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题名人可溶性CD105蛋白的真核表达及纯化
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作者
杨希
郎巧利
黄楠
余琳
何琦琳
葛良鹏
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机构
重庆市畜牧科学院农业部养猪科学重点实验室养猪科学重庆市市级重点实验室重庆市医用动物资源的开发与利用工程计算研究中心
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2019年第7期755-758,共4页
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基金
国家自然科学基金(5167070727)
重庆市农发资金资助项目(17406)
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文摘
目的建立一种简便、高效的人可溶性CD105(soluble CD105,sCD105)蛋白的真核表达及纯化方法。方法人工合成胞外区和信号肽区域的DNA片段,在其信号肽前端加入Kozak sequence(GCACCATGG)序列,促进蛋白表达,同时在其C-末端6×His前加入K(AAG)氨基酸,促进6×His的暴露有助于后期纯化,构建真核表达质粒pcDNA3. 4-sCD105。通过瞬时转染的方法将重组质粒转染293F悬浮细胞,收集细胞上清液,利用His-trap EXCEL柱通过两步纯化法进行纯化。将纯化获得的sCD105蛋白超滤浓缩后,进行10%SDS-PAGE、Western blot及ELISA检测。结果在20mL(1×10^6个/mL)293F悬浮细胞中表达及纯化后,获得纯度>95%的sCD105蛋白3mL,浓度为27.83mg/L,获得率高达4.17mg/L。结论成功建立了一种简便高效的sCD105蛋白表达及纯化的方法,为后期蛋白功能的研究及相应治疗或诊断性抗体的开发奠定了基础。
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关键词
人可溶性cd105蛋白
真核表达
纯化
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Keywords
human soluble cd105
Eukaryotic expression
Purification
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分类号
R392.12
[医药卫生—免疫学]
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