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利用内蛋白子剪切功能一步纯化重组人神经营养因子-3 被引量：4
1
作者 袁静明 李卓玉 +2 位作者 王雅梅 徐明群 sxu.edu.cn 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 2000年第3期335-339,共5页
将人神经营养因子 - 3(h NT3)基因插入含内蛋白子 -几丁质结合区 (Intein- CBD)片段的质粒p TXB1的多克隆位点 ,构建成重组子 p TXB- h NT3,随后转化入 E.coli 2 566并进行融合表达 .表达产物包涵体经 8mol/ L脲变性 ,并在 GSH,GSSG存... 将人神经营养因子 - 3(h NT3)基因插入含内蛋白子 -几丁质结合区 (Intein- CBD)片段的质粒p TXB1的多克隆位点 ,构建成重组子 p TXB- h NT3,随后转化入 E.coli 2 566并进行融合表达 .表达产物包涵体经 8mol/ L脲变性 ,并在 GSH,GSSG存在下复性 .复性后的融合蛋白经几丁质珠亲和柱吸附 .待洗涤杂蛋白后 ,加入 50 mmol/ L DTT在 4℃或 2 5℃进行剪切反应 48h,再用缓冲液洗脱 ,即得 h NT3.SDS- PAGE分析表明 ,h NT3达电泳纯 .其分子量约为 1 4 k 展开更多
关键词 人神经营养因子-3 内蛋白子 DTT剪切 纯化
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用温度诱导融合表达含内蛋白子的人神经营养因子-3
2
作者 李卓玉 范俊虎 +1 位作者 王菊香 袁静明 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第3期1-4,共4页
将重组质粒 pTXB NT3(6 9kb)与载体 pJLA50 3(4 9kb)分别用Nde 1/BamH 1双酶切 ,然后将前者的人神经营养因子 3 内蛋白子 几丁质结合区 (hNT3 in tein CBD)DNA片段插入后者载体中 ,构建成一个含内蛋白子的温度诱导型表达载体pLZY0 1... 将重组质粒 pTXB NT3(6 9kb)与载体 pJLA50 3(4 9kb)分别用Nde 1/BamH 1双酶切 ,然后将前者的人神经营养因子 3 内蛋白子 几丁质结合区 (hNT3 in tein CBD)DNA片段插入后者载体中 ,构建成一个含内蛋白子的温度诱导型表达载体pLZY0 1。经转化后 ,工程菌E coliBL2 1/ pLZY0 1在LB培养基中培养 ,表达产物约为4 2kD的hNT3 intein CBD融合蛋白 ,经DTT不完全化学拆除后 ,可得约 15kD的hNT3,2 7kD的intein CBD及 4 2kD的融合蛋白 ,产物经鸡胚背根神经节测定其生物活性 ,融合蛋白在 80ng ,hNT3在 2 5ng时能较好地促进神经纤维的伸长。 展开更多
关键词 人 神经营养因子-3 内蛋白子 温度诱导 融合表达
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Lentivirus介导表达多基因的人胚基因工程神经干细胞的实验研究
3
作者 蔡培强 汤逊 +5 位作者 林月秋 OUDEGA M BLITS B 阳运康 徐林 周田华 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2005年第5期288-291,i002-i003,共6页
目的:探索以Lentivirus为载体,构建同时携带并表达多基因的基因工程人胚神经干细胞(hum an neu鄄ral stem cell,hNSC)的可行性,为脊髓损伤治疗的研究提供材料。方法:培养和鉴定hNSC;用携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP... 目的:探索以Lentivirus为载体,构建同时携带并表达多基因的基因工程人胚神经干细胞(hum an neu鄄ral stem cell,hNSC)的可行性,为脊髓损伤治疗的研究提供材料。方法:培养和鉴定hNSC;用携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)和神经营养因子-3(neurotrophic factor-3,NT-3)的Lentivirus转染hNSC;用荧光显微镜观察、鼠胚背根神经结培养(dorsal root ganglion,DRG)和Slot blot等方法检测基因工程hNSC的多基因表达情况。结果:培养获得了大量的hNSC;荧光显微镜观察到几乎100%的hNSC表达GFP;基因工程hNSC的培养液能促使大鼠DRG旺盛生长;Slot blot检测到基因工程hNSC能高效分泌NT-3蛋白。结论:以Lentivirus为载体能构建同时携带并稳定表达多基因的基因工程hNSC,为脊髓损伤治疗的基础研究及进一步临床应用提供了有价值的细胞资源。 展开更多
关键词 LENTIVIRUS 人胚神经干细胞 基因工程 神经营养因子-3 绿色荧光蛋白
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丁苯酞软胶囊改善帕金森痴呆患者认知功能和日常生活能力的效果及其对相关因子的影响 被引量：56
4
作者 刘丹荣 胡伟 +1 位作者 尤志珺 邓超 《疑难病杂志》 CAS 2016年第4期351-354,共4页
目的观察丁苯酞软胶囊改善帕金森痴呆(PDD)患者认知功能和日常生活能力的效果。方法 2013年6月—2015年6月湖北医药学院附属十堰市人民医院神经内科收治帕金森痴呆患者84例,按照随机数字表法分为观察组及对照组各42例。2组均予常规治疗... 目的观察丁苯酞软胶囊改善帕金森痴呆(PDD)患者认知功能和日常生活能力的效果。方法 2013年6月—2015年6月湖北医药学院附属十堰市人民医院神经内科收治帕金森痴呆患者84例,按照随机数字表法分为观察组及对照组各42例。2组均予常规治疗,对照组加用盐酸多奈哌齐口服,观察组在对照组基础上加服丁苯酞软胶囊,治疗时间均为12周。观察2组治疗效果;记录2组治疗前后帕金森病评定量表(UPDRS)、简易精神状态量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)及日常生活能力(ADL)评分;同时测定2组治疗前后血清C-反应蛋白(CRP)、重组人帕金森病蛋白7(PARK7)、神经营养因子-3(NT-3)水平。结果治疗后,观察组总有效率为95.24%,显著高于对照组的76.19%(X^2=6.222,P<0.05);观察组UPDRS总评分低于对照组[(20.32±5.26)分vs.(35.12±5.11)分,P<0.05],而MMSE、MoCA、ADL评分均显著高于对照组[分别为(28.92±4.78)分、(27.89±4.36)分、(75.39±4.58)分和(26.02±5.02)分、(24.12±2.78)分、(62.58±5.78)分],差异均有统计学意义(P<0.05);观察组CRP、PARK7均低于对照组[分别为(3.98±0.36)mg/L、(14.32±2.15)μg/L和(6.35±0.48)mg/L、(25.26±4.63)μg/L],而NT-3水平高于对照组[(32.25±3.78)μg/L vs.(24.98±4.23)μg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞软胶囊能有效改善PDD患者肢体功能运动及脑神经功能,可明显降低患者血清CRP、PARK7水平,提高NT-3水平,对PDD具有良好治疗效果,值得临床应用。 展开更多
关键词 丁苯酞软胶囊 帕金森痴呆 认知功能 日常生活能力 C-反应蛋白 重组人帕金森病蛋白7 神经营养因子-3
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盐酸美金刚对帕金森病痴呆患者血清PARK7与NT-3水平的影响分析 被引量：3
5
作者 刘煜帆 《中国医学创新》 CAS 2021年第32期35-39,共5页
目的:探讨盐酸美金刚治疗帕金森病痴呆患者的效果及对血清重组人帕金森病蛋白7(PARK7)、神经营养因子-3(NT-3)的影响。方法:选取2018年3月-2020年5月本院收治的50例帕金森病痴呆患者作为研究对象,按随机数字表法分为两组。所有患者均行... 目的:探讨盐酸美金刚治疗帕金森病痴呆患者的效果及对血清重组人帕金森病蛋白7(PARK7)、神经营养因子-3(NT-3)的影响。方法:选取2018年3月-2020年5月本院收治的50例帕金森病痴呆患者作为研究对象,按随机数字表法分为两组。所有患者均行常规治疗,在此基础上,对照组(n=25)采用多奈哌齐治疗,观察组(n=25)采用盐酸美金刚治疗。比较两组临床疗效、血清因子水平变化以及不良反应发生情况。结果:治疗后6个月,观察组MoCA评分为(33.46±3.23)分、MMSE评分为(26.36±1.37)分、UPDRS评分为(20.08±1.16)分、ADL评分为(82.04±3.51)分,对照组分别为(25.61±3.54)、(20.33±1.19)、(32.57±2.35)、(61.12±5.28)分,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组PAPK7为(13.58±1.21)μg/L、C反应蛋白(CRP)为(4.07±0.21)mg/L、NT-3为(34.71±2.68)μg/L,对照组分别为(21.47±2.83)μg/L、(6.12±0.28)mg/L、(23.46±1.57)μg/L,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组乏力、腹泻、恶心呕吐、头晕头痛以及食欲不振的不良反应发生率均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:盐酸美金刚治疗帕金森病痴呆,可有效减少不良反应,改善血清因子及症状,提高患者的认知能力及智力状态,促进患者恢复日常生活能力,具有重要的研究意义。 展开更多
关键词 帕金森病痴呆 盐酸美金刚 重组人帕金森病蛋白7 神经营养因子-3
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BDNF和NT-3慢病毒载体构建与相对表达水平比较
6
作者 蔡瑜 彭聪 +2 位作者 陈瑶 袁瑞 闫永建 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2021年第6期640-647,共8页
目的 构建携带脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)、融合基因(BDNF-T2A-NT-3)的慢病毒载体,通过感染人源骨髓间充质干细胞(hBMSCs)检测BDNF和NT-3的mRNA和蛋白相对表达水平。方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增制备BDNF、... 目的 构建携带脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)、融合基因(BDNF-T2A-NT-3)的慢病毒载体,通过感染人源骨髓间充质干细胞(hBMSCs)检测BDNF和NT-3的mRNA和蛋白相对表达水平。方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增制备BDNF、NT-3、BDNF-T2A-NT-3目的基因片段,离体构建携带BDNF、NT-3、BDNF-T2A-NT-3的慢病毒表达载体并感染293T细胞;采用PCR技术检测293T细胞中BDNF、NT-3和BDNF-T2A-NT-3 mRNA相对表达水平;采用流式细胞术检测hBMSCs免疫表型;将对数生长期的hBMSCs随机分为hBMSCs组、空载慢病毒组、BDNF组、NT-3组和融合基因组,分别用空载慢病毒、BDNF慢病毒载体、NT-3慢病毒载体、BDNF-T2A-NT-3慢病毒载体感染后,于倒置相差显微镜下观察细胞荧光强度;采用荧光PCR法和蛋白免疫印迹法检测BDNF、NT-3的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果 测序分析鉴定结果显示,成功构建了携带BDNF、NT-3、BDNF-T2A-NT-3的慢病毒载体。慢病毒感染293T细胞后在倒置相差显微镜可观察到绿色荧光,感染目的基因组293T细胞的BDNF、NT-3和BDNF-T2A-NT-3 mRNA相对表达水平均高于无感染目的基因组(P值均<0.01)。流式细胞术检测结果显示,hBMSCs中分化抗原(CD)73;、CD90;、CD34;阳性表达率分别为97.77%、52.15%和0.07%。BDNF组、NT-3组hBMSCs细胞的BDNF mRNA的相对表达水平均高于hBMSCs组(P值均<0.01),融合基因组hBMSCs细胞的BDNF、NT-3 mRNA的相对表达水平均分别高于hBMSCs组、空载慢病毒组、BDNF组和NT-3组(P值均<0.01);BDNF组、NT-3组、融合基因组hBMSCs细胞的NT-3蛋白相对表达水平均分别高于hBMSCs组和空载慢病毒组(P值均<0.01)。结论 成功构建的BDNF、NT-3、BDNF-T2A-NT-3慢病毒载体可介导BDNF和NT-3在hBMSCs中稳定表达,为探索BDNF和NT-3基因在神经退行性疾病发病机制中的作用提供依据。 展开更多
关键词 HBMSCS 脑源性神经营养因子 神经营养因子-3 融合基因 感染 构建 慢病毒载体
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