小C肽人胰岛素原类似物(B-Arg-Arg-A)和人胰岛素原(B-C-A)A、B链重组条件的研究 被引量：5

1

作者 陈来同 张明军 胡美浩 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2000年第5期217-219,共3页

目的 :获得更佳的变复性条件和提高人胰岛素原的重组率。方法 :采用特有的重组方法 ,将小C肽人胰岛素原类似物 (B Arg Arg A)与人胰岛素原 (B C A)进行重组条件的比较。 结果 :发现二者在 pH10 .6左右处重组率达到最大 ,且在相同的条件... 目的 :获得更佳的变复性条件和提高人胰岛素原的重组率。方法 :采用特有的重组方法 ,将小C肽人胰岛素原类似物 (B Arg Arg A)与人胰岛素原 (B C A)进行重组条件的比较。 结果 :发现二者在 pH10 .6左右处重组率达到最大 ,且在相同的条件下B Arg Arg A蛋白质的重组率 (94% )较B C A蛋白质 (82 % )的高。结论 :进一步验证了“胰岛素的A、B链含有足够使二硫键正确配对的结构信息”的论点。 展开更多

关键词 胰岛素原 类似物 人胰岛素质

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249个氨基酸的人胰岛素原融合蛋白的表达 被引量：6

2

作者 唐建国 薛英姿 +1 位作者 范贤彬 傅易欣 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期101-106,共6页

选Tac启动子,构建了以牛凝乳酶原B前161个氨基酸的多肽基因与人胰岛素原基因的融合基因的表达质粒pJG202,转化大肠杆菌JM105,表达受IPTG及温度诱导。高表达时,按电泳扫描计算,表达的融合蛋白可占细胞总蛋白的20—35%。经CNBr裂解,S-磺酸... 选Tac启动子,构建了以牛凝乳酶原B前161个氨基酸的多肽基因与人胰岛素原基因的融合基因的表达质粒pJG202,转化大肠杆菌JM105,表达受IPTG及温度诱导。高表达时,按电泳扫描计算,表达的融合蛋白可占细胞总蛋白的20—35%。经CNBr裂解,S-磺酸解,初步分离S-磺酸型的人胰岛素原后再使之重组,可分离得人胰岛素原纯品,其氨基酸组成、生物活性与人胰岛素原标准相同。 展开更多

关键词 人胰岛素原 基因表达 胰岛素

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人胰岛素原在基因工程菌中的高效表达 被引量：1

3

作者 李红霞 余蓉 李晓红 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期14-17,共4页

目的　构建RRhPI-pQE4. 0E .coliM15表达系统 ,以高效表达 (His) 6 -Arg -Arg -人胰岛素原。方法　正交法优化发酵条件 ,通过湿菌体收率、包涵体收率及发酵液A60. 0 的测定对优化结果进行评估 ,并进一步分析发酵过程中主要因素对高密度... 目的　构建RRhPI-pQE4. 0E .coliM15表达系统 ,以高效表达 (His) 6 -Arg -Arg -人胰岛素原。方法　正交法优化发酵条件 ,通过湿菌体收率、包涵体收率及发酵液A60. 0 的测定对优化结果进行评估 ,并进一步分析发酵过程中主要因素对高密度发酵和高效表达的影响。结果　发酵条件优化后 ,每升发酵培养基可得湿菌体约 4 3g ,包涵体约 14g(湿重 )。结论　优化发酵条件可使湿菌体及包涵体的收率提高。 展开更多

关键词 收率 发酵条件 基因工程菌 菌体 发酵培养基 发酵液 人胰岛素 包涵体 高效表达 E.COLI

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定点突变的人胰岛素原基因在体细胞中的表达 被引量：3

4

作者 沈坤堂 秦新裕 +3 位作者 肖华胜 张新 许相儒 韩泽广 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期267-269,T002,共4页

目的　研究在非β细胞中表达成熟胰岛素 ,探讨替代胰岛素注射或胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病的方法。方法　采用重叠区扩增基因拼接法 (geneSOEing)自胰岛素原基因组基因中扩增胰岛素原的cDNA ,并于C肽的两端引入蛋白酶furin的识别和切割位点... 目的　研究在非β细胞中表达成熟胰岛素 ,探讨替代胰岛素注射或胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病的方法。方法　采用重叠区扩增基因拼接法 (geneSOEing)自胰岛素原基因组基因中扩增胰岛素原的cDNA ,并于C肽的两端引入蛋白酶furin的识别和切割位点Arg Xaa Lys/Arg Arg ,将获得的突变体重组表达载体 pcDNA3 .1 /C .mINS通过脂质体法转染体外培养的Hela、2 93和L0 2细胞 ,转染后 48、72h取细胞培养液 ;并将L0 2细胞经G41 8(450mg/L)筛选 2个月后 ,得到稳定表达胰岛素的细胞株 ,同时用放射免疫和免疫组织化学的方法监测细胞内外胰岛素的表达水平。结果　成功地对胰岛素原cDNA的 3个位点进行了突变 ,空载体转染的细胞无胰岛素表达 ,而在转染突变后胰岛素原基因cDNA的细胞培养液中胰岛素的表达量各不相同 :每天 8.45～ 1 88.0 0 μIU/2 .0× 1 0 6 Hela细胞、每天 1 59.88～ 2 4 2 .1 4 μIU/ 2 .0× 1 0 6 2 93细胞、每天 2 .56～ 61 .95μIU/ 2 .0× 1 0 6L0 2细胞 ;免疫组织化学显示细胞浆内有囊泡状分泌颗粒。 展开更多

关键词 I型糖尿病 基因治疗 定点突变 人胰岛素原基因 体细胞

原文传递

(His)_6-Arg-Arg-人胰岛素原在大肠杆菌中的高效表达(英文) 被引量：4

5

作者 李晓红 余蓉 +2 位作者 曾蓉 彭先凤 杨继虞 《药物生物技术》 CAS CSCD 2003年第3期144-148,共5页

为了提高胰岛素原的表达量 ,用pQE 40质粒构建了 (His) 6 Arg Arg 人胰岛素原 [(His) 6 Arg Arg humanProinsulin ,RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化 ,在摇瓶培养的条件下 ,目标产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达 ,每... 为了提高胰岛素原的表达量 ,用pQE 40质粒构建了 (His) 6 Arg Arg 人胰岛素原 [(His) 6 Arg Arg humanProinsulin ,RRhPI]的大肠杆菌表达系统。通过培养条件的优化 ,在摇瓶培养的条件下 ,目标产物RRhPI以包涵体形式获得了高效表达 ,每升培养基收获湿菌体约 2 7g ,包涵体 6g(干重 1 .8g) ,RRhPI约5 4 0mg。该水平已超过现有文献报道的摇瓶培养的最高水平。 展开更多

关键词 人胰岛素原 大肠杆菌 表达

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用胰酶转肽的方法使人胰岛素原转成人胰岛素 被引量：1

6

作者 唐建国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期355-360,共6页

在猪胰岛素酶转肽成人胰岛素的相似条件下，基因工和生产的人胰岛素原可以５０％的产率转成人胰岛素，所得人胰岛的氨基酸与理论值相符，并具有天然活力。

关键词 人类 胰岛素原 胰岛素 胰酶转肽

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人胰岛素原乳腺表达基因构建及其在转基因小鼠乳汁中的表达

7

作者 刘明军 武坚 +4 位作者 李文蓉 黄俊成 杨冬梅 玛依拉 郭志勤 《草食家畜》 2001年第S2期179-185,共7页

从绵羊和人的基因组中用PCR扩增分别克隆了羊乳球蛋白 (BLG) 5’和 3’调控区及人胰岛素原 (hINS)基因组DNA ,并以此为基础构建了人胰岛素原乳腺表达载体 ( pSh -BLG -hINS)。该表达载体包括 4.2kbBLG 5’调控区和 2 .1kbBLG 3’调控区 ... 从绵羊和人的基因组中用PCR扩增分别克隆了羊乳球蛋白 (BLG) 5’和 3’调控区及人胰岛素原 (hINS)基因组DNA ,并以此为基础构建了人胰岛素原乳腺表达载体 ( pSh -BLG -hINS)。该表达载体包括 4.2kbBLG 5’调控区和 2 .1kbBLG 3’调控区 ,以及 1 .2kb人胰岛素原基因组DNA。将绿色荧光蛋白基因与BLG 5’和 3’调控区融合后转化乳腺细胞系 (TD47) ,通过荧光显微镜观察和紫外吸收检测 ,证明GFP在TD47乳腺细胞系中获得了表达。用BLG -hINS基因分别注射小鼠 ,通过PCR和限制性内切酶检测分析 ,共获得 5只转基因小鼠。经放免 (RIA)检测 ,两只转基因母鼠乳汁中人胰岛素原的表达量分别为 37.44和 39.99mg/L。该结果表明 ,本文所构建的 pBLG乳腺表达结构 。 展开更多

关键词 人胰岛素原 羊乳球蛋白 转基因 乳腺表达

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重组人胰岛素原在大肠杆菌中的可溶性表达 被引量：1

8

作者 吕丹 闫亚丽 +4 位作者 景丽芳 张秋荣 常莉 刁爱坡 李玉银 《天津科技大学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期21-25,共5页

目前重组胰岛素主要用于糖尿病的治疗.通过大肠杆菌(E.coli)密码子优化,设计人胰岛素原基因,建立利用大肠杆菌表达可溶性重组胰岛素原的技术方法.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,重组质粒p His-Nus Ainsulin诱导表达的大肠杆菌... 目前重组胰岛素主要用于糖尿病的治疗.通过大肠杆菌(E.coli)密码子优化,设计人胰岛素原基因,建立利用大肠杆菌表达可溶性重组胰岛素原的技术方法.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,重组质粒p His-Nus Ainsulin诱导表达的大肠杆菌可溶性表达融合蛋白His-Nus A-insulin.重组蛋白His-Nus A-insulin可溶性表达的最适条件为0.1,mmol/L IPTG作用下37,℃诱导4,h,重组蛋白产物经过Ni柱纯化、500,mmol/L咪唑洗脱,得到纯度较高的1.059,μg/μL的重组蛋白His-Nus A-insulin,重组蛋白His-Nus A-insulin经烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV)酶切作用后,获得可溶的人胰岛素原. 展开更多

关键词 人胰岛素原 重组蛋白 NUSA

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Patatin启动子驱动的人胰岛素原基因的植物表达载体的构建

9

作者 马建忠 马雪青 +3 位作者 王永刚 宋国伟 周贤靖 王倩 《中国马铃薯》 2009年第6期332-337,共6页

使用马铃薯的偏爱密码子设计合成人胰岛素原基因,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,构建由patatin启动子调控的人胰岛素原基因植物表达载体p1301Ph,并将导入根癌农杆菌LBA4404中,经PCR鉴定证明,此基因已整合到农杆菌Ti上。表达载体的建... 使用马铃薯的偏爱密码子设计合成人胰岛素原基因,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,构建由patatin启动子调控的人胰岛素原基因植物表达载体p1301Ph,并将导入根癌农杆菌LBA4404中,经PCR鉴定证明,此基因已整合到农杆菌Ti上。表达载体的建立为日后转基因工作奠定了基础。 展开更多

关键词 patatin启动子 人胰岛素原基因 植物表达载体

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从基因工程小C肽人胰岛素原类似物（B－R2－A）制备人胰岛素 被引量：8

10

作者 陈来同 胡美浩 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第1期1-5,共5页

以融合蛋白的形式，在Ｅ．ｃｏｌｉ中经温度诱导表达了小Ｃ肽人胰岛素原类似物（Ｂ－Ｒ２－Ａ）．表达的融合蛋白可占细胞总蛋白６８％．经磺酸解，及初步分离Ｓ－磺酸型融合蛋白，再经ＣＮＢｒ裂解后，进行还原重组，ＨＰＬＣ分离纯化... 以融合蛋白的形式，在Ｅ．ｃｏｌｉ中经温度诱导表达了小Ｃ肽人胰岛素原类似物（Ｂ－Ｒ２－Ａ）．表达的融合蛋白可占细胞总蛋白６８％．经磺酸解，及初步分离Ｓ－磺酸型融合蛋白，再经ＣＮＢｒ裂解后，进行还原重组，ＨＰＬＣ分离纯化等步骤，每升发酵液可得到Ｂ－Ｒ２－Ａ约５０ｍｇ。经酶促转化及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５纯化，得重组人胰岛素约２０ｍｇ，其氨基酸组成与人胰岛素相同，并具有与猪胰岛素相同的生物活性． 展开更多

关键词 小C肽 胰岛素原类似物 胰岛素 基因工程

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Met-Lys-双C肽人胰岛素原基因的构建表达及分离纯化 被引量：3

11

作者 陈雅蕙 杜雅励 唐建国 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期558-562,共5页

应用 Ｐ Ｃ Ｒ 定点突变方法构建编码 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ双 Ｃ 肽人胰岛素原基因，并在大肠杆菌中以包含体方式获得表达 表达产物经还原、重组、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 分离纯化，获得 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ双 Ｃ 肽人胰岛... 应用 Ｐ Ｃ Ｒ 定点突变方法构建编码 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ双 Ｃ 肽人胰岛素原基因，并在大肠杆菌中以包含体方式获得表达 表达产物经还原、重组、 Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５ 分离纯化，获得 Ｍ ｅｔ Ｌｙｓ双 Ｃ 肽人胰岛素原，经胰蛋白酶与羧肽酶 Ｂ的酶解， Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｔ Ｍ Ｑ 阴离子交换柱层析分离制备得人胰岛素，其放免活性、受体结合活性均与猪胰岛素相同 展开更多

关键词 Met-Lys-肽 人胰岛素原 分离 纯化 构建

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人胰岛素原基因胰外表达重组体的构建及鉴定 被引量：7

12

作者 袁凤山 张坤 +2 位作者 杨立新 王大会 尤春暖 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期321-323,共3页

目的 :构建胰外表达成熟胰岛素的重组体。方法 :将人胰岛素原基因进行二处突变 ,突变后的胰岛素原基因与逆转录病毒载体 pLXSN重组并转染肝癌细胞。提取肝癌细胞基因组DNA ,PCR方法鉴定人胰岛素原基因与载体重组结果及在肝癌细胞基因组... 目的 :构建胰外表达成熟胰岛素的重组体。方法 :将人胰岛素原基因进行二处突变 ,突变后的胰岛素原基因与逆转录病毒载体 pLXSN重组并转染肝癌细胞。提取肝癌细胞基因组DNA ,PCR方法鉴定人胰岛素原基因与载体重组结果及在肝癌细胞基因组中整合情况。同时测定成熟胰岛素的表达。结果 :胰岛素原基因已整合到肝癌细胞基因组。突变的胰岛素原可被广泛存在的furin酶识别 ,在培养基内检测到较高浓度的成熟胰岛素。结论 :成功构建胰外表达成熟胰岛素的突变人胰岛素原基因逆转录病毒重组体。 展开更多

关键词 人胰岛素原基因 逆转录病毒载体 基因重组 基因表达

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胰岛素基因在非β细胞中的调节表达 被引量：5

13

作者 沈坤堂 秦新裕 +3 位作者 张新 程志红 许相儒 韩泽广 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期780-783,共4页

目的　应用四环素 (Tet)可调控性表达系统 ,建立条件控制性人工 β细胞株 ,定量调节胰岛素基因在tet2 93细胞中的表达。方法　构建含四环素反应元件和表达胰岛素原基因的重组载体pTRE2mINS。再将此载体与具有潮霉素抗性的质粒pTK Hyg共... 目的　应用四环素 (Tet)可调控性表达系统 ,建立条件控制性人工 β细胞株 ,定量调节胰岛素基因在tet2 93细胞中的表达。方法　构建含四环素反应元件和表达胰岛素原基因的重组载体pTRE2mINS。再将此载体与具有潮霉素抗性的质粒pTK Hyg共转染能稳定表达反义四环素激活因子的细胞株tet2 93,然后用潮霉素筛选表达胰岛素的细胞株 ,通过四环素的衍生物强力霉素 (Dox)调节胰岛素在此细胞株中的表达。采用Northern印迹、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和放射免疫分析法 ,从mRNA和蛋白水平观察细胞培养基中强力霉素浓度的变化对胰岛素基因表达的影响。结果　从2 8个单克隆细胞株中筛选 1株能自主分泌一定量的胰岛素 ,又能受强力霉素调控分泌的细胞株。当细胞培养液中加入或不加强力霉素时 ,培养基中胰岛素的表达量分别为每 2 4h 2 4 1 0U/1 0× 10 6细胞和每 2 4h 9 7U/1 0× 10 6细胞 ,加强力霉素组是不加强力霉素组的 2 5倍。而且随着强力霉素浓度的增加 ,tet2 93细胞内外胰岛素的表达水平逐步增高。结论　人胰岛素基因在tet2 93细胞中的成功转移和高效表达 ,受四环素及其衍生物定时、定量调节 ,从而提高糖尿病基因治疗的精确性 ,安全性和有效性。 展开更多

关键词 胰岛素基因 非β细胞 基因表达 基因调控 胰岛素依赖型糖尿病 基因治疗

原文传递

B_(23)-Gly-B_(24)人胰岛素的分离纯化及性质研究 被引量：2

14

作者 陈来同 姚蒙 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期270-273,共4页

为了研究胰岛素B链羧端的自由度对于胰岛素与受体相互作用的影响。在人胰岛素B链羧端（转角区回折点B23与B24之间插入一个Gly。B23-Gly-B24人胰岛素原在大肠杆菌的表达产物占细胞总蛋白量的28％,B23-Gly-B24人胰岛素的受体活性分别是标... 为了研究胰岛素B链羧端的自由度对于胰岛素与受体相互作用的影响。在人胰岛素B链羧端（转角区回折点B23与B24之间插入一个Gly。B23-Gly-B24人胰岛素原在大肠杆菌的表达产物占细胞总蛋白量的28％,B23-Gly-B24人胰岛素的受体活性分别是标准猪胰岛素的122％和人胰岛素的111％。说明以较高的受体结合活性获得了高纯度的B23-Gly-B24人胰岛素。 展开更多

关键词 B23-Gly-B24人胰岛素原 受体结合活性 非融合方式 B链C端柔性 分离 纯化

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人胰岛素原基因在转基因小鼠乳汁中的表达 被引量：1

15

作者 黄俊成 史洪才 +3 位作者 李文蓉 武坚 杨冬梅 郭志勤 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期65-68,共4页

将构建的绵羊 β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因小鼠。共移植 888枚注射 BLG-胰岛素原基因的小鼠卵 ,移植受体 31只 ,怀孕 1 4只 ,产仔 53只。PCR检测 51只 ,有 5只为阳性 ,并均为雌性 ,其中 ... 将构建的绵羊 β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因小鼠。共移植 888枚注射 BLG-胰岛素原基因的小鼠卵 ,移植受体 31只 ,怀孕 1 4只 ,产仔 53只。PCR检测 51只 ,有 5只为阳性 ,并均为雌性 ,其中 2只小鼠泌乳 ,经放免检测小鼠乳汁中人胰岛素原的质量浓度分别为 37.44mg/L和 39.99mg/L。另外 3只异常消瘦而不孕 ,其中 展开更多

关键词 人胰岛素原基因 转基因小鼠 基因表达 乳汁 糖尿

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显微注射生产转人胰岛素原基因奶山羊

16

作者 黄俊成 张健 +3 位作者 李文蓉 刘明军 武坚 郭志勤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期242-254,共13页

将构建的绵羊β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因奶山羊。同期化超排处理供体奶山羊 1 5只 ,排卵 2 62枚 ,回收卵 2 2 1枚 ,移植 2 0 6枚注射卵 ,移植受体 68只 ,怀孕2 1只 (妊娠率 3 3 % ,其... 将构建的绵羊β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因奶山羊。同期化超排处理供体奶山羊 1 5只 ,排卵 2 62枚 ,回收卵 2 2 1枚 ,移植 2 0 6枚注射卵 ,移植受体 68只 ,怀孕2 1只 (妊娠率 3 3 % ,其中成年母羊妊娠率为 58.62 % ,周岁母羊为 9.4 % ) ,产羔 3 3只 ,其中母羔 8只 ,公羔 2 5只。经 PCR检测及酶切分析 ,证明有 5只为阳性 ,阳性整合率为 1 5.1 5% ,但 展开更多

关键词 显微注射 人胰岛素原基因 转基因奶山羊 乳腺生物反应器

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重组人胰岛素制备工艺 被引量：3

17

作者 李晓红 朱惠玲 +1 位作者 余蓉 李红霞 《四川大学学报（工程科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期79-83,共5页

为了提高重组人胰岛素的表达量,用E.coli发酵表达(His)6-Arg-Arg-人胰岛素原[(His)6-Arg-Arg-human proinsulin,RRhPI],并对影响RRhPI高效表达的各主要因素以及下游纯化工艺的各关键步骤进行优化。研究表明,RRhPIE.coli在最优培养基:5 ... 为了提高重组人胰岛素的表达量,用E.coli发酵表达(His)6-Arg-Arg-人胰岛素原[(His)6-Arg-Arg-human proinsulin,RRhPI],并对影响RRhPI高效表达的各主要因素以及下游纯化工艺的各关键步骤进行优化。研究表明,RRhPIE.coli在最优培养基:5 g/L胰蛋白胨,2 g/L谷氨酸,7 g/L酵母浸膏,0.5 g/L酸铵,2.5 g/L葡萄糖,2.7 g/L甘油,100 mg/L氨苄青霉素,50 mg/L卡那霉素,pH7.2的条件下,用发酵罐进行发酵,在对数生长中期加入0.5 mmol/L IPTG诱导4 h,发酵过程中通过补料和转速调节,每升培养基能收获湿菌体51.2 g,包涵体16.2g。在下游纯化工艺中,初步纯化前包涵体溶解液中一定浓度的β-巯基乙醇以及复性液中一定浓度的氧化型谷胱甘肽将有助于RRhPI的复性。经过工艺条件的优化,人胰岛素最终收率可达74 mg/L培养基。 展开更多

关键词 (His)6-Arg-Arg-人胰岛素原 重组人胰岛素 大肠杆菌

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重组人胰岛素的体外复性纯化 被引量：1

18

作者 陈阳 陈劲春 《北京化工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期77-80,共4页

对大肠杆菌表达的重组人胰岛素原包涵体蛋白的变性复性条件进行了优化。考察了变性液中DTT的浓度,复性液的pH值,还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的物质的量比,甘氨酸(Gly)浓度对复性的影响。结果表明,在变性液中加入60mmol/L... 对大肠杆菌表达的重组人胰岛素原包涵体蛋白的变性复性条件进行了优化。考察了变性液中DTT的浓度,复性液的pH值,还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)的物质的量比,甘氨酸(Gly)浓度对复性的影响。结果表明,在变性液中加入60mmol/LDTT,复性液pH9.5,GSH与GSSG物质的量比为5∶1,Gly浓度为50mmol/L条件下复性率最高。复性后的重组人胰岛素原过DEAE-SepharoseFF柱,经过TPCK-胰蛋白酶和羧肽酶B酶切后,再过SephadexG-25柱,得到纯度较高的重组人胰岛素。目的蛋白收率为96mg/g干菌体。 展开更多

关键词 重组人胰岛素原 变性 复性 酶切

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体内直接人胰岛素原基因转移对糖尿病小鼠治疗作用的研究 被引量：1

19

作者 杨郁 李昌臣 +5 位作者 李跃 马郁芳 白然 杜建玲 朱佩锦 谷玲 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 2002年第6期352-354,共3页

目的　研究人胰岛素原基因表达质粒直接转移至糖尿病小鼠体内后对其血糖和血浆胰岛素水平的影响。　方法　将人胰岛素原基因和大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK)启动子的重组质粒 p N - PEPCK- INS经脂质体介导 ,直接转入糖尿病小鼠体... 目的　研究人胰岛素原基因表达质粒直接转移至糖尿病小鼠体内后对其血糖和血浆胰岛素水平的影响。　方法　将人胰岛素原基因和大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK)启动子的重组质粒 p N - PEPCK- INS经脂质体介导 ,直接转入糖尿病小鼠体内 ,监测空腹血糖并测定血浆胰岛素水平 ,PCR法鉴定基因转入。　结果　人胰岛素原基因转移组小鼠血浆胰岛素为 (49.2 9± 14 .5 6 )ml U / L ,显著高于生理盐水对照组 (37.5 6± 8.4 ) m l U / L (P<0 .0 5 )和质粒 PL NC对照组 (33.5 4±13.35 ) ml U / L (P<0 .0 5 ) ,生理盐水组与质粒 PL NCX组差别无显著性 (P>0 .0 5 ) ,人胰岛素原基因转移组空腹血糖显著低于基因转入前 (P<0 .0 5 )。生理盐水组和质粒 PL NCX组空腹血糖基因转入前后差异无显著性。 展开更多

关键词 人胰岛素原基因 糖尿病 阳离子脂质体 体内直接基因转移 基因治疗

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基因工程人胰岛素原和胰岛素的分离纯化及性质研究 被引量：2

20

作者 郭礼和 周明义 +3 位作者 沈敏慧 汪恩璧 刘金富 余玉娟 《实验生物学报》 CSCD 1992年第2期157-163,共7页

携带pWR 590-BCA4质粒的大肠杆菌经发酵培养,提取出人胰岛素原融合蛋白。该融合蛋白经BrCN降解,氧化磺化及QAE-Sepha-dex A-25和Sephadex G-50分离所得到的磺化胰岛素原,经折叠和分离得到了人胰岛素原(HPI)。HPI 再经酶切转化为人胰岛索... 携带pWR 590-BCA4质粒的大肠杆菌经发酵培养,提取出人胰岛素原融合蛋白。该融合蛋白经BrCN降解,氧化磺化及QAE-Sepha-dex A-25和Sephadex G-50分离所得到的磺化胰岛素原,经折叠和分离得到了人胰岛素原(HPI)。HPI 再经酶切转化为人胰岛索(HI)和C-肽,HI 的得率为5 m8/L,并获得了HI 的晶体。HPI 和HI 的氨基酸组成、N-端顺序和C-末端分析均与预期值相符。HI 的RIA 活性为猪胰岛素的99%,整体活性为26～27U/mg。 展开更多

关键词 人胰岛素 基因工程 分离纯化

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