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58型人乳头瘤病毒L2蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 林洁 吕琦 +2 位作者 童亮 刘芳 马岚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期398-403,共6页
目的原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体。方法从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),... 目的原核表达并纯化我国高发的致宫颈癌58型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)次要衣壳蛋白L2,并制备其单克隆抗体。方法从含有HPV-58基因组的质粒pHPV58中扩增L2基因,插入改构的原核表达载体pGEX-KGV中,转化大肠杆菌BL21(DE3),乳糖诱导表达,透析复性并亲和层析纯化重组蛋白,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。结果重组表达质粒pGEX-KGV-HPV58 L2经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量可占菌体总蛋白的15.5%;纯化的重组蛋白纯度可达95%;共获得10株抗HPV-58 L2的高效价单克隆抗体。结论已成功原核表达、纯化了HPV-58 L2重组蛋白,并制备了单克隆抗体,为下一步HPV-58 L2蛋白抗原表位的研究以及相关预防性抗体药物和广谱重组疫苗的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 58型人乳头瘤病毒 L2蛋白 原核细胞 基因表达 蛋白质复性 抗体 单克隆
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截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白在昆虫细胞中的表达 被引量:2
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作者 刘景会 刘玉林 +1 位作者 褚迪 车薇薇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期233-238,244,共7页
目的利用昆虫细胞杆状病毒表达系统构建含截短型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣壳蛋白L1基因的重组杆状病毒,并在Sf9细胞中表达。方法从NCBI中获得HPV 58 L1基因序列,应用Clustal X2软件进行序列比对后,确定相对保... 目的利用昆虫细胞杆状病毒表达系统构建含截短型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)58型主要衣壳蛋白L1基因的重组杆状病毒,并在Sf9细胞中表达。方法从NCBI中获得HPV 58 L1基因序列,应用Clustal X2软件进行序列比对后,确定相对保守的目的基因序列;人工合成HPV 58 L1基因片段,PCR法获得截短型HPV58 L1-1基因,克隆至p Fast Bac-1载体中,构建重组供体质粒p FB-HPV 58 L1-1,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组Bacmid-HPV 58 L1-1,转染Sf9细胞,获得第1代(P1)重组杆状病毒BV-HPV 58 L1-1,扩增后采用快速滴定法测定病毒滴度;将重组杆状病毒感染Sf9细胞,表达HPV 58 L1-1蛋白,并进行Western blot分析和透射电镜观察。结果Bacmid-HPV 58 L1-1经PCR及测序鉴定构建正确;P2重组杆状病毒的滴度可达1.0×108 pfu/ml;HPV 58 L1-1在Sf9昆虫细胞中的表达产物经Western blot检测,可见相对分子质量约55 000的特异性反应条带,电镜观察可见L1蛋白自组装形成病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。结论成功在昆虫细胞中表达了HPV 58 L1-1蛋白,并自组装为VLPs,为预防型HPV疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒58 L1蛋白 杆状病毒 SF9细胞 病毒样颗粒
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分子伴侣促进截短型人乳头瘤病毒58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 被引量:4
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作者 冉云伟 张改平 +4 位作者 刘运超 陈玉梅 王聚财 孟凤丽 王爱萍 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期295-300,共6页
目的:采用分子伴侣pTf16共表达的形式促进截短型人乳头瘤病毒(HPV)58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达。方法:将重组表达质粒pGEX-6P-HPV58-L1转入含有分子伴侣pTf16的大肠杆菌BL21感受态细胞中,在2.0 mg/mL L-阿拉伯糖诱导表达20 mi... 目的:采用分子伴侣pTf16共表达的形式促进截短型人乳头瘤病毒(HPV)58亚型L1蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达。方法:将重组表达质粒pGEX-6P-HPV58-L1转入含有分子伴侣pTf16的大肠杆菌BL21感受态细胞中,在2.0 mg/mL L-阿拉伯糖诱导表达20 min之后加入1.0 mmol/L的IPTG,18℃诱导表达24 h,使目的蛋白与伴侣蛋白共表达;重组蛋白经GST亲和纯化后去除GST标签免疫昆明鼠,ELISA检测免疫血清效价。结果:分子伴侣pTf16能显著提高目的蛋白的可溶性表达,经纯化及去除GST标签,用SDS-PAGE与Western印迹检测,约在相对分子质量50×103处出现特异性反应条带,该条带与截短型HPV58 L1蛋白预期大小相符,免疫动物后经ELISA检测小鼠血清的抗体效价为1∶6400。结论:获得了截短型HPV58 L1蛋白,动物免疫试验证实该蛋白具有较好的免疫原性,为进一步研制HPV58预防型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒58亚型 截短型L1蛋白 伴侣分子pTf16
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Phylogeographic analysis of human papillomavirus 58 被引量:2
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作者 LI YanYun1, LI ZuoFeng2, HE YiFeng1, KANG Yu1, ZHANG XiaoYan1, CHENG MingJun1, ZHONG Yang2, 3· & XU CongJian1· 1 Obstetrics and Gynecology Hospital of Fudan University, Shanghai 200011, China 2 Shanghai Bioinformation Research Center, Shanghai 200235, China 3 School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2009年第12期1164-1172,共9页
Human papillomavirus 58 (HPV58) is one type of HPV with high risk of causing cervical cancer. Unusually high prevalence of HPV58 has been reported in Asia, Africa and some other areas. However, due to the scattered di... Human papillomavirus 58 (HPV58) is one type of HPV with high risk of causing cervical cancer. Unusually high prevalence of HPV58 has been reported in Asia, Africa and some other areas. However, due to the scattered distribution of global data, in addition to the lack of data of some HPV58 high-incidence nations and regions, like China's Mainland, a comprehensive analysis of the global geographical distribution of HPV58 remains blank so far. In this study, HPV58 from the human cervical cancer tissue was detected in China's Mainland, and 14 new HPV58-E6/L1 gene sequences were obtained. Moreover, phylogeographic analysis has been conducted combining the HPV58 sequences that have been deposited in GenBank since 1985. The study result shows that the sequences detected from the Shanghai, Jiangsu and Sichuan areas are homologous with those found in the past from Hong Kong and Xi'an, China, as well as Japan and other Southeast Asian areas. Furthermore, Western Africa is considered to be the "root" source of the HPV58 variant, while China's Mainland and Southeast Asia are "transit points" and the new sources of HPV58 after receiving the isolates from the "root" source; like HPV16 and HPV18, the HPV58 might also be one of the major HPV types associated with the development and spread of cervical cancer. 展开更多
关键词 human papillomavirus 58 (hpv58) CERVICAL CANCER PHYLOGEOGRAPHY MOLECULAR EVOLUTION
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人乳头瘤病毒58型L1蛋白B细胞表位预测和分析 被引量:7
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作者 宋易玲 叶晓鲜 +4 位作者 毛珊珊 岑丹维 张婵琼 蒋朋飞 张丽芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期407-411,415,共6页
目的对人乳头瘤病毒58型(HPV58)主要结构蛋白(L1)的B细胞表位进行预测和分析。方法利用生物信息学软件EXPASY在线分析HPV58型L1蛋白的二级结构及生物学特性,包括跨膜趋势、表面可及性、抗原性、亲水性,溶性等,从而对其B细胞表位进行综... 目的对人乳头瘤病毒58型(HPV58)主要结构蛋白(L1)的B细胞表位进行预测和分析。方法利用生物信息学软件EXPASY在线分析HPV58型L1蛋白的二级结构及生物学特性,包括跨膜趋势、表面可及性、抗原性、亲水性,溶性等,从而对其B细胞表位进行综合分析和预测。结果通过亲水性参数,Zimmcrman极性,柔韧性参数,表面可及性及抗原性进行综合分析,预测人乳头瘤病毒58型L1蛋白的B细胞表位可能位于其N端的29-37,43,46-58,64-67,74,79-88,93,100-101,103-125,133-139,149,151-180,187-213,220-213,235,238-247,252-271,277-282,286-309,320-323,327-338,341-348,351,353-368,373-396,408,427,419-425,433-444,453-468,470,475-486,488-490,493-494,497-524肽段区域;进一步用Protien Plast在线同源匹配分析,79-88、190-216、373-396、453-468、497-524肽段区段为可能的B细胞表位。结论用多参数预测分析HPV58型L1蛋白可能的B细胞表位,为进一步研究高危型58型L1蛋白的生物学特性提供了理论基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒58型(hpv58) B细胞表位 L1蛋白 同源性匹配分析
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汉逊酵母重组表达的人乳头瘤病毒58型类病毒颗粒的免疫效果 被引量:4
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作者 靳玉琴 侯俊伟 +2 位作者 张靖 陈实 李启明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第12期1697-1700,1704,共5页
目的评价基于汉逊酵母系统的重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型L1蛋白类病毒颗粒(virus-like particles,VLP)的免疫效果。方法将HPV58 L1重组汉逊酵母工程菌转种于3.7 L发酵罐中,经甲醇诱导15 h,收集菌体,高压均质破碎菌... 目的评价基于汉逊酵母系统的重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型L1蛋白类病毒颗粒(virus-like particles,VLP)的免疫效果。方法将HPV58 L1重组汉逊酵母工程菌转种于3.7 L发酵罐中,经甲醇诱导15 h,收集菌体,高压均质破碎菌体后,采用亲和层析法纯化重组HPV58 L1蛋白,纯化后的HPV58 L1经重构后,经透射电镜观察VLP形态,动态光散射仪分析比较重构与未重构VLP粒径大小及分布情况。将HPV58 L1蛋白(1μg/ml)及HPV58 L1蛋白+佐剂(蛋白含量1μg/ml,铝含量0.41 mg/ml)分别免疫BALB/c小鼠,免疫后4周采血分离血清,假病毒中和试验比较铝佐剂吸附与未吸附免疫效果;将HPV58 L1蛋白+佐剂(蛋白含量1μg/ml,铝含量0.41 mg/ml)免疫5组BALB/c小鼠,每组免疫时间均为0、1、3、5、7周,于初次免疫后第1、2、4、6、8周采血,分离血清,假病毒中和试验检测HPV58 L1免疫效果。结果纯化后的重组HPV58 L1蛋白纯度约90%,可与小鼠抗HPV58 L1单克隆抗体发生特异性结合,在相对分子质量约56 000处,可见特异性条带。重构的HPV58 L1VLP直径约为50 nm,界限清晰,颗粒均一度较高,更接近天然病毒的颗粒形态;流体力学直径与天然病毒颗粒更接近,颗粒大小分布更均一,无较小半径的单体或五聚体。HPV58 L1蛋白+佐剂免疫小鼠血清中和抗体滴度明显高于HPV58 L1蛋白免疫组,差异有统计学意义(P<0.05);5组小鼠血清中和抗体滴度在初次免疫后1周即开始升高,第6周达到最高,重构的重组HPV58 L1蛋白可诱导小鼠产生较高水平的中和抗体。结论应用含铝佐剂的HPV58 L1 VLP免疫小鼠,具有较好的免疫学活性,可作为多价HPV疫苗的组分抗原。 展开更多
关键词 汉逊酵母 人乳头瘤病毒58 类病毒颗粒 免疫效果
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HPV58 E2 DNA疫苗的构建及免疫原性研究
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作者 张晓丽 李潇 +3 位作者 王鑫 郑琳 赵蔚明 齐眉 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第12期17-20,共4页
目的探讨人乳头瘤病毒58型(HPV58)早期基因E2作为DNA疫苗候选抗原的可行性。方法构建HPV58E2真核重组表达载体pcDNA3/58E2,转染SiHa细胞,利用RT-PCR检测HPV58E2mRNA的转录。pcDNA3/58E2DNA肌肉注射免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠血清中... 目的探讨人乳头瘤病毒58型(HPV58)早期基因E2作为DNA疫苗候选抗原的可行性。方法构建HPV58E2真核重组表达载体pcDNA3/58E2,转染SiHa细胞,利用RT-PCR检测HPV58E2mRNA的转录。pcDNA3/58E2DNA肌肉注射免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠血清中特异性anti-HPV58E2IgG水平。结果RT-PCR结果表明,pcD-NA3/58E2能够在真核细胞中有效转录HPV58E2mRNA。动物实验表明,质粒pcDNA3/58E2肌肉接种可诱导免疫小鼠产生抗E2特异性抗体。结论本研究成功构建了重组真核表达载体pcDNA3/58E2,并初步证明HPV58E2DNA疫苗有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 人类乳头瘤病毒58型(hpv58) E2基因 DNA疫苗 宫颈癌
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