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hIGF-1基因修饰骨髓基质干细胞复合PLGA移植修复关节软骨缺损 被引量:5
1
作者 丁幸坡 金先庆 刘伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期354-357,390,共5页
目的:研究人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因修饰的骨髓基质干细胞(MSCs)复合PLGA材料移植对关节软骨缺损的修复作用。方法:从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出hIGF-1基因,亚克隆后酶切出目的片段插入pIRES2-EGFP中,构建成真核表达载体pIRES... 目的:研究人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因修饰的骨髓基质干细胞(MSCs)复合PLGA材料移植对关节软骨缺损的修复作用。方法:从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出hIGF-1基因,亚克隆后酶切出目的片段插入pIRES2-EGFP中,构建成真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,鉴定后转染兔MSCs并检测hIGF-1在其中的表达;将转染细胞复合PLGA支架材料立体培养后植入实验性兔关节软骨缺损处,不同时间取材,检测对软骨缺损修复的效果。结果:成功构建了GFP标记的真核载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,并在靶细胞中得到理想表达;hIGF1基因修饰的MSCs复合支架材料移植明显促进了缺损软骨的修复质量,组织学评分与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:IGF-1是软骨组织工程种子细胞MSCs基因修饰的理想候选基因,以之修饰的MSCs作为种子细胞可以明显提高组织工程方法对软骨缺损的修复效果。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 骨髓基质干细胞 关节软骨缺损
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含hIGF-1基因腺病毒的构建及在兔骨髓间充质干细胞的表达 被引量:3
2
作者 丁幸坡 金先庆 +2 位作者 罗小辑 邱林 刘伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期1495-1498,共4页
目的用Adeasy系统构建荧光蛋白基因标记的腺病毒载体Ad-hIGF-1,然后转染兔骨髓间充质干细胞并检测其表达。方法根据GenBank公布的hIGF-1序列设计PCR引物,从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出截短型hIGF-1,亚克隆至pMD-T载体,鉴定后酶切出目... 目的用Adeasy系统构建荧光蛋白基因标记的腺病毒载体Ad-hIGF-1,然后转染兔骨髓间充质干细胞并检测其表达。方法根据GenBank公布的hIGF-1序列设计PCR引物,从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出截短型hIGF-1,亚克隆至pMD-T载体,鉴定后酶切出目的基因插入pAdtrack-CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdtrack-hIGF-1,经Pm eⅠ线性化后采用电穿孔法转化至已包含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的B J5183大肠杆菌中,挑选同源重组质粒线性化后转染HEK293细胞收获腺病毒,然后转染靶细胞兔骨髓间充质干细胞,通过绿色荧光蛋白表达情况以及流式细胞仪、免疫细胞化学等方法检测hIGF-1的表达。结果成功构建了绿色荧光蛋白基因标记的腺病毒Ad-hIGF-1,并在兔骨髓间充质干细胞得以高效表达。结论Adeasy腺病毒系统是基因转染的高效载体系统。腺病毒Ad-hIGF-1转染的骨髓间充质干细胞可作为基因修饰的软骨组织工程种子细胞。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 腺病毒载体 骨髓间充质干细胞
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scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用
3
作者 温迪 吉盈肖 +2 位作者 李秋生 陈相 刘亚坤 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2024年第2期106-110,共5页
目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠... 目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化 SOD1-G93A转基因小鼠 腺相关病毒9 人胰岛素样生长因子-1 抗凋亡通路
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人胰岛素样生长因子-1逆转录病毒载体的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达 被引量:3
4
作者 周海斌 郑祖根 +1 位作者 董启榕 周晓中 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第2期212-215,共4页
目的构建人胰岛素样生长因子-1的逆转录表达载体,建立逆病毒介导的IGF-1基因转移系统。方法用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝细胞克隆IGF-1的基因;经DNA测序分析证实后将目的基因插入逆转录病毒载体LXSN,制备pLXSN-IGF-1表达载体;... 目的构建人胰岛素样生长因子-1的逆转录表达载体,建立逆病毒介导的IGF-1基因转移系统。方法用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝细胞克隆IGF-1的基因;经DNA测序分析证实后将目的基因插入逆转录病毒载体LXSN,制备pLXSN-IGF-1表达载体;借助阳离子脂质体转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆,获取病毒上清;培养人骨髓基质干细胞,用病毒上清感染骨髓基质干细胞;采用RT-PCR及Western blot法检测目的基因在靶细胞的表达。结果经酶切电泳和DNA测序表明成功构建了IGF-1逆转录病毒表达载体,转染包装细胞后可以产生IGF-1逆转录病毒,病毒感染人骨髓基质干细胞后能够表达IGF1-1重组蛋白。结论成功建立逆转录病毒载体介导的IGF-1体外表达体系,能够快速、稳定地将IGF-1基因转入骨髓基质干细胞。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 逆转录病毒 骨髓基质干细胞
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新型携载人胰岛素样生长因子-1纤维屏障膜的制备及其理化和生物性能 被引量:1
5
作者 杨少华 常语宸 +3 位作者 何苗苗 孙睿 吕晓琴 余占海 《合成化学》 CAS CSCD 2017年第6期487-492,502,共7页
通过同轴静电纺丝技术制备携载人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的纤维屏障膜(IGF-1/SF/PLLACL),其结构和性能经SEM,TEM和XRD表征。与非载药同轴静电纺丝纤维膜在表观形貌、理化性能、生物学性能和膜屏障功能等方面进行对比,研究了其在引导... 通过同轴静电纺丝技术制备携载人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的纤维屏障膜(IGF-1/SF/PLLACL),其结构和性能经SEM,TEM和XRD表征。与非载药同轴静电纺丝纤维膜在表观形貌、理化性能、生物学性能和膜屏障功能等方面进行对比,研究了其在引导性骨组织再生中的可应用性。结果显示:纤维膜呈网状结构,IGF-1/SF/PLLACL形成芯壳双层结构;非载药纤维膜的接触角和机械强度均略高于载药组纤维,差异具有统计学意义(P<0.05);载药组与非载药组纤维膜的衍射趋势与聚左旋乳酸聚己内酯晶体相似,丝素蛋白和胰岛素样生长因子-1的加入并未改变其相组成。3 d内IGF-1突释现象严重,之后曲线逐渐平缓,呈缓释状态;载药组细胞活性和碱性磷酸酶活性较非载药组高,略低于IGF-1对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而且两组纤维膜均具有阻挡成纤维细胞长入的屏障功能。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子 同轴静电纺丝 屏障膜 引导性骨组织再生 制备 性能
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人IGF-Ⅱ RIA的建立及初步应用
6
作者 薛辉 郝秀华 +2 位作者 梁辰 邓子辉 颜光涛 《放射免疫学杂志》 CAS 2012年第3期241-242,共2页
目的:建立高特异性和高灵敏度的人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)放射免疫分析方法,用于测定人血清以及培养液中IGF-Ⅱ水平。方法:用人工合成的IGF-Ⅱ多肽连接甲状腺球蛋白,多次免疫兔子获取高效价、高特异的人IGF-Ⅱ抗体。用氯氨T法制备1... 目的:建立高特异性和高灵敏度的人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)放射免疫分析方法,用于测定人血清以及培养液中IGF-Ⅱ水平。方法:用人工合成的IGF-Ⅱ多肽连接甲状腺球蛋白,多次免疫兔子获取高效价、高特异的人IGF-Ⅱ抗体。用氯氨T法制备125I标记的IGF-Ⅱ,经交联葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)纯化。抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温浴24h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原。用该法测定正常献血员150例和肝癌患者180例,并比较了肝癌患者介入治疗前后IGF-Ⅱ水平的变化。结果:该法测定范围为(0.1~24.3)ng/ml,最低检出值<0.1ng/ml,批内和批间误差<6.3%和10.0%。正常献血员血清IGF-Ⅱ水平(1.266±0.298)ng/ml明显低于肝癌各组患者(P<0.05);肝癌患者进行介入治疗3d后IGF-Ⅱ水平(4.263±1.411)ng/ml明显低于治疗前(4.916±1.24)ng/ml(P<0.05);介入治疗后3d与治疗后1个月(4.796±1.647)ng/ml水平相比无明显差异。结论:该法稳定、简便、特异、灵敏,适于检出人血清中的IGF-Ⅱ水平。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子 放射免疫分析 肝癌
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腺苷钴胺与丹红注射液联合硫辛酸对老年2型糖尿病周围神经病变患者神经传导及血清IGF-1、NGF水平的影响 被引量:18
7
作者 罗一青 圈启芳 +3 位作者 余平 李娜 周星利 刘玲玲 《临床和实验医学杂志》 2017年第23期2350-2353,共4页
目的探讨腺苷钴胺与丹红注射液联合硫辛酸对老年2型糖尿病周围神经病变患者神经传导及血清人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、人神经生长因子(NGF)水平的影响。方法选取79例老年2型糖尿病周围神经病变患者,按照随机数字表法分组,对照组39例... 目的探讨腺苷钴胺与丹红注射液联合硫辛酸对老年2型糖尿病周围神经病变患者神经传导及血清人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、人神经生长因子(NGF)水平的影响。方法选取79例老年2型糖尿病周围神经病变患者,按照随机数字表法分组,对照组39例予以腺苷钴胺+硫辛酸治疗,观察组40例予以硫辛酸+腺苷钴胺+丹红注射液治疗。观察比较两组正中、腓总神经感觉传导速度(SNCV)与运动传导速度(MNCV)及临床疗效各症状(灼热感、麻木、疼痛、感觉异常)评分,并统计两组血清IGF-1、NGF水平及毒副作用发生情况。结果观察组治疗1个月后正中、腓总神经SNCV及MNCV均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组治疗总有效率为87.50%(35/40),高于对照组66.67%(26/39),差异具有统计学意义(P<0.05);治疗1个月后观察组灼热感、麻木及疼痛、感觉异常症状评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗1个月后血清IGF‐1、NGF水平高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组毒副作用发生率为15.00%(6/40),对照组为10.26%(4/39),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论硫辛酸、腺苷钴胺与丹红注射液联合治疗老年2型糖尿病周围神经病变,效果显著,安全性高,可改善患者神经传导速度及神经生长相关因子水平。 展开更多
关键词 2型糖尿病 周围神经病变 腺苷钴胺 丹红注射液 硫辛酸 神经传导 IGF-1 NGF
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胰岛素样生长因子-Ⅰ和骨形态发生蛋白-2对人牙周膜细胞增殖的作用 被引量:10
8
作者 刘宏 吴织芬 王勤涛 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 1999年第1期31-33,共3页
目的:重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)、重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)分别或联合应用对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法:采用组织块法体外培养人PDL细胞,MTT法测定PDL细胞在不同生长... 目的:重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)、重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)分别或联合应用对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法:采用组织块法体外培养人PDL细胞,MTT法测定PDL细胞在不同生长因子刺激下的增殖情况。结果:rhIGF-I、rhBMP-2都可促进人PDL细胞的增殖,这种促增殖作用呈一定的浓度依赖性,rhIGF-I与rhBMP-2联合应用对人PDL细胞的增殖有协同作用,且与单独应用相比相差显著。结论:rhIGF-I、rhBMP-2可望作为牙周再生的生物活性介质,rhIGF-I与rhBMP-2联合应用对PDL细胞的促增殖作用更强。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 细胞培养 胰岛素样 生长因子 RHBMP2
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hIGF-1基因治疗老龄大鼠勃起功能障碍的剂量及时效研究 被引量:13
9
作者 蒲小勇 王行环 +5 位作者 王怀鹏 高炜城 杨中华 李世林 邓春华 毛向明 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期690-694,共5页
目的:探讨阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因提高老年性大鼠阴茎勃起功能的最佳剂量和作用实效。方法:4月龄SD雄性大鼠10只(青年组);24月龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,每组10只:PBS对照组、hIGF-1基因10μg注射组、100μ... 目的:探讨阴茎海绵体内注射胰岛素样生长因子1(hIGF-1)基因提高老年性大鼠阴茎勃起功能的最佳剂量和作用实效。方法:4月龄SD雄性大鼠10只(青年组);24月龄SD雄性大鼠40只,随机分为5组,每组10只:PBS对照组、hIGF-1基因10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组,注射后在不同时间段4周和8周行电刺激检测大鼠阴茎海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP)的测定,分析比较不同剂量和不同时间hIGF-1基因治疗的效果;RT-PCR检测hIGF-1基因mRNA的表达。结果:电刺激发现老年组较青年组ICP/MAP和总ICP明显降低(P<0.05)。4和8周的治疗之后,10μg注射组、100μg注射组和1000μg注射组较PBS对照组ICP/MAP和总ICP均明显提高(P<0.05);100μg注射组和1000μg注射组在4和8周时ICP/MAP和总ICP值和青年组相仿;10μg注射组虽然不能达到和青年组相仿的治疗效果,但仍然有治疗意义;所有hIGF-1基因治疗组均可检测到hIGF-1 mRNA的表达。结论:hIGF-1基因治疗能够提高老龄大鼠的勃起功能,100μg即可达到有效的治疗,hIGF-1基因治疗至少能够维持8周时间。 展开更多
关键词 勃起功能障碍 老龄 胰岛素样生长因子1 基因治疗 大鼠
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人胰岛素样生长因子-1基因表达载体的构建 被引量:9
10
作者 吴建平 蒲小勇 +8 位作者 周云峰 王行环 吴一龙 韩雪 王怀鹏 胡礼泉 叶林柏 徐战平 陈浩阳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1396-1397,共2页
目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因的表达载体。方法通过聚合酶链反应(PCR)方法从PCDB-MGF-1质粒中扩增出392 bp的靶片段,将其黏端克隆至pET-His表达质粒,然后应用限制性酶切、PCR扩增及序列测定等技术进行鉴定。结果成功构建了... 目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因的表达载体。方法通过聚合酶链反应(PCR)方法从PCDB-MGF-1质粒中扩增出392 bp的靶片段,将其黏端克隆至pET-His表达质粒,然后应用限制性酶切、PCR扩增及序列测定等技术进行鉴定。结果成功构建了hIGF-1表达片段,酶切及测序证实读码框正确。结论成功克隆hIGF-1表达载体,为体外表达蛋白和行免疫治疗勃起功能障碍奠定基础。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 克隆
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联合注射外源性IFNγ和IGF-1治疗小鼠骨骼肌损伤 被引量:5
11
作者 陈疾忤 陈世益 +2 位作者 李宏云 尚西亮 吴子英 《中国骨伤》 CAS 2008年第6期434-437,共4页
目的:观察局部联合注射外源性人胰岛素样生长因子1(human insulin like growth factor1,hIGF1)和人γ干扰素(human interferonγ,hIFNγ)对于小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程中再生和纤维化的影响。方法:64只8周龄雄性C3H小鼠,制作右侧腓... 目的:观察局部联合注射外源性人胰岛素样生长因子1(human insulin like growth factor1,hIGF1)和人γ干扰素(human interferonγ,hIFNγ)对于小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程中再生和纤维化的影响。方法:64只8周龄雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分为4组,即A组(注射hIFNγ)、B组(注射hIGF1)、C组(联合注射hIFNγ和hIGF1)、D组(注射生理盐水)。挫伤后第10天,A、B、C、D组小鼠,腓肠肌损伤处分别注射不同药物进行干预。于干预前(伤后7d),和干预后4、18、32d,各组随机抽取4只小鼠进行损伤腓肠肌取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色方法检测不同时点Ⅱb型肌球蛋白重链(myosin heavy chainⅡb,MHCⅡb)及波形蛋白(Vimentin)的表达。结果:①干预后各时点,B、C组小鼠损伤骨骼肌局部MHCⅡb表达较A、D组明显高;②干预后各时间点A、B、C组小鼠损伤骨骼肌局部Vimentin表达较D组低,其中以A组和B组更明显。结论:①骨骼肌急性损伤后,局部注射hIGF1有明显促进骨骼肌纤维再生,和一定程度抑制纤维化的作用。②局部注射hIFNγ仅表现出抑制纤维化的作用,且比hIGF1更加明显。③联合应用hIGF1和hIFNγ,能够同时促进骨骼肌再生和抑制纤维化,有效地促进损伤骨骼肌的愈合。 展开更多
关键词 人γ干扰素 胰岛素样生长因子-1 创伤和损伤 骨骼 肌球蛋白重链 波形蛋白
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人胰岛素样生长因子Ⅰ型在E.coli和家蚕中的表达 被引量:3
12
作者 徐岩 贡成良 +2 位作者 薛仁宇 沈卫德 曹广力 《常熟理工学院学报》 2006年第4期72-77,共6页
将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状... 将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR检测,获得了重组病毒Bm-Bac-hIGF-Ⅰ。SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫血淋巴中可以检测到一条分子量约为7.5 kD的特异性条带,ELISA检测表达量达4.51μg/mL蚕血淋巴。 展开更多
关键词 人重组胰岛素样生长因子Ⅰ型 大肠杆菌 家蚕 重组病毒 基因表达
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Human insulin-like growth factor 1-transfected umbilical cord blood neural stem cell transplantation improves hypoxic-ischemic brain injury 被引量:3
13
作者 Dengna Zhu Yanjie Jia +3 位作者 Jun Wang Boai Zhang Guohui Niu Yazhen Fan 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2011年第19期1445-1451,共7页
Human insulin-like growth factor 1-transfected umbilical cord blood neural stem cells were transplanted into a hypoxic-ischemic neonatal rat model via the tail vein. BrdU-positive cells at day 7 post-transplantation, ... Human insulin-like growth factor 1-transfected umbilical cord blood neural stem cells were transplanted into a hypoxic-ischemic neonatal rat model via the tail vein. BrdU-positive cells at day 7 post-transplantation, as well as nestin- and neuron specific enolase-positive cells at day 14 were increased compared with those of the single neural stem cell transplantation group. In addition, the proportion of neuronal differentiation was enhanced. The genetically modified cell-transplanted rats exhibited enhanced performance in correctly crossing a Y-maze and climbing an angled slope compared with those of the single neural stem cell transplantation group. These results showed that human insulin-like growth factor 1-transfected neural stem cell transplantation promotes the recovery of the leaming, memory and motor functions in hypoxic-ischemic rats. 展开更多
关键词 human insulin-like growth factor 1 neural stem cell hypoxic-ischemic brain damage TRANSPlANTATION neural regeneration
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人胰岛素样生长因子前体基因的重组、表达及其蛋白纯化 被引量:3
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作者 施有为 刘莉 程蕴琳 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期825-828,845,共5页
目的:构建含有人胰岛素样生长因子(humaninsulin-likegrowthfactor-1,hIGF-1)前体编码全长cDNA的重组载体,使其在E.coliBL21(DE3)中表达,并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化,同时探讨其抗原性及应用价值。方法:采用PCR法,扩增编码h... 目的:构建含有人胰岛素样生长因子(humaninsulin-likegrowthfactor-1,hIGF-1)前体编码全长cDNA的重组载体,使其在E.coliBL21(DE3)中表达,并对此表达菌株所表达的重组蛋白进行纯化,同时探讨其抗原性及应用价值。方法:采用PCR法,扩增编码hIGF-1前体cDNA的片段,通过双酶切、胶回收纯化、连接后得到pET32a(+)/hIGF-1重组载体,然后将其转化入BL21(DE3)中,经IPTG诱导后表达的重组蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用Westernblot法检测重组蛋白的抗原活性。结果:重组质粒pET32a(+)/hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析后证实构建成功。BL21(DE3)表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳后显示,其表达量占细菌总蛋白量的25%左右,该重组蛋白经镍柱亲和层析纯化后其纯度高达90%以上。Westernblot结果显示非常清晰的免疫印迹条带,表明此重组蛋白具有免疫学特异性。结论:pET32a(+)/hIGF-1重组载体构建成功,并能够高效表达。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 前体PCR 重组蛋白 亲和层析
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重组人胰岛素样生长因子1对新生大鼠高氧诱导的支气管肺发育不良的保护作用及机制研究 被引量:4
15
作者 瞿色华 单连强 +3 位作者 陈爽 王奕童 陈信 周瑞 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1359-1362,共4页
目的探讨重组人胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对新生大鼠高氧诱导的支气管肺发育不良的保护作用和机制。方法将大鼠暴露于95%氧浓度环境中建立支气管肺发育不良模型。将大鼠分为正常组、模型组和实验组,每组60只。正常组置于空气中;模型... 目的探讨重组人胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对新生大鼠高氧诱导的支气管肺发育不良的保护作用和机制。方法将大鼠暴露于95%氧浓度环境中建立支气管肺发育不良模型。将大鼠分为正常组、模型组和实验组,每组60只。正常组置于空气中;模型组暴露于95%O_(2)模型箱中;实验组持续暴露于95%O_(2)模型箱中,腹腔注射rhIGF-11 mg·kg^(-1),每天1次,连续14 d。第1、3、7、14天,各组均取15只大鼠测定肺湿重/干重(W/D)值、氧合指数(OI)、呼吸指数(RI)。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-ɑ和IL-6水平。蛋白质印迹法检测肺组织内cleaved caspase-12蛋白表达水平。结果正常组、模型组、实验组第14天W/D值分别为5.81±0.22,6.28±0.38和6.08±0.22;这3组OI值分别为430.60±9.80,257.91±15.08和413.81±13.80;这3组RI值分别为0.21±0.01,0.49±0.03和0.25±0.02;这3组TNF-ɑ水平分别为(68.88±5.50),(279.62±12.45)和(79.07±5.25)pg·mL^(-1);这3组IL-6水平分别为(128.32±7.38),(229.22±6.80)和(139.11±7.21)pg·mL^(-1);这3组cleaved caspase-12蛋白表达水平分别为0.30±0.03,0.90±0.08和0.35±0.03。上述指标,模型组与正常组比较,实验组与模型组比较,第3,7,14天差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论rhIGF-1可能通过下调cleaved caspase-12表达从而对新生大鼠高氧诱导的支气管肺发育不良发挥保护作用。 展开更多
关键词 重组人胰岛素样生长因子1 高氧 支气管肺发育不良 机制
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人胰岛素样生长因子-1真核表达载体的构建及在神经干细胞中的表达 被引量:3
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作者 朱登纳 王军 +3 位作者 贾延劼 牛国辉 张博爱 吴值荣 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第2期156-159,共4页
目的:构建人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)真核表达载体,并在人脐血神经干细胞(NSCs)中表达。方法:采用RT-PCR法从人胎肝中克隆IGF-1基因,将其导入真核表达载体pcDNA3.1中,用脂质体转染法将重组质粒转染人脐血NSCs。分别采用RT-PCR和免疫... 目的:构建人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)真核表达载体,并在人脐血神经干细胞(NSCs)中表达。方法:采用RT-PCR法从人胎肝中克隆IGF-1基因,将其导入真核表达载体pcDNA3.1中,用脂质体转染法将重组质粒转染人脐血NSCs。分别采用RT-PCR和免疫荧光细胞化学法检测转基因NSCs中IGF-1mRNA和蛋白的表达。结果:琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出462bp的条带;重组载体pcDNA3.1-IGF-1经HindⅢ与BamHⅠ双酶切后,得到5428bp和462bp的两个条带;目的基因转染的NSCs经RT-PCR扩增出一条与目的基因一致的条带;免疫荧光细胞化学检测到IGF-1蛋白的表达。结论:成功构建了人IGF-1基因的真核表达载体,转染后IGF-1重组蛋白在人脐血NSCs中能成功表达。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 基因转染 人脐带血 神经干细胞
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人胰岛素样生长因子1基因在海绵体平滑肌细胞中的表达及定位 被引量:3
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作者 蒲小勇 胡礼泉 +7 位作者 王行环 廖庆娇 韩雪 叶林柏 田斌群 李世文 郑新民 宋健 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S1期-,共3页
目的观察人胰岛素样生长因子1基因在海绵体平滑肌细胞中的表达及定位情况,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。方法采用Lipofectamine2000包裹PCDB-hIGF-1质粒和PCDB空载体,转染原代培养的大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,转染... 目的观察人胰岛素样生长因子1基因在海绵体平滑肌细胞中的表达及定位情况,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。方法采用Lipofectamine2000包裹PCDB-hIGF-1质粒和PCDB空载体,转染原代培养的大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,转染后24h分别采用RT-PCR法检测hIGF-1基因mRNA表达,Westernblot法检测hIGF-1蛋白表达,荧光免疫细胞化学法检测hIGF-1细胞定位及蛋白表达。结果RT-PCR检测到hIGF-1mRNA表达,Westernblot和荧光免疫细胞化学法均检测到hIGF-1蛋白表达,荧光免疫细胞化学法可见hIGF-1蛋白定位于阴茎海绵体细胞胞质中。结论PCDB-hIGF-1成功转染入大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞可表达hIGF-1基因,蛋白定位于胞质。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子1 海绵体平滑肌细胞
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重组人胰岛素样生长因子-1纯化及其鉴定的研究 被引量:3
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作者 段宇 赵红 +1 位作者 汪承亚 陈家伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期557-560,共4页
目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除... 目的:利用亲和层析法将家蚕幼虫中高效表达的重组人胰岛素样生长因子(recombinanthumaninsulin鄄likegrowthfactor鄄1,rhIGF鄄1)纯化并鉴定,以得到具有免疫学活性和生物学活性的rhIGF鄄1生物制品。方法:蚕血淋巴中rhIGF鄄1初步提纯去除杂质,采用亲和层析法纯化rhIGF鄄1。以ELISA法测定纯化产物中rhIGF鄄1含量,用SDS鄄PAGE和Western鄄blot分析鉴定rhIGF鄄1纯度及免疫学活性,4-甲基偶氮唑蓝(tetrazoliumsalt,MTT)法观察其对MCF鄄7细胞增殖的影响。结果:纯化后rhIGF鄄1纯度约为40%,Westernblot分析发现,主要纯化产物相对分子质量为7.5ku的成熟hIGF鄄1,所含非目的产物与hIGF鄄1无免疫交叉反应。细胞活性刺激实验显示,rhIGF鄄1纯品对MCF鄄7细胞有较好的刺激活性,促增殖能力优于来源于大肠杆菌的rhIGF鄄1产品。结论:蚕血淋巴中的rhIGF鄄1经亲和层析后初步得到纯化,并显示良好的免疫学活性和生物学活性。 展开更多
关键词 重组人胰岛素样生长因子—1 家蚕幼虫 亲和层析 纯化产物 活性
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胰岛素样生长因子-1基因原核表达载体的构建及表达蛋白的生物学活性 被引量:3
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作者 曹传平 陈晓虹 +6 位作者 吴建国 商阿丽 虞慧华 康五朋 郑玲莉 张敬 鞠佃文 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第10期848-851,共4页
目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆... 目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。MTT法检测rhIGF-1促MCF-7细胞的增殖作用。结果转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7700的目的蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%。Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用。结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1。 展开更多
关键词 人胰岛素样生长因子-1 原核表达 纯化 生物学活性
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转化生长因子-β3/胰岛素样生长因子-1联合基因转染诱导间充质干细胞成软骨细胞分化 被引量:2
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作者 黄辉 李海涛 +4 位作者 蔺媛媛 李娅娟 杨迭影 夏晨蕾 夏长所 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期497-500,共4页
目的重组慢病毒介导转化生长因子(TGF)-β3/胰岛素样生长因子-1(HIGF-1)联合基因转染兔骨髓间充质干细胞,诱导其软骨细胞分化,比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率。方法全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,... 目的重组慢病毒介导转化生长因子(TGF)-β3/胰岛素样生长因子-1(HIGF-1)联合基因转染兔骨髓间充质干细胞,诱导其软骨细胞分化,比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率。方法全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/HIGF-1联合基因(TB组),培养14 d后,荧光显微镜下观察各组细胞形态,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量。结果流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07%)、白细胞表面抗原[人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR),1.73%]均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79%)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状;RT-PCR结果显示:T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原基因表达量为0.645±0.024、0.587±0.018、0.616 ±0.019,显著高于C组(0.192±0.012、0.241±0.021、0.273±0.015),N组(0.211±0.014、0.224±0.016、0.232±0.022)(P=0.000);TB组基因表达量为0.832±0.013、0.746±0.024、0.951±0.026,显著高于T组(P=0.000)。T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量为1.36±0.20、0.39±0.05、0.68±0.09,显著高于C组(0.58±0.11、0.12±0.08、0.23±0.15),N组(0.62±0.14、0.13±0.06、0.25±0.02,P=0.000);TB组蛋白表达量为1.83±0.13、1.35±0.24、1.51±0.26,显著高于T组(P=0.000)。结论TGF-β3/HIGF-1联合基因转染骨髓间充质干细胞能诱导其成软骨细胞分化,且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 软骨分化 转化生长因子-Β3 胰岛素样生长因子-1
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