I型鸭肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立 被引量：6

1

作者 魏雪涛 张晓勇 +2 位作者 李银 刘宇卓 张敬峰 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期10-13,共4页

根据GenBank发表的DHVI的基因序列,设计了1对针对DHVI保守区的特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的RT-PCR方法,扩增片段大小为632bp。试验表明,RT-PCR法具有很强的特异性,且该方法的敏感性明显高于... 根据GenBank发表的DHVI的基因序列,设计了1对针对DHVI保守区的特异性引物。通过对反应条件的优化,建立了鸭病毒性肝炎病毒快速鉴别诊断的RT-PCR方法,扩增片段大小为632bp。试验表明,RT-PCR法具有很强的特异性,且该方法的敏感性明显高于常规的检测方法。对鸭病毒性肝炎的病料检测证明,该方法能有效鉴别DHV,特异性良好。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 RT-PCR 诊断

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I型鸭肝炎病毒TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及初步应用 被引量：4

2

作者 刘海燕 赵丽丽 +3 位作者 牛银杰 祝明皓 刘胜旺 陈洪岩 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期71-74,80,共5页

目的建立快速诊断I型鸭肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据NCBI下载的20个来自我国不同省份的的I型鸭肝炎病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性。结果该方... 目的建立快速诊断I型鸭肝炎病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据NCBI下载的20个来自我国不同省份的的I型鸭肝炎病毒的基因序列,找出其保守序列,设计合成一对引物和一条Taq Man探针,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性。结果该方法敏感性达20拷贝,比常规PCR敏感性高。其特异性强,对番鸭细小病毒(MDPV),鹅细小病毒(GPV),新城疫病毒(NDV)和禽流感(AIV),鸭减蛋综合征病毒(EDSV),禽网状内皮组织增生症病毒(REV),鸭坦布苏病毒(DTMUV),禽呼肠弧病毒(ARV)8种病毒的检测均为阴性,I型鸭肝炎病毒检测结果为阳性。用建立的方法检测了江苏徐州采集100份样品,阳性率为92%。说明I型鸭肝炎病毒在江苏徐州地区的鸭群中普遍存在。结论建立了I型鸭肝炎病毒荧光定量PCR方法。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 荧光定量RT-PCR 应用

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Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法二重RT-PCR检测方法的建立 被引量：3

3

作者 徐丽晶 赵丽丽 +2 位作者 刘海燕 王怡平 陈洪岩 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期456-463,共8页

为了建立一种能同时检测I型鸭肝炎病毒（duck hepatitis virustype I，DHV—I）和鸭瘟病毒（duckplague virus，DPV）的检测方法，根据GrenBank中DHV-I和DPV的基因保守序列．设计合成两对特异性引物，扩增得到DHV—I和DPV片段，大小分别... 为了建立一种能同时检测I型鸭肝炎病毒（duck hepatitis virustype I，DHV—I）和鸭瘟病毒（duckplague virus，DPV）的检测方法，根据GrenBank中DHV-I和DPV的基因保守序列．设计合成两对特异性引物，扩增得到DHV—I和DPV片段，大小分别为399bp和232bp。据此建立了双重PCR检测方法，并将反应条件进行了优化。结果显示，该方法特异性强，能同时扩增出DHV—I和DPV目的条带，而对其他常见的水禽病病原的扩增结果均为阴性。该方法灵敏度高，最低能检出5．3PgI型鸭肝炎病毒和2．7pg鸭瘟病毒的RNA或DNA。采用该方法对在江苏省徐州地区所采集的166份鸭肛拭子进行检测，DHV—I阳性率为1．2％：DPV阳性率为26％。同时。利用该方法对建立的DHV—I和DPV雏鸭感染模型的肝组织和肝组织接种的鸭胚尿囊液进行检测，结果均为阳性．与常规PCR和RT—PCR检测结果一致。上述结果表明。本研究建立的一步法二重RT—PCR方法可以用于DHV—I和DPV快速准确的诊断。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 鸭瘟病毒 一步法二重RT—PCR

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携带I型鸭肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病毒的构建 被引量：3

4

作者 张婧 董嘉文 郭霄峰 《广东畜牧兽医科技》 2011年第1期32-34,38,共4页

为构建含有I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病毒,本研究将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP)进行改造,在其荧光表达盒内插入I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,将重组后的转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP-3D)转染已感染鸭... 为构建含有I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病毒,本研究将已建立的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP)进行改造,在其荧光表达盒内插入I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因,将重组后的转移载体(pBl ueSK-TK-EGFP-3D)转染已感染鸭瘟病毒的鸭胚成纤维细胞,转染细胞盲传2代后仍能观察到绿色荧光。表明本研究已成功构建携带I型鸭病毒性肝炎病毒3D基因的重组鸭瘟病载体(pBl ueSK-TK-EGFP-3D),此研究为研制鸭瘟-鸭肝炎二联苗奠定了基础。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 鸭瘟病毒 3D基因 重组

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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及结合肽的筛选 被引量：1

5

作者 王臣 杨静 +3 位作者 张巫凡 郭香玲 吴庭才 陈溥言 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期473-478,共6页

为鉴定与I型鸭肝炎病毒(DHV-1)特异性结合的多肽,通过基因工程方法获得DHV-1 VP1蛋白,并以DHV-1 VP1蛋白作为靶标,利用噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。ELISA鉴定结果显示,10个噬菌体克隆与VP1蛋白有较强的体外结合特性;竞争抑制试验... 为鉴定与I型鸭肝炎病毒(DHV-1)特异性结合的多肽,通过基因工程方法获得DHV-1 VP1蛋白,并以DHV-1 VP1蛋白作为靶标,利用噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。ELISA鉴定结果显示,10个噬菌体克隆与VP1蛋白有较强的体外结合特性;竞争抑制试验结果表明,VP1蛋白对噬菌体克隆P4与P6结合具有阻断作用。对P4和P6克隆的序列测定结果显示,插入的12肽序列分别为P4-12:LLSPGTHHSPWP;P6-12:LLADTTHHRPWT,其保守序列为THHXPW。体外试验结果显示,多肽P4-12和P6-12本身对鸭胚成纤维细胞的增殖无明显影响,多肽P4-12和P6-12在0.02、0.2、2、20 g/m L浓度时均能显著降低DHV-1在鸭胚成纤维细胞中的病毒效价和病毒拷贝数。以上结果表明,多肽P4-12和P6-12均能抑制DHV-1在鸭胚成纤维细胞中的增殖,这一研究结果为进一步探明DHV-1与宿主细胞的相互作用及抗病毒制剂的开发提供了试验线索。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 VP1蛋白 鸭胚成纤维细胞 噬菌体展示 结合肽

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Ⅰ型鸭肝炎病毒的研究进展 被引量：1

6

作者 张继玲 《当代畜牧》 2017年第4期48-49,共2页

在家禽疾病中,鸭肝炎病毒是比较棘手的一种疾病,这是由鸭型肝炎的发病特点决定的。鸭型肝炎的特点是发病急、传播速度快,一旦传播开来,患病的病死率很高,对于动物的生产和人们收入带来重大的影响。所以,鸭型肝炎病毒又列为鸭病的五大传... 在家禽疾病中,鸭肝炎病毒是比较棘手的一种疾病,这是由鸭型肝炎的发病特点决定的。鸭型肝炎的特点是发病急、传播速度快,一旦传播开来,患病的病死率很高,对于动物的生产和人们收入带来重大的影响。所以,鸭型肝炎病毒又列为鸭病的五大传染病之一。在鸭型肝炎病毒的传播过程中,其很高的变异性又阻碍了该病的治疗,对于鸭的养殖造成了极其大的危害,对于鸭的养殖业构成了严重的威胁。在养鸭集中区,这种病毒的危害非常明显;所以,针对鸭型肝炎的治疗研究有着十分重大的意义。随着基因技术的不断发展,病毒基因组的测序完成,鸭型肝炎的研究也有了进展,运用分子生物学对Ⅰ型鸭肝炎病毒进行分离和鉴定也是对Ⅰ型鸭肝炎病毒研究的方向与趋势。笔者通过对鸭型肝炎病毒病程的研究进行介绍,为鸭病毒性肝炎的实际临床与防治垫定理论基础。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 研究 进展

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应用RT-PCR技术快速检测鸭Ⅰ型病毒性肝炎 被引量：1

7

作者 张祥斌 冀君 +4 位作者 左珂菁 蓝赐华 马静云 毕英佐 谢青梅 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第7期111-113,共3页

根据Genbank收录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的VP1基因保守序列,设计合成特异性引物,建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,并确定了该方法的特异性与灵敏性;对DHV-Ⅰ分离毒株进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果,而作为阴性对照的常见4种鸭病病原... 根据Genbank收录的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的VP1基因保守序列,设计合成特异性引物,建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,并确定了该方法的特异性与灵敏性;对DHV-Ⅰ分离毒株进行RT-PCR检测均得到阳性扩增结果,而作为阴性对照的常见4种鸭病病原如鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、番鸭呼肠孤病毒、鹅副粘病毒均未成功扩增;对DHV-Ⅰ临床病料进行RT-PCR检测,检测结果与病毒分离结果一致。结果表明,建立的DHV-Ⅰ的RT-PCR技术具有快速、特异、灵敏的特点。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 RT-PCR技术 检测

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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因串联表达载体的构建

8

作者 李日顺 于淼 +4 位作者 黄昌力 曹宗喜 王文华 张超佚 张桂红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第8期15-17,共3页

为了构建Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因的原核表达质粒,试验采用RT-PCR技术扩增鸭肝炎病毒VP1基因,将其连接到克隆载体pGEM-T Easy中得到重组克隆质粒pGEM-T-VP1,阳性克隆质粒经鉴定正确后,分别用BamHⅠ、XholⅠ、BglⅡ进行酶切,重组后得... 为了构建Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因的原核表达质粒,试验采用RT-PCR技术扩增鸭肝炎病毒VP1基因,将其连接到克隆载体pGEM-T Easy中得到重组克隆质粒pGEM-T-VP1,阳性克隆质粒经鉴定正确后,分别用BamHⅠ、XholⅠ、BglⅡ进行酶切,重组后得到pGEM-T-2VP1,然后将双拷贝VP1基因亚克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒pET-30a(+)-2VP1。结果表明:得到了含有目的基因的阳性克隆。说明Ⅰ型鸭肝炎病毒双拷贝VP1基因原核表达质粒构建成功。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 2VP1基因 串联表达

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Ⅰ型鸭肝炎病毒vp3基因的截短表达及鉴定

9

作者 罗玄 张海涛 +4 位作者 尹秀凤 黄显明 靳宇田 张小飞 潘玲 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第3期17-21,共5页

根据I型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type 1,DHV-1)A66株vp3基因序列,设计了一对扩增vp3截短基因(-468bp)的特异性引物,将vp3截短基因与表达载体pET-32a(+)连接,构建了vp3截短基因的重组表达质粒pET-VP468。pET-VP468转入表达菌E.C... 根据I型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus type 1,DHV-1)A66株vp3基因序列,设计了一对扩增vp3截短基因(-468bp)的特异性引物,将vp3截短基因与表达载体pET-32a(+)连接,构建了vp3截短基因的重组表达质粒pET-VP468。pET-VP468转入表达菌E.Coli Rosetta-gami(DE3)pLysS中,使用IPTG诱导表达融合蛋白Trx-VP468。Trx-VP468经过Ni-NTA亲和层析柱和DEAE-Sepharose阴离子柱纯化,SDS-PAGE电泳结果表明,pET-VP468在大肠杆菌中表达了一个相对分子量约为36kDa的蛋白,免疫印迹试验表明Trx-VP468得到了正确表达。该结果为VP3蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 i型鸭肝炎病毒 VP3基因 截短 克隆表达

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新Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1和3D蛋白的原核表达及鉴定

10

作者 孟凡依 殷秀辰 +4 位作者 李刚 陈玉环 张云 刘明 冯新畅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期149-151,共3页

为表达新I型亚肝炎病毒(DHV-1C)的VP1和3D重组蛋白,本研究根据GenBank中的DHV-1C N株全基因序列,设计合成两对引物扩增其VP1和3D基因,构建重组表达载体并进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot分析表明,VP1和3D重组蛋白分别在诱导3 h和... 为表达新I型亚肝炎病毒(DHV-1C)的VP1和3D重组蛋白,本研究根据GenBank中的DHV-1C N株全基因序列,设计合成两对引物扩增其VP1和3D基因,构建重组表达载体并进行诱导表达。SDS-PAGE和western blot分析表明,VP1和3D重组蛋白分别在诱导3 h和4 h后表达量达到峰值,其大小分别为37.68 ku和65.80 ku,并且能够与抗DHV-1C阳性血清产生特异性免疫反应。 展开更多

关键词 新i型鸭肝炎病毒 DHV-1C 3D VP1 克隆表达

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I型鸭肝炎病毒3C蛋白的原核表达和免疫学检测

11

作者 杨洋 宋翠萍 +2 位作者 卢凤英 丁铲 彭大新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第6期37-41,共5页

本研究采用原核表达载体p ET-32a在大肠杆菌中表达血清I型鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis virus serotype I,DHV-I)SH株的3C蛋白,经超声波裂解结果显示,p ET-3C融合蛋白呈现可溶性表达。利用His-bind Resin试剂盒纯化该产物,作为免疫原... 本研究采用原核表达载体p ET-32a在大肠杆菌中表达血清I型鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis virus serotype I,DHV-I)SH株的3C蛋白,经超声波裂解结果显示,p ET-3C融合蛋白呈现可溶性表达。利用His-bind Resin试剂盒纯化该产物,作为免疫原免疫小鼠,制备特异性抗体进行免疫学检测。结果表明,该抗体与原核表达产物、DHV感染的SPF尿囊液总蛋白呈现特异性反应。由此可见,3C基因在大肠杆菌中可获得成功表达,制备的多抗血清可用于3C蛋白的检测。 展开更多

关键词 i型鸭甲型肝炎病毒 3C蛋白 原核表达

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