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鲤IGF2b基因内含子的克隆、基因组序列分析及慢病毒载体构建 被引量:6
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作者 苏胜彦 董在杰 +6 位作者 袁新华 梁政远 曲疆奇 张建桥 刘伟 马良骁 徐跑 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期77-85,共9页
为了了解鲤IGF2b基因与鲤生长性状之间的关系,以建鲤为试验材料,克隆了IGF2b基因内含子,分析其基因组序列的特点,构建了IGF2基因的慢病毒载体,同时观察其在293T细胞中的表达活性。结果获得鲤IGF2b 5 173 bp长度的基因组DNA序列(HM75589... 为了了解鲤IGF2b基因与鲤生长性状之间的关系,以建鲤为试验材料,克隆了IGF2b基因内含子,分析其基因组序列的特点,构建了IGF2基因的慢病毒载体,同时观察其在293T细胞中的表达活性。结果获得鲤IGF2b 5 173 bp长度的基因组DNA序列(HM755899),共有3个内含子,4个外显子;在3'非翻译区存在2个CpG岛,在5'端非翻译区存在(T)n重复序列;除此之外,成功构建了慢病毒载体质粒Lenti-IGF2b-IRES-EG-FP,转染293T细胞后,产生的重组慢病毒颗粒出现高表达绿色荧光,荧光定量PCR检测发现IGF2b基因在293T细胞中高表达。这些结果将为研究IGF2b基因在多态性、表达方面与鲤生长性状之间的关联奠定基础。 展开更多
关键词 igf2b 内含子 慢病毒载体
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基于黄河鲤新品系IGF2b基因SNPs获取体系的建立及在该品系选育中的应用 被引量:2
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作者 谢元澄 李欣原 +4 位作者 苏胜彦 梁敬东 徐跑 贺鑫晋 Bouzoualegh Raouf 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期686-694,共9页
为了建立鲤 IGF2b (insulin-like growth factor 2)基因全基因组信息 SNPs (single nucleotide polymorphism)的获取体系,并验证该获取体系在黄河鲤新品系选育中运用的适用性,本研究首先对 10个不同鲤品种的 33个鲤个体重测序数据进行分... 为了建立鲤 IGF2b (insulin-like growth factor 2)基因全基因组信息 SNPs (single nucleotide polymorphism)的获取体系,并验证该获取体系在黄河鲤新品系选育中运用的适用性,本研究首先对 10个不同鲤品种的 33个鲤个体重测序数据进行分析,整体上了解 IGF2b 基因的单核苷酸位点及其在基因组上的分布情况。然后在基因组 DNA 水平上分段获取 IGF2b 基因的 SNPs 信息,并以不同的鲤品种验证引物的适用性,最后在黄河鲤新品系中检测其应用。研究结果:获得 8 对聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)引物进行分段克隆的结果,并通过直接测序和限制性片段长度多态性来获取相应的 SNPs。经过直接测序,本文对黄河鲤、建鲤、黄河鲤和建鲤的正反交后代进行 PCR 检测发现条带单一,目地片段正确;结合黄河鲤新品系的体重数据,本文又以 IGF2b3#引物检测到一个与体重明显相关的 SNPs,同时检测到一个与该基因表达量相关的另一个 SNPs。本研究的方法能够在该基因全基因组范围内开展鲤分子育种中 SNPs 的检测,并验证发现黄河鲤新品系 IGF2b3#引物 227 号位点处,出现的突变位点使体重降低,且有一处 SNPs 与其表达量有关。这将为其他物种、其他功能基因的多态性分子标记研究提供思路。 展开更多
关键词 黄河鲤 品系选育 igf2b 分段克隆 SNPS 分子育种
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Expression and characterization of insulin-like growth factor II mRNA binding protein in the razor clam Sinonovacula constricta 被引量:2
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作者 Shumei Xie Donghong Niu +3 位作者 Yunchao Du Kanyun Wei Hai Dang Nguyen Jiale Li 《Aquaculture and Fisheries》 2017年第6期247-255,共9页
Insulin-like growth factor-II mRNA binding protein(igf2bp)is an mRNA binding protein that regulates the post-transcriptional fate of multiple transcripts.In this study,a novel igf2bp gene was identified in the razor c... Insulin-like growth factor-II mRNA binding protein(igf2bp)is an mRNA binding protein that regulates the post-transcriptional fate of multiple transcripts.In this study,a novel igf2bp gene was identified in the razor clam Sinonovacula constricta.The complete 2254 bp Sc-igf2bp cDNA consists of an open reading frame(ORF)encoding 610 amino acid(aa)residues.The deduced protein includes a single RNA recognition motif(RRM)and four K homology(KH)domains.Sc-igf2bp transcripts were expressed widely during different developmental stages and in adult tissues,and a 95 kDa recombinant pEGX-4T-1-Scigf2bp protein was expressed in Escherichia coli Rosetta(DE3)pLysS cells and purified using Glutathione Sepharose 4B resin.Activity was evaluated by GST pull-down assays,and mass spectrometry results indicated that Sc-igf2bp may participate in RNA-related processes.The findings provide a basis for further research on the role of igf2bp in regulating the growth and development of the razor clam. 展开更多
关键词 Sinonovacula constricta igf2b DEVELOPMENT Recombinant protein GST pull-down
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绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记效果
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作者 苏胜彦 陈为先 +7 位作者 马佳璐 张勇 胡鹏晨 闻剑旻 张成锋 董在杰 袁新华 徐跑 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期331-336,共6页
以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因(Green fluorescence protein,GFP),然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,... 以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因(Green fluorescence protein,GFP),然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,使用浓度为1μg/μL的质粒与慢病毒表达载体进行连接,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,表明本实验获得的GFP和慢病毒载体整合成功;用此转染293T细胞,通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取RNA,然后按照Fermentas公司的M-MLV操作说明书进行反转录,得到IGF2b基因后加酶切位点进行扩增,将IGF2b整合到用GFP作为标记基因的慢病毒载体上,再以此转染建鲤未分裂的受精卵,48 h后通过荧光显微镜也观察到了绿色荧光蛋白的表达。试验表明绿色荧光蛋白在IGF2b基因慢病毒载体感染鲤受精卵中的标记是成功的。这些结果为基于含有GFP慢病毒转基因鱼育种技术的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 慢病毒载体 igf2b 标记效果
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鲤IGF2b基因5'侧翼区序列克隆及不同鲤该区域GC富集区的甲基化分析
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作者 张成锋 苏胜彦 +3 位作者 朱健 朱文彬 刘珊 董在杰 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期98-104,共7页
鲤(Cyprinus carpio)胰岛素样生长因子2b(insulin-like growth factor 2b,IGF2b)基因为鲤IGF基因家族重要的成员,已有的研究表明5'侧翼区序列对其功能的发挥有重要作用。因此,采用基因组步移法获取5'侧翼区序列,通过亚硫酸盐修... 鲤(Cyprinus carpio)胰岛素样生长因子2b(insulin-like growth factor 2b,IGF2b)基因为鲤IGF基因家族重要的成员,已有的研究表明5'侧翼区序列对其功能的发挥有重要作用。因此,采用基因组步移法获取5'侧翼区序列,通过亚硫酸盐修饰的方法分析不同品种该区域GC富集区的甲基化状况。本文成功从鲤基因组DNA中获得695 bp的IGF2b 5'侧翼区序列。已获取的IGF2b 5'侧翼区序列经过TFSEARCH分析后发现了多个转录因子结合位点和TATA框,通过BLAST比对发现,鲤IGF2b 5'侧翼区DNA序列与斑马鱼(Danio rerio)IGF2b基因相比,相似性为87%。检测该区域富含GC的序列17个位点,发现建鲤(C.c.var.jian)有2个个体的3个位点出现甲基化,而黄河鲤(C.c.haematopterus)只有1个个体1个位点出现甲基化,这说明2个品种鲤在这个区域出现甲基化修饰的几率低,也验证了这2品种在该基因该区域GC富集区是稳定的。 展开更多
关键词 igf2b 5’侧翼区 甲基化
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慢病毒载体介导的IGF2b基因在鲤鱼背部肌肉组织中过表达对鲤鱼生长的影响 被引量:4
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作者 张宁 苏胜彦 +3 位作者 袁新华 马庆男 董在杰 张成锋 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2015年第3期31-35,共5页
为进一步了解胰岛素样生长因子2b(IGF2b)基因在靶组织过表达对鲤鱼生长的影响,将含IGF2b基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒载体感染鲤鱼背部肌肉组织,注射剂量(每条)分别为10、20、40μL,探讨基因过表达对鲤鱼生长的影响。结... 为进一步了解胰岛素样生长因子2b(IGF2b)基因在靶组织过表达对鲤鱼生长的影响,将含IGF2b基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒载体感染鲤鱼背部肌肉组织,注射剂量(每条)分别为10、20、40μL,探讨基因过表达对鲤鱼生长的影响。结果表明:注射48h后,试验组鲤鱼背部肌肉组织可见绿色荧光,4个月后,与对照组相比,试验组体重、体长、体高和体厚均显著提高。为检测慢病毒处理对鲤鱼血清指标的影响,检测与肝功能、肾功能及IGF2b基因路径相关的指标,结果表明:各组间血清IGF2、IGF1R、IGF2R浓度差异均不显著;与对照组相比,10μL注射组碱性磷酸酶、丙氨酸转移酶、总蛋白、尿素氮显著增高,而20、40μL注射组各血清指标与对照组差异均不显著。为验证试验组目的基因的过表达,通过荧光定量PCR检测试验组及对照组间IGF2b基因的表达情况,结果表明:IGF2b基因在试验鲤鱼背部肌肉组织中成功过表达。正是IGF2b基因在鲤鱼背部肌肉组织中的过表达,促进了鲤鱼的生长,且在试验剂量下病毒液对鲤鱼血清无影响。 展开更多
关键词 鲤鱼 igf2b基因 慢病毒载体 过表达 生长
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背部肌肉注射含IGF2b基因慢病毒载体对鲤鱼生长的影响 被引量:2
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作者 雷莹 苏胜彦 +2 位作者 丁敬波 刘浩亮 袁新华 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第7期8-14,28,共8页
【目的】研究IGF2b基因对建鲤生长及体型的影响。【方法】用含有IGF2b基因的慢病毒载体注射建鲤背部肌肉组织,注射量分别为10,20和40μL/尾,阴性对照组不进行任何处理,阳性对照组注射20μL/尾去离子水。在相同饲养条件下饲养满9个月后,... 【目的】研究IGF2b基因对建鲤生长及体型的影响。【方法】用含有IGF2b基因的慢病毒载体注射建鲤背部肌肉组织,注射量分别为10,20和40μL/尾,阴性对照组不进行任何处理,阳性对照组注射20μL/尾去离子水。在相同饲养条件下饲养满9个月后,分别测量建鲤的各项生长指标。【结果】注射IGF2b基因的建鲤体质量、体长、体高、体厚、尾长均显著大于阴性对照组和阳性对照组,说明IGF2b基因在建鲤背部肌肉组织中过表达对鲤第2阶段生长同样具有促进作用,IGF2b基因在鲤背部肌肉组织中过表达对鲤的体型也有一定的作用。鲤的体长、体高、体厚的3D图也说明,随着IGF2b基因注射,鲤鱼倾向于具有更大的体长、体高、体厚的值。用多元逐步回归法做体质量的回归方程可知,鲤鱼的体质量与体长、体厚、尾长具有线性关系,利用体长、体厚、尾长这3个自变量进行聚类分析,即可准确得到鲤鱼5个注射组间的聚类关系:阴性对照组与阳性对照组共属一类,3个注射组同为一类,其中注射组中10μL注射组和20μL注射组为一类,40μL注射组为一类,IGF2b基因对鲤鱼体型的影响在注射量大于20μL/尾之后产生了转折,出现了负增长。【结论】IGF2b基因对鲤第2阶段生长同样具有促进作用,且对鲤鱼的体型有一定影响。 展开更多
关键词 建鲤 igf2b基因 慢病毒载体 不同生长阶段 背部肌肉注射 聚类分析
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IGF2b基因注射鲤鱼越冬后补偿生长特点分析 被引量:1
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作者 张亚楠 苏胜彦 袁新华 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2015年第3期26-30,共5页
为了解注射含IGF2b基因的慢病毒载体的鲤鱼越冬后补偿生长的特点,通过建立补偿指数假设、YN效应假设和补偿水平设置3个假设,探讨每条注射10、20、40μL IGF2b基因慢病毒载体的鲤鱼越冬后是否存在补偿生长、补偿生长程度大小以及补偿生... 为了解注射含IGF2b基因的慢病毒载体的鲤鱼越冬后补偿生长的特点,通过建立补偿指数假设、YN效应假设和补偿水平设置3个假设,探讨每条注射10、20、40μL IGF2b基因慢病毒载体的鲤鱼越冬后是否存在补偿生长、补偿生长程度大小以及补偿生长对体重的影响。结果表明:在特定水平下,补偿的有无对收获体重和增重影响明显,且从最高补偿水平的角度发现,随着补偿程度的提高,收获体重和增重明显增加,20μL注射组从标记到收获期间增重最明显,在体长、体厚、体高3个性状上均表现出补偿性。试验为研究鲤鱼补偿生长的生理学特性及应用提供了依据。 展开更多
关键词 鲤鱼 igf2b基因 慢病毒载体 补偿指数假设 YN效应假设 补偿水平
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