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原代人绒毛滋养层细胞分离培养及其对巨细胞病毒的易感性研究 被引量:2
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作者 周淑 董丽群 +1 位作者 关林波 于萍 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期344-347,377,共5页
目的通过分离培养原代人绒毛滋养层细胞(HTCs)并检测其对人巨细胞病毒(HCMV)的易感性,探讨胎儿宫内感染HCMV的可能途径。方法将30例健康孕妇经负压真空吸引手术所得的流产早孕绒毛组织充分剪碎,用0.25%胰蛋白酶和0.2%DNA酶混合消化法制... 目的通过分离培养原代人绒毛滋养层细胞(HTCs)并检测其对人巨细胞病毒(HCMV)的易感性,探讨胎儿宫内感染HCMV的可能途径。方法将30例健康孕妇经负压真空吸引手术所得的流产早孕绒毛组织充分剪碎,用0.25%胰蛋白酶和0.2%DNA酶混合消化法制备细胞悬液,细胞悬液经200目不锈钢筛网过滤后用Percoll液密度梯度离心对HTCs进行初步纯化,细胞传代中应用反复胰酶消化法对HTC进行3~5次纯化,通过细胞学形态观察和免疫荧光染色方法对HTCs进行鉴定;用HCMV病毒株体外感染HTCs,应用PCR、Westernblot和免疫荧光方法对HCMV基因及蛋白进行检测,从而确定HTCs对HCMV的易感性。结果 Percoll分离联合胰酶、DNA酶消化法对原代HTCs有较好的分离效果,免疫荧光染色结果表明90%以上细胞表达CK-7相关抗原,HTCs体外感染HCMV 72h后形态学发生明显改变,病毒基因及蛋白均呈阳性表达。结论原代HTCs对HCMV易感,通过HTCs感染胎儿可能是HCMV宫内感染的重要传播途径之一。 展开更多
关键词 人绒毛滋养层细胞 人巨细胞病毒
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