋亡情况;用ELISA法检测IL-18/T-24细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力;采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法,测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。结果:外源性IL-18基因转染的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,在mRNA水平和蛋白水平均可获得稳定表达;并且,IL-18/T-24细胞的培养上清可明显促进小鼠脾细胞分泌IFN-γ(P<0.01)。IL-18/T-24细胞与LXSN/T-24和T-24比较,细胞周期及细胞凋亡率无显著性差异(P>0.05),IL-18/T-24细胞的增殖率与LXSN/T-24和T-24细胞相比虽有所降低,但无显著性差异(P>0.05)。结论:建立的稳定表达IL-18的IL-18/T-24细胞,既保持了肿瘤细胞原有的免疫原性,又具有分泌IL-18的功能,引起较强的免疫应答反应。IL-18/T-24细胞与LXSN/T-24和T-24细胞相比较,其生物学性状无明显差异,可进一步用于肿瘤相关免疫基因治疗的研究。 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 il-18基因 转染 人膀胱癌细胞

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基因测序筛选宫颈癌患者IL-18基因上游调控区多态性 被引量：1

8

作者 杨红玲 王前 +3 位作者 唐雯 郭彩娇 亓涛 平宝红 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2008年第10期1402-1404,共3页

目的:筛选宫颈癌患者IL-18基因上游调控区单核苷酸多态性位点,初步探讨IL-18基因单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性,为后续选择合适的SNPs标记进行宫颈癌风险预测提供参考。方法:常规方法抽提46例原发性宫颈癌患者和正常人群外周血单个核... 目的:筛选宫颈癌患者IL-18基因上游调控区单核苷酸多态性位点,初步探讨IL-18基因单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性,为后续选择合适的SNPs标记进行宫颈癌风险预测提供参考。方法:常规方法抽提46例原发性宫颈癌患者和正常人群外周血单个核细胞DNA;自行设计引物,对IL-18基因5′端(长约2kb)进行PCR,产物采用DNA测序方法进行分析。结果:在IL-18基因5′端区域内共筛查出3个候选SNPs,其中rs1946518和rs1946519的SNPs基因型在宫颈癌和正常人之间存在显著差异(P<0.05),且二者存在连锁关系;另一个位点rs360719似乎与宫颈癌呈负相关,但无统计学差异(P>0.05)。结论:采用小样本对特定人群IL-18基因进行测序可有效地筛选出候选SNPs;初步发现宫颈癌与IL-18基因上游调控区rs1946518和rs1946519SNPs有一定关系,为后续利用SNPs标记进行宫颈癌风险预测提供了研究基础。 展开更多

关键词 宫颈癌 DNA测序 il-18基因 单核苷酸多态性

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传染性法氏囊病病毒VP2基因与鸡IL-18成熟蛋白基因在杆状病毒表达系统中的双表达 被引量：1

9

作者 孔娜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期628-632,共5页

为了研制针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)的新型疫苗,将IBDV的VP2基因和鸡IL-18成熟蛋白(mChIL-18)基因分别插入到双表达载体pFastBacDual的启动子P10和PH的下游,构建重组转移质粒pFastBacDual-VP2-IL-18。将其转座入大肠杆菌DH10Bac,获... 为了研制针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)的新型疫苗,将IBDV的VP2基因和鸡IL-18成熟蛋白(mChIL-18)基因分别插入到双表达载体pFastBacDual的启动子P10和PH的下游,构建重组转移质粒pFastBacDual-VP2-IL-18。将其转座入大肠杆菌DH10Bac,获得了重组杆状病毒质粒,然后在昆虫细胞Sf9中双表达VP2-IL-18蛋白,并对双表达的VP2-IL-18进行生物学活性测定。结果显示,同一细胞中能分别表达出VP2蛋白和鸡IL-18蛋白,且表达的蛋白位于细胞胞质内。当VP2-IL-18的质量浓度为200ng/mL时能刺激鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ,IFN-γ的活性最高可达2.8×104 U/mL。当VP2-IL-18诱导产生的IFN-γ的浓度≥10U/mL时就能产生抑制水泡性口炎病毒的效果。结果表明,双表达蛋白VP2-IL-18可以产生较强的生物学活性,为研制新型传染性法氏囊病IBD疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 VP2基因 鸡 白介素18基因 杆状病毒表达系统

原文传递

含HSV-TK基因及IL-18基因复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定

10

作者 徐春华 刘越 +2 位作者 肖利民 邓圣泽 李东海 《中国医学创新》 CAS 2014年第36期13-15,共3页

目的:分别构建含TK及IL-18基因的重组腺病毒载体,并进行鉴定。方法:通过DNA重组技术,构建含有目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18;将上述重组腺病毒液感染293细胞,提取DNA,进行PCR鉴定;将病毒液感染293细胞,扩增病毒,用... 目的:分别构建含TK及IL-18基因的重组腺病毒载体,并进行鉴定。方法:通过DNA重组技术,构建含有目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18;将上述重组腺病毒液感染293细胞,提取DNA,进行PCR鉴定;将病毒液感染293细胞,扩增病毒,用OD260法测定病毒滴度。结果:经PCR鉴定,鉴定正确的腺病毒命名为Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18,测定病毒滴度Ad CMV-TK=1.28×109 PFU/m L;Ad CMV-IL-18=1.28×109 PFU/m L。结论:成功构建了含HSV-TK基因及IL-18基因重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了理论依据及实验数据。 展开更多

关键词 TK基因 il-18基因 腺病毒载体 构建 鉴定

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VP3、IL-18对小鼠体内骨肉瘤S-180细胞的治疗作用

11

作者 方策 张治宇 +1 位作者 杨英欣 程战 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2009年第4期19-21,共3页

目的:旨在探讨双基因(VP3、IL-18)抑制骨肉瘤S-180的联合抑瘤作用。方法:将VP3、IL-18基因插入pVAX1表达载体的pCMV启动子之下的EcoRⅠ位点,构建成pVVP3及pVVP3IL-18。将该重组质粒与单独表达凋亡素基因的重组质粒分别注射荷S-180肿瘤... 目的:旨在探讨双基因(VP3、IL-18)抑制骨肉瘤S-180的联合抑瘤作用。方法:将VP3、IL-18基因插入pVAX1表达载体的pCMV启动子之下的EcoRⅠ位点,构建成pVVP3及pVVP3IL-18。将该重组质粒与单独表达凋亡素基因的重组质粒分别注射荷S-180肿瘤细胞的BALB/C小鼠,按照质粒与脂质体3:1的比例混合,每3天注射1次,连续注射3次,比较抑瘤趋势和抑瘤率。结果:联合应用VP3基因和IL-18基因的重组病毒治疗组对肿瘤的抑瘤效果明显优于单独应用VP3基因的重组病毒治疗组。结论:凋亡素基因具有凋亡诱导效应及体内的抑瘤效应。凋亡素基因VP3与IL-18基因有协同抑瘤效应,VP3、IL-18联合基因治疗骨肉瘤可显著提高抑瘤效果。 展开更多

关键词 凋亡素基因 il-18基因 骨肉瘤S-180细胞

原文传递

溶瘤腺病毒介导的IL-18在黑素瘤A375细胞中的表达

12

作者 杨春华 刘彦群 +4 位作者 魏志平 毛立军 裴东生 史震 郑骏年 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2008年第9期516-518,共3页

目的构建携带人IL-18基因的溶瘤腺病毒,观察在A375细胞中IL-18基因的表达情况。方法将pZD55-IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞获得重组腺病毒。PCR鉴定条件增殖腺病毒ZD55- IL-18。以ZD55-IL-18感染人黑素瘤A375细胞系,... 目的构建携带人IL-18基因的溶瘤腺病毒,观察在A375细胞中IL-18基因的表达情况。方法将pZD55-IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞获得重组腺病毒。PCR鉴定条件增殖腺病毒ZD55- IL-18。以ZD55-IL-18感染人黑素瘤A375细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-18基因mRNA的表达;Western blot法检测腺病毒E1A的表达情况;结晶紫染色法检测细胞杀伤作用;MTY法检测细胞存活情况。结果PCR鉴定表明ZD55-IL-18构建成功;RT-PCR和Western blot结果表明,ZD55-IL-18能高效介导IL-18基因在A375细胞中的表达,并在肿瘤细胞内表达E1A;结晶紫染色和MTT结果表明,ZD55-IL-18对A375细胞有明显的杀伤作用。结论构建成功的溶瘤腺病毒ZD55-IL-18,可在A375细胞中高效表达IL-18基因,并能抑制黑素瘤细胞生长。 展开更多

关键词 溶瘤腺病毒 il-18 黑素瘤

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宫颈癌患者IL-18基因单核苷酸多态性的筛选

13

作者 杨红玲 王前 +2 位作者 唐雯 郭彩娇 平宝红 《检验医学与临床》 CAS 2007年第10期917-920,共4页

目的筛选宫颈癌患者IL-18基因单核苷酸多态性位点,初步探讨IL-18基因单核苷酸多态性与宫颈癌相关性,为后续选择合适的单核苷酸多态性标志进行宫颈癌风险预测提供参考。方法常规方法对原发性宫颈癌患者和健康人群46例进行外周血单个核细... 目的筛选宫颈癌患者IL-18基因单核苷酸多态性位点,初步探讨IL-18基因单核苷酸多态性与宫颈癌相关性,为后续选择合适的单核苷酸多态性标志进行宫颈癌风险预测提供参考。方法常规方法对原发性宫颈癌患者和健康人群46例进行外周血单个核细胞DNA抽提;自行设计引物,对IL-18基因5′端和6个外显子(长约5kb)进行PCR法,产物采用DNA测序方法进行分析。结果在IL-18基因5′端2kp和6个外显子区域内共筛查出7个候选单核苷酸多态性,频率约0.14%,其中rs1946518和rs1946519的单核苷酸多态性基因型在宫颈癌和健康人之间差异有统计学意义(P<0.05),且二者存在连锁关系;另有3个位点rs360719、rs360717和rs360718也存在连锁关系,可能与宫颈癌呈负相关,但差异无统计学意义(P>0.05);位于E4的rs11547404和1个未登陆的单核苷酸多态性分别在1例患者中检测到。结论采用小样本对特定人群IL-18基因进行测序可有效地筛选出候选单核苷酸多态性。初步发现宫颈癌与IL-18基因上游调控区rs1946518和rs1946519单核苷酸多态性有一定关系,为后续利用单核苷酸多态性标志进行宫颈癌风险预测提供了研究基础。 展开更多

关键词 宫颈癌 DNA测序 il-18基因 单核苷酸多态性

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猪白细胞介素18基因的克隆及真核表达重组质粒的构建

14

作者 石昂 时庆贺 +5 位作者 李新果 王玉国 杨利 李双双 陈陆 王川庆 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期2587-2592,共6页

为获得表达猪白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的真核表达重组质粒,试验通过RT-PCR从猪脾脏、肺脏和淋巴结组织中扩增猪IL-18全基因并定向克隆到真核表达载体pZJ-1,测序分析和酶切鉴定正确后,转染至293T细胞中,并通过实时荧光定量PCR... 为获得表达猪白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的真核表达重组质粒,试验通过RT-PCR从猪脾脏、肺脏和淋巴结组织中扩增猪IL-18全基因并定向克隆到真核表达载体pZJ-1,测序分析和酶切鉴定正确后,转染至293T细胞中,并通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别在基因和蛋白水平检测IL-18的表达。结果表明,试验成功构建了真核表达重组质粒pZJ-IL-18,且可以在293T细胞中表达IL-18基因。Western blotting试验证实,猪IL-18多克隆抗体能与约17ku的表达产物发生特异性反应,表明IL-18能正确表达且具有反应原性。本试验构建了表达猪IL-18基因的真核表达质粒,并在293T细胞中瞬时表达,为进一步研究IL-18的功能奠定基础。 展开更多

关键词 猪 il-18基因 真核表达载体 克隆

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表达白细胞介素18的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及抗肿瘤作用

15

作者 李望 郑骏年 +5 位作者 毛立军 郝林 郑宏祥 刘俊杰 裴冬生 印晓星 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1181-1183,共3页

目的观察表达白细胞介素18（IL-18）基因的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及其对Ketr-3细胞的杀伤作用。方法通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的条件增殖腺病毒（ZD55-EGFP）在肾癌Ketr-3细胞中的感染和增殖情况。分别... 目的观察表达白细胞介素18（IL-18）基因的条件增殖腺病毒在肾癌Ketr-3细胞中的生物活性及其对Ketr-3细胞的杀伤作用。方法通过荧光显微镜观察表达绿色荧光蛋白的条件增殖腺病毒（ZD55-EGFP）在肾癌Ketr-3细胞中的感染和增殖情况。分别将表达IL-18的条件增殖腺病毒（ZD55-IL-18）及表达IL-18的普通腺病毒（Ad-IL-18）感染人肾癌Ketr-3细胞系，通过Western blot法检测病毒E1A和IL-18蛋白的表达；免疫细胞化学染色检测IL-18抗原表达；TUNEL法检测Ketr-3细胞的凋亡情况；噻唑蓝（MTT）比色法检测Ketr-3细胞存活情况。结果ZD55-EGFP能有效感染肾癌Ketr-3细胞并在其中大量增殖。Western blot检测结果发现ZD55-IL-18能在肿瘤细胞内表达E1A并有效介导IL-18表达，在病毒感染Ketr-3细胞48h后，ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的IL-18蛋白表达量分别为255．6±3．1、118．7±2．9。免疫组织化学检测显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的IL-18抗原阳性率分别为（82．4±3．2）％和（23．4±1．9）％。TNUEL检测结果显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组的细胞凋亡率分别为（52．2±3．5）％和（25．5±1．9）％。病毒感染4d后，MTT检测结果显示ZD55-IL-18、Ad-IL-18处理组细胞存活率分别为（32．6±2．3）％和（73．3±2．5）％，表明ZD55-IL-18对Ketr-3细胞有显著的杀伤作用。结论ZD55-IL-18能在Ketr-3细胞中高效特异性表达IL-18基因并显示出良好的抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 肾癌 腺病毒 il-18

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中国桂西地区壮族人群白细胞介素-18基因rs360722G/A多态性研究

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作者 黄美金 韦叶生 +3 位作者 王春芳 覃雪英 陆春雷 邓凤莲 《微循环学杂志》 2014年第2期27-30,共4页

目的:了解白细胞介素-18(IL-18)基因单核苷酸多态性(SNP)各等位基因及基因型在中国桂西地区壮族人群中的分布频率,比较其在不同种族间分布的差异。方法:采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序法检测150例桂西地区壮族人群的IL-18基因rs36072... 目的:了解白细胞介素-18(IL-18)基因单核苷酸多态性(SNP)各等位基因及基因型在中国桂西地区壮族人群中的分布频率,比较其在不同种族间分布的差异。方法:采用单碱基延伸的PCR技术和DNA测序法检测150例桂西地区壮族人群的IL-18基因rs360722G/A多态性,并与人类基因组计划(Hapmap)公布的四组人群(中国北京汉族人、非洲黑人、欧洲白种人和日本东京人)的SNP分型数据中该基因的基因型及等位基因的分布频率进行比较分析。结果:中国桂西地区壮族人群IL-18rs360722基因型GG、GA、AA频率分别为39.3%、48.7%和12.0%;等位基因G、A频率分别为63.7%和36.3%,男女性别间比较差异无统计学意义(P>0.05);但与欧洲白种人、非洲黑人和北京汉族人群比较,其基因型和等位基因分布频率的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:中国桂西地区壮族人群中存在的IL-18基因多态性差异可能是一些疾病的临床表现与其它地区或种族有所不同的原因之一。 展开更多

关键词 白细胞介素-18基因 单核苷酸多态性 种族

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IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响 被引量：6

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作者 蒋常文 闫蕴力 +4 位作者 马卫东 郑力芬 翟丽东 李文玲 曹翠丽 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第3期339-342,共4页

探讨IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响。用MTT法和流式细胞术检测C6/IL-18细胞和C6细胞的增殖特性和细胞周期分布。免疫细胞化学检测C6/IL-18细胞和C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白表达。结果显示,与C6细胞相比C6... 探讨IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响。用MTT法和流式细胞术检测C6/IL-18细胞和C6细胞的增殖特性和细胞周期分布。免疫细胞化学检测C6/IL-18细胞和C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白表达。结果显示,与C6细胞相比C6/IL-18细胞的增殖能力降低,G0/G1期细胞增多而G2/M期细胞减少;PCNA、波形蛋白表达降低。研究表明,IL-18基因具有抑制C6胶质瘤细胞增殖、降低其恶性程度的作用。 展开更多

关键词 il-18基因转染 大鼠 C6胶质瘤细胞 生长特性 细胞增殖 基因治疗

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鸭IL-18基因克隆与序列分析 被引量：4

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作者 韩先干 黄青云 +2 位作者 尹会方 邓宪方 柯艳坤 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第9期3545-3547,共3页

[目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果... [目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果]测序结果表明,广东水鸭的IL-18基因开放阅读框为603 bp,编码201个氨基酸,分子量为23.2 kDa。序列分析表明,所获得的广东水鸭IL-18基因与GenBank中香港鸭的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为100%。它与鸡和火鸡的核苷酸同源性分别为86.9%和87.1%,而氨基酸同源性分别为96.5%和97.0%。[结论]进化树分析结果表明,鸭IL-18基因与鸡和火鸡进化关系较近。 展开更多

关键词 鸭il-18基因 RT-PCR 序列分析

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共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18的重组鸡痘病毒的构建 被引量：3

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作者 刘慧娟 金宁一 +6 位作者 马鸣潇 金明兰 张林 李旭 计越 鲁会军 金扩世 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期20-23,共4页

目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒... 目的:为获得能有效预防O型口蹄疫病毒的重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定基础。方法:在O型口蹄疫病毒P1-2A基因上游引入Kozak序列,下游通过Linker与细胞因子IL-18联接,获得P1-2A基因与猪IL-18基因融合表达基因盒P1-2A-IL-18,将该表达基因盒克隆至鸡痘病毒中间转移载体pUTAL-3C中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-3C-P1-2A-IL-18。通过脂质体转染法,将pUTAL-3C-P1-2A-IL-18与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过BrdU三次加压筛选,挑选出单克隆重组病毒株。结果:经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-IL-18基因盒。结论:成功获得了一株共表达O型口蹄疫病毒P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘毒疫苗候选株rFPV-3C-P1-2A-IL-18。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 鸡痘病毒活载体 P1-2A基因 il-18基因 3C基因

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外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞增殖及相关基因表达的影响 被引量：1

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作者 蒋常文 闫蕴力 +5 位作者 马卫东 高庆华 申园 郑力芬 王彦玲 周娜静 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第13期1214-1216,共3页

目的:研究IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞增殖活性及相关基因表达的影响.方法:用流式细胞仪观察C6/IL-18细胞周期、增殖指数的变化;用RT-PCR,蛋白印迹、免疫细胞化学方法分析C6/IL-18细胞cyc lin D1,cyc lin B1,Bc l-2 mR-NA及蛋白的表达... 目的:研究IL-18基因转染对C6胶质瘤细胞增殖活性及相关基因表达的影响.方法:用流式细胞仪观察C6/IL-18细胞周期、增殖指数的变化;用RT-PCR,蛋白印迹、免疫细胞化学方法分析C6/IL-18细胞cyc lin D1,cyc lin B1,Bc l-2 mR-NA及蛋白的表达.结果:与亲代C6细胞相比,C6/IL-18细胞表现为G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,细胞增殖指数(PI)降低.C6/IL-18细胞的cyc lin D1和cyc lin B1,Bc l-2 mR-NA及蛋白表达降低.结论:外源性IL-18基因可降低C6细胞的增殖活性,其机制可能与Bcl-2,cyclin B1和cyclin D1表达下调有关. 展开更多

关键词 Bcl-2 细胞周期蛋白 C6胶质瘤细胞 il-18基因转染 增殖指数

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