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体外连接法快速高效构建表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒载体
1
作者
王家宁
王传成
+1 位作者
郭凌郧
黄永章
《郧阳医学院学报》
2006年第2期65-69,F0002,共6页
目的:采用体外连接法构建和制备重组腺病毒Adeno-X-LacZ,为构建具有治疗价值的重组腺病毒载体奠定基础。方法:PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切pShuttle2-LacZ穿梭质粒,回收4.6 kb的LacZ基因表达盒,与经过相同酶切的Adeno-X病毒DNA连接,连接产物用...
目的:采用体外连接法构建和制备重组腺病毒Adeno-X-LacZ,为构建具有治疗价值的重组腺病毒载体奠定基础。方法:PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切pShuttle2-LacZ穿梭质粒,回收4.6 kb的LacZ基因表达盒,与经过相同酶切的Adeno-X病毒DNA连接,连接产物用SwaⅠ酶切,最终产物转化DH5α。重组质粒用PCR法和PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切鉴定。pAdeno-X-LacZ用PacⅠ线性化后,用脂质体介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsC l密度梯度离心法纯化重组腺病毒Adeno-X-LacZ。采用X-gal染色观察Adeno-X-LacZ在AD293细胞内包装和HVSMC表达情况。结果:PCR扩增可见312 bp特异性条带,PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切重组质粒后释放出4.6 kb LacZ基因表达盒。X-gal染色证实了在AD293细胞内成功扩增包装出重组腺病毒Ad-eno-X-LacZ和LacZ基因在HVSMC中得到有效表达。结论:体外连接法是一种快速、简便、高效的构建重组腺病毒质粒的方法,本研究为构建具有治疗价值的重组腺病毒奠定了基础,Adeno-X-LacZ为研究腺病毒介导的基因转移提供了一良好的对照载体。
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关键词
体外连接
腺病毒
Β-半乳糖苷酶
P
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ⅰ
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职称材料
E.coli临床分离株的基因组结构分型
被引量：
1
2
作者
衣美英
刘桂荣
+2 位作者
朱永红
朱万孚
刘树林
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第12期941-945,共5页
目的 通过基因组结构分析对临床分离的Escherichiacoli(E .coli)进行分型 ,并探讨分型与临床疾病的关系。方法 取临床不同疾病病人的痰、尿、血、分泌物等标本 ,分离E .coli。用I CeuⅠ酶切全基因组DNA ,用脉冲场凝胶电泳分离DNA片段...
目的 通过基因组结构分析对临床分离的Escherichiacoli(E .coli)进行分型 ,并探讨分型与临床疾病的关系。方法 取临床不同疾病病人的痰、尿、血、分泌物等标本 ,分离E .coli。用I CeuⅠ酶切全基因组DNA ,用脉冲场凝胶电泳分离DNA片段后 ,根据酶切图谱的异同进行分型。结果从临床上分离的 6 4株E .coli中 ,6 2株有 7个I CeuⅠ酶切位点 ,2株有 8个I CeuⅠ酶切位点。菌株间I CeuⅠ酶切图谱差异明显。这些菌株根据基因组结构的差异分为 32个型 ,分型与疾病之间的对应关系分散。结论 临床分离的E .coli基因组结构存在多样性 ,其与临床疾病之间的关系有待进一步探讨。
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关键词
E.COL
i
临床分离株
基因组结构
基因组分型
原文传递
鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱的建立与结构特征的比较
3
作者
祁丹妮
张凤民
《哈尔滨医科大学学报》
CAS
北大核心
2006年第6期450-453,共4页
目的建立鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱,并比较其结构特征。方法制备鸡沙门菌NCTC13346株基因组DNA,用rrl基因特异性的I-CeuⅠ内切酶以及限制性内切酶XbaⅠ和AvrⅡ酶切后,进行脉冲凝胶电泳(PFGE),分离出DNA片段,最后用噬菌体P22转...
目的建立鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱,并比较其结构特征。方法制备鸡沙门菌NCTC13346株基因组DNA,用rrl基因特异性的I-CeuⅠ内切酶以及限制性内切酶XbaⅠ和AvrⅡ酶切后,进行脉冲凝胶电泳(PFGE),分离出DNA片段,最后用噬菌体P22转导已知携带沙门氏菌基因的Tn10插入子的方法定位基因排列,根据酶切片断的连接与已知基因的定位,绘制该菌的基因组结构物理图,并与已知鸡沙门菌SARB21基因组结构进行比较。结果建立鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱,与鸡沙门菌SARB21基因组物理图谱相比,两者具有相对于鼠伤寒沙门氏菌LT2的相似的基因插入和缺失片段,但由于两者基因组中含有rrn操纵子的DNA片段的不同排列,分别表现为迥异的基因组结构。结论建立鸡沙门菌基因组物理图谱可用于分析同种细菌的基因组特点与进化。
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关键词
鸡沙门菌
基因组物理图谱
i
-
ceu
ⅰ
基因组重排
脉冲凝胶电泳
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职称材料
题名
体外连接法快速高效构建表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒载体
1
作者
王家宁
王传成
郭凌郧
黄永章
机构
郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所
郧西县人民医院
出处
《郧阳医学院学报》
2006年第2期65-69,F0002,共6页
基金
湖北省自然科学基金项目(2000J056)
文摘
目的:采用体外连接法构建和制备重组腺病毒Adeno-X-LacZ,为构建具有治疗价值的重组腺病毒载体奠定基础。方法:PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切pShuttle2-LacZ穿梭质粒,回收4.6 kb的LacZ基因表达盒,与经过相同酶切的Adeno-X病毒DNA连接,连接产物用SwaⅠ酶切,最终产物转化DH5α。重组质粒用PCR法和PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切鉴定。pAdeno-X-LacZ用PacⅠ线性化后,用脂质体介导其转染至AD293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒,采用CsC l密度梯度离心法纯化重组腺病毒Adeno-X-LacZ。采用X-gal染色观察Adeno-X-LacZ在AD293细胞内包装和HVSMC表达情况。结果:PCR扩增可见312 bp特异性条带,PI-SceⅠ/I-CeuⅠ酶切重组质粒后释放出4.6 kb LacZ基因表达盒。X-gal染色证实了在AD293细胞内成功扩增包装出重组腺病毒Ad-eno-X-LacZ和LacZ基因在HVSMC中得到有效表达。结论:体外连接法是一种快速、简便、高效的构建重组腺病毒质粒的方法,本研究为构建具有治疗价值的重组腺病毒奠定了基础,Adeno-X-LacZ为研究腺病毒介导的基因转移提供了一良好的对照载体。
关键词
体外连接
腺病毒
Β-半乳糖苷酶
P
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—Sce
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ceu
ⅰ
Keywords
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Adenov
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ⅰ
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
E.coli临床分离株的基因组结构分型
被引量：
1
2
作者
衣美英
刘桂荣
朱永红
朱万孚
刘树林
机构
北京大学医学部病原生物学系
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第12期941-945,共5页
基金
教育部教育振兴行动计划专项基金 (985项目 )
国家教育部留学回国人员科研启动基金 (2 0 0 2 )
+2 种基金
加拿大科研基金CIHR(MOP 47817)
MRC(GOP 3 810 6)
NSERC(2 16912 0 0 )资助项目
文摘
目的 通过基因组结构分析对临床分离的Escherichiacoli(E .coli)进行分型 ,并探讨分型与临床疾病的关系。方法 取临床不同疾病病人的痰、尿、血、分泌物等标本 ,分离E .coli。用I CeuⅠ酶切全基因组DNA ,用脉冲场凝胶电泳分离DNA片段后 ,根据酶切图谱的异同进行分型。结果从临床上分离的 6 4株E .coli中 ,6 2株有 7个I CeuⅠ酶切位点 ,2株有 8个I CeuⅠ酶切位点。菌株间I CeuⅠ酶切图谱差异明显。这些菌株根据基因组结构的差异分为 32个型 ,分型与疾病之间的对应关系分散。结论 临床分离的E .coli基因组结构存在多样性 ,其与临床疾病之间的关系有待进一步探讨。
关键词
E.COL
i
临床分离株
基因组结构
基因组分型
Keywords
i
-
ceu
ⅰ
E.col
i
Genome structure
Genome type
分类号
R511.9 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱的建立与结构特征的比较
3
作者
祁丹妮
张凤民
机构
哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省高校重点实验室
出处
《哈尔滨医科大学学报》
CAS
北大核心
2006年第6期450-453,共4页
文摘
目的建立鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱,并比较其结构特征。方法制备鸡沙门菌NCTC13346株基因组DNA,用rrl基因特异性的I-CeuⅠ内切酶以及限制性内切酶XbaⅠ和AvrⅡ酶切后,进行脉冲凝胶电泳(PFGE),分离出DNA片段,最后用噬菌体P22转导已知携带沙门氏菌基因的Tn10插入子的方法定位基因排列,根据酶切片断的连接与已知基因的定位,绘制该菌的基因组结构物理图,并与已知鸡沙门菌SARB21基因组结构进行比较。结果建立鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱,与鸡沙门菌SARB21基因组物理图谱相比,两者具有相对于鼠伤寒沙门氏菌LT2的相似的基因插入和缺失片段,但由于两者基因组中含有rrn操纵子的DNA片段的不同排列,分别表现为迥异的基因组结构。结论建立鸡沙门菌基因组物理图谱可用于分析同种细菌的基因组特点与进化。
关键词
鸡沙门菌
基因组物理图谱
i
-
ceu
ⅰ
基因组重排
脉冲凝胶电泳
Keywords
S. gall
i
narum
phys
i
cal map,
i
-
ceu
ⅰ
genome rearrangements
PEGE
分类号
R378.22 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
体外连接法快速高效构建表达β-半乳糖苷酶的重组腺病毒载体
王家宁
王传成
郭凌郧
黄永章
《郧阳医学院学报》
2006
0
下载PDF
职称材料
2
E.coli临床分离株的基因组结构分型
衣美英
刘桂荣
朱永红
朱万孚
刘树林
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
原文传递
3
鸡沙门菌NCTC13346株基因组物理图谱的建立与结构特征的比较
祁丹妮
张凤民
《哈尔滨医科大学学报》
CAS
北大核心
2006
0
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职称材料
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