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人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定
被引量:
1
1
作者
屈芫
魏钦俊
+4 位作者
姚俊
鲁雅洁
王天明
曹新
冯振卿
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期489-492,496,共5页
目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRL...
目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。
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关键词
人催乳素受体
抗体Fab’段
人源化抗体
下载PDF
职称材料
题名
人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定
被引量:
1
1
作者
屈芫
魏钦俊
姚俊
鲁雅洁
王天明
曹新
冯振卿
机构
南京医科大学生物技术系
南京川博生物技术有限公司
卫生部抗体技术重点实验室
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期489-492,496,共5页
基金
国家自然科学基金项目(81172142)
江苏省自然科学基金资助项目(BK2008442)
+3 种基金
南京医科大学科技发展基金(08NMU2007)
中国博士后科学基金(20080431115
200902526)
江苏省博士后科研资助项目(0801018C)
文摘
目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。
关键词
人催乳素受体
抗体Fab’段
人源化抗体
Keywords
human
prolactin
receptor
(
hprlr
)
Fab
fragment
human
antibody
分类号
R446.62 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定
屈芫
魏钦俊
姚俊
鲁雅洁
王天明
曹新
冯振卿
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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