IFNβ基因编码序列在SV40早期启动子控制下在中国地鼠卵细胞中表达 被引量：3

1

作者 王晓鸣 于曼 +3 位作者 王嘉玺 吴淑华 胡裕文 侯云德 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1989年第4期312-317,共6页

含有人成纤维细胞干扰素(IFNβ)基因编码序列的HindⅡ片段,去掉了IFNβ基因5′全部侧翼调控序列,与SV40早期区RNA起始部位下游60个bp处连接,与可选择标记二氢叶酸还原酶(dhfr)基因一道共转化dhfr缺陷的中国地鼠卵(CHO)细胞,经过初步筛选... 含有人成纤维细胞干扰素(IFNβ)基因编码序列的HindⅡ片段,去掉了IFNβ基因5′全部侧翼调控序列,与SV40早期区RNA起始部位下游60个bp处连接,与可选择标记二氢叶酸还原酶(dhfr)基因一道共转化dhfr缺陷的中国地鼠卵(CHO)细胞,经过初步筛选,在未经病毒等诱导条件下,在转化细胞株中测到构成性表达水平为852U/2×10~6细胞·ml·48小时的IFNβ干扰素活性。 展开更多

关键词 ifnβ基因 启动子 组成性表达

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猪干扰素β基因的分子克隆与测序 被引量：20

2

作者 夏春 刘津 +3 位作者 杨琪 汪明 郭玉璞 蒋金书 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2000年第6期6-7,共2页

采用 PCR技术扩增和克隆了猪β干扰素 (IFN-β)基因。克隆片段长 6 6 8个核苷酸 ,编码 186个氨基酸 ;其中 ,76～ 6 36位含有 1个 ORF,蛋白分子量 2 1.

关键词 猪 干扰素 ifn-β基因 PCR法 分子克隆 基因测序

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携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体的构建 被引量：9

3

作者 潘欣 柯重伟 +5 位作者 潘卫 武文斌 张斌 贺祥 曹广文 戚中田 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第5期520-523,共4页

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C 区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DT_(390)-VEG_(exon7)内部的 CMV 启动子及 DT_(390)序列使之成为 p3.1V_7;从逆转录病毒载体 pMNSM-IFN-β质粒中... 目的构建乙型肝炎病毒(HBV)C 区启动子调控的人β干扰素(IFN-β)基因的真核表达载体.方法切除真核表达载体 pcDNA3.1(+)-DT_(390)-VEG_(exon7)内部的 CMV 启动子及 DT_(390)序列使之成为 p3.1V_7;从逆转录病毒载体 pMNSM-IFN-β质粒中游离人β干扰素基因;用 PCR 方法从 pGEM.7Z-HBV 质粒中扩增人乙型肝炎病毒(HBV)的 C区启动子序列;通过转换酶切位点,将 HBV C 区启动子和人β干扰素基因共同插入到 p3.1V_7中,构建成受 HBV C 区启动子控制的人β干扰素基因真核表达载体 p3.1 V_7-HBV.CP-IFN-β.结果构建完成携带人β干扰素基因的人乙型肝炎特异性真核表达载体.结论该载体为慢性病毒性肝炎的特异性干扰素基因治疗奠定了基础. 展开更多

关键词 ifn-β基因 乙型肝炎病毒 真核表达载体 治疗

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从江香猪IFN-β基因的序列分析及原核表达 被引量：6

4

作者 温贵兰 张升波 +6 位作者 李昌红 徐丽 田浪 文明 王开功 程振涛 赵德刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期10-19,共10页

试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上... 试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上,获得重组质粒pET28a-CJpoIFN-β,并利用生物学软件对江香猪IFN-β基因编码区进行序列分析;将鉴定正确的重组质粒pET28a-CJpoIFN-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE与Western blotting分析原核表达蛋白。结果表明,从江香猪IFN-β基因编码区长为561bp,编码186个氨基酸;该蛋白为分泌性蛋白,前21个氨基酸为信号肽序列;二级结构主要以α-螺旋(77.42%)和无规则卷曲(17.74%)为主。从江香猪与其他猪源IFN-β基因核苷酸序列同源性为99.5%～100.0%,与禽的同源性最低(35.2%);从江香猪与巴马猪、梅山猪IFN-β氨基酸同源性均为100.0%,但与贵州白香猪IFN-β同源性为99.5%,存在E43Q、K73R和C161R3处氨基酸的差异。Western blotting结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,条带大小约为24ku。本试验结果为进一步研究IFN-β基因生物学活性及加快从江香猪这一品种资源的有效利用提供参考依据。 展开更多

关键词 从江香猪 ifn-β基因 序列分析 原核表达

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水貂β-干扰素基因的克隆、测序与遗传进化分析 被引量：4

5

作者 张译元 张廷红 常维山 《中国兽药杂志》 2012年第1期10-12,18,共4页

根据GenBank发表的序列,应用DNAstart分析软件设计并合成一对引物用于扩增水貂β干扰素(IFN-β)基因,从病死水貂的脾脏中提取总RNA,RT-PCR扩增水貂β干扰素基因,获得了约561 bp片段,将其克隆到pEasy-T1载体中,进行序列分析,证实该基因... 根据GenBank发表的序列,应用DNAstart分析软件设计并合成一对引物用于扩增水貂β干扰素(IFN-β)基因,从病死水貂的脾脏中提取总RNA,RT-PCR扩增水貂β干扰素基因,获得了约561 bp片段,将其克隆到pEasy-T1载体中,进行序列分析,证实该基因是水貂β干扰素基因。将测序结果与GenBank发表的雪貂(EF581890.1)的IFN-β基因序列进行比较,核苷酸序列同源性为100.0%,氨基酸同源性为100.0%。同时将核苷酸序列、氨基酸序列与其他几种犬科动物进行遗传进化分析,其同源性分别在83.0%～100.0%之间和69.4%～100.0%之间。 展开更多

关键词 水貂 ifn—β基因 克隆测序 遗传进化

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梅花鹿IFN-β1的原核表达及活性鉴定 被引量：4

6

作者 苏凤艳 李哲 +3 位作者 刘存发 宗颖 曾范利 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期136-139,共4页

为表达具有抗病毒活性的梅花鹿干扰素β1(IFN-β1),本研究通过PCR扩增梅花鹿IFN-β1基因,将其克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组质粒p ET-IFNβ1,并将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后,得到高效表达。SDS-P... 为表达具有抗病毒活性的梅花鹿干扰素β1(IFN-β1),本研究通过PCR扩增梅花鹿IFN-β1基因,将其克隆至原核表达载体p ET-28a中,构建重组质粒p ET-IFNβ1,并将其转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后,得到高效表达。SDS-PAGE与western blot分析结果表明,梅花鹿IFN-β1重组蛋白的分子量大小约为24 ku,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的59.02%。将Ni柱纯化的p ET-IFNβ1诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具有抗病毒活性,其抗病毒活性可以达到10×53.81U/0.1 m L。梅花鹿INF-β1的表达为梅花鹿INF-β1的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 梅花鹿 ifn-β1基因 原核表达 活性鉴定

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猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

7

作者 王蕊 张改平 +5 位作者 乔松林 刘永晖 蒋志政 万博 鲍登克 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期137-140,144,共5页

为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反... 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 实时荧光定量PCR ifn-β基因 IRF-3基因

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梅花鹿IFN-β1基因的克隆与分子进化分析 被引量：3

8

作者 苏凤艳 李哲 +3 位作者 刘存发 宗颖 曾范利 王全凯 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第1期14-19,共6页

根据GenBank中牛干扰素-β1（IFN-β1）基因序列（E00137）,设计并合成了1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-β1全基因,并克隆、测序。结果表明：梅花鹿IFN-β1基因全长561 bp,编码186个氨基酸,含有6个与二... 根据GenBank中牛干扰素-β1（IFN-β1）基因序列（E00137）,设计并合成了1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-β1全基因,并克隆、测序。结果表明：梅花鹿IFN-β1基因全长561 bp,编码186个氨基酸,含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸,3个糖基化位点,成熟蛋白含有4个α螺旋,3个β折叠区,7个β转角。序列比较分析发现,梅花鹿IFN-β1基因序列与GenBank发表的23种IFN-β1基因核苷酸序列同源性为3.2%~91.1%,氨基酸序列同源性为21.9%~79.7%。梅花鹿与其他23种动物的IFN-β1基因序列分析和系统进化树分析表明,IFN-β1基因存在种属特异性。梅花鹿INF-β1基因的成功克隆,为进一步研究梅花鹿INF-β1基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。 展开更多

关键词 梅花鹿 ifn-β1基因 序列分析 分子进化

原文传递

驯鹿干扰素β1基因的克隆及遗传进化分析 被引量：2

9

作者 翟健程 王强辉 +1 位作者 夏彦玲 李和平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3570-3577,共8页

试验旨在从驯鹿鹿茸顶端组织中克隆干扰素β1(interferon beta 1,IFNβ1)基因全长序列,分析其分子特性,为研究其生物学活性及实际应用奠定基础。根据GenBank数据库中牛、羊等近缘物种IFNβ1基因的保守序列设计1对引物,以驯鹿鹿茸顶端间... 试验旨在从驯鹿鹿茸顶端组织中克隆干扰素β1(interferon beta 1,IFNβ1)基因全长序列,分析其分子特性,为研究其生物学活性及实际应用奠定基础。根据GenBank数据库中牛、羊等近缘物种IFNβ1基因的保守序列设计1对引物,以驯鹿鹿茸顶端间充质层组织基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增得到驯鹿IFNβ1基因并克隆、测序,利用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果发现,驯鹿IFNβ1基因全长561bp,共编码186个氨基酸,含有3个糖基化位点;其编码蛋白含有4个α螺旋、4个β折叠区、7个β转角。将驯鹿IFNβ1基因推导的氨基酸序列与其他14种哺乳动物进行遗传进化分析发现,其同源性为45.1%~92.0%;驯鹿与其他动物IFNβ1基因序列分析和系统进化树分析表明,IFNβ1基因存在种属差异性,亲缘关系越近,同源性越高。本研究结果为驯鹿IFNβ1基因的进一步研究和应用提供了基础试验数据。 展开更多

关键词 驯鹿 ifnβ1基因 序列分析 遗传进化

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家兔β干扰素启动子质粒的构建及其启动子活性鉴定 被引量：2

10

作者 陈萌萌 范志宇 +6 位作者 胡波 宋艳华 魏后军 仇汝龙 朱伟峰 徐为中 王芳 《江苏农业科学》 2019年第23期78-81,共4页

通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序... 通过家兔体内感染兔出血症病毒(RHDV)后发现体内干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)基因表达水平明显降低。为体外研究RHDV感染宿主后IFN-β启动子的调控机制,首先以家兔肝细胞总cDNA为模板,利用PCR扩增IFN-β基因启动子区的序列,经测序确定全长为550bp;预测软件分析,与人源IFN-β基因启动子的转录上调区域(positive regulation domain,PRD)高度同源;随后将启动子全长和一系列转录元件克隆至pGL6-Basic荧光素酶表达载体中,成功构建重组体报告基因质粒后,瞬转RK-13细胞,利用试剂盒检测荧光素酶的相对活性。结果显示,克隆的IFN-β基因启动子区和AP-1、IRF3、NF-κB和IRF7等转录元件具有显著的活性,为研究兔出血症病毒对宿主IFN-β基因的转录调控机制提供了有效的工具。 展开更多

关键词 家兔 兔出血症病毒 ifn-β基因 启动子 荧光素酶 转录调控

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牦牛IFN-β基因在毕赤酵母中的分泌表达

11

作者 王生富 孙晓林 +3 位作者 段风云 何延华 闫鸿斌 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期6-10,共5页

用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS... 用真核表达引物从pGEM-yakIFN-β重组质粒中扩增出牦牛IFN-β基因,将目的基因和真核表达载体pPIC9K连接转入E.coli的JM109中,得到pPIC9K-yakIFN-β重组表达质粒.通过电击法将经SalⅠ线性化的pPIC9K-yakIFN-β质粒转化到巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞中,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,利用甲醇诱导表达,分泌表达产物用MTT法检测其生物学活性.经SDS-PAGE电泳分析表明:表达出约22ku大小分泌于胞外的牦牛IFN-β蛋白分子量,比理论值稍大;MTT结果表明:纯化的重组yak-IFN-β蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性. 展开更多

关键词 牦牛 ifn-β基因 巴斯德毕赤酵母 分泌表达

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梅花鹿干扰素-β1在MDBK细胞中表达及抗牛病毒性腹泻病毒活性检测 被引量：1

12

作者 刘千辉 李哲 +2 位作者 苏凤艳 曾范利 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期907-910,共4页

为真核表达梅花鹿干扰素β1(IFN-β1)并检测其抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)活性,本研究以梅花鹿肝脏基因组为模板,通过PCR扩增出IFN-β1的编码区序列,克隆于真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-IFNβ1,并转染MDBK细胞进行表达... 为真核表达梅花鹿干扰素β1(IFN-β1)并检测其抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)活性,本研究以梅花鹿肝脏基因组为模板,通过PCR扩增出IFN-β1的编码区序列,克隆于真核表达载体pVAX1中,构建重组真核表达质粒pVAX1-IFNβ1,并转染MDBK细胞进行表达。结果显示,将pVAX1-IFNβ1转染MDBK细胞后经western blot和间接免疫荧光法检测和鉴定证实,转染的重组质粒能够在MDBK细胞中正确表达目的蛋白,表达的重组蛋白约为25 ku。此外,采用细胞病变抑制法检测表明转染后重组细胞表达的IFN-β1具有抗BVDV活性。本研究为梅花鹿IFN-β1蛋白抗病毒分子机制的研究及抗病毒药物的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 梅花鹿 ifn-β1基因 真核表达

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水貂干扰素-β基因的克隆与序列分析

13

作者 杨培培 衣服德 +1 位作者 冯永胜 张倩 《山东畜牧兽医》 2013年第3期3-4,共2页

采集新鲜水貂肝脏组织,提取基因组DNA,采用PCR技术扩增水貂IFN-β基因,克隆到pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,提取重组质粒,经PCR和EcoRⅠ及SalⅠ双酶切鉴定,筛选阳性重组克隆。核苷酸序列分析证实,所克隆到的水貂IFN-β基因全长56lbp... 采集新鲜水貂肝脏组织,提取基因组DNA,采用PCR技术扩增水貂IFN-β基因,克隆到pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,提取重组质粒,经PCR和EcoRⅠ及SalⅠ双酶切鉴定,筛选阳性重组克隆。核苷酸序列分析证实,所克隆到的水貂IFN-β基因全长56lbp,编码186个氨基酸,核甘酸序列同源性为100%。与GneBnak上已公布的人类的INF-β基因序列同源性为34.06%,与鼠的同源性为37.60%,与犬的同源性为99.15%,与鼬的同源性为99.64%。 展开更多

关键词 水貂 干扰素 ifn-β基因 克隆 序列分析

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人成纤维细胞干扰素基因侧翼序列在表达中的调控作用

14

作者 王晓鸣 侯云德 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 1989年第1期1-5,共5页

本文从转录水平和翻译水平两个方面回顾了近年来人成纤维细脃干扰素(IFN-β)基因表达的研究进展。主要论述了IFN-β基因转录区5'侧翼序列在基因转录时的调控作用以及IFN-βmRNA编码区侧翼的非翻译区对翻译效率的影响。介绍了以上研... 本文从转录水平和翻译水平两个方面回顾了近年来人成纤维细脃干扰素(IFN-β)基因表达的研究进展。主要论述了IFN-β基因转录区5'侧翼序列在基因转录时的调控作用以及IFN-βmRNA编码区侧翼的非翻译区对翻译效率的影响。介绍了以上研究对于蛋白质表达传统理论提出的新见解。提示了新的进展对IFN-β基因在真核细胞中有效表达的现实意义。 展开更多

关键词 ifn-β基因 侧翼序列 调控序列

原文传递

合作猪IFN-β基因编码区克隆及生物信息学分析 被引量：1

15

作者 谢开会 王伟 +3 位作者 杨姣姣 闫尊强 杨巧丽 滚双宝 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1567-1575,共9页

克隆合作猪干扰素β(Interferon-beta,IFN-β)基因的编码区序列(Coding region sequence,CDS),预测分析其结构与功能。以NCBI/GenBank中猪IFN-β(登录号:NM_001003923.1)的序列设计特异性引物,通过TA克隆技术得到合作猪IFN-β基因完整CD... 克隆合作猪干扰素β(Interferon-beta,IFN-β)基因的编码区序列(Coding region sequence,CDS),预测分析其结构与功能。以NCBI/GenBank中猪IFN-β(登录号:NM_001003923.1)的序列设计特异性引物,通过TA克隆技术得到合作猪IFN-β基因完整CDS区,用生物信息学方法对其进行分析。结果表明,合作猪IFN-β基因CDS区全长561 bp,编码186个氨基酸,与参考序列相比,其编码区的第177位点处的C突变为T,为同义突变。分子质量约为21.95 ku,理论等电点(PI)为4.93,不稳定系数为62.91,平均疏水性为-0.172;二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与二级结构预测基本一致。合作猪与巴马猪、梅山猪和疣猪IFN-β核酸序列的相似性为99.47%、99.82%和98.75%。进化树结果表明,合作猪与梅山猪亲缘关系最近。合作猪IFN-β属于干扰素ab超家族,是不稳定的酸性亲水性蛋白,含有信号肽和跨膜区。 展开更多

关键词 合作猪 ifn-β基因编码区 克隆 生物信息学分析

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