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人红细胞生成素单克隆抗体的制备、鉴定及应用研究
被引量：
3
1
作者
施水良
曾怡
+1 位作者
金以丰
谢弘
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第1期54-59,共6页
用rhEPO作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,用碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEPO,包被PVC板,对杂交瘤用ELISA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG_1、IgG_(2...
用rhEPO作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,用碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEPO,包被PVC板,对杂交瘤用ELISA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG_1、IgG_(2b),轻链均为k链,K_d分别为5.53×10^(-10)mol/L和1.34×10^(-10)mol/L。用Western blot方法证明两者对hEPO具有高度的专一性,能特异地识别rhEPO和尿源hEPO。所制备单抗可作为亲和层析的配体,用于再生障碍性贫血病人尿中EPO及哺乳类工程细胞所表达的hEPO的分离、纯化,并可用于hEPO的定量检测。
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关键词
人红细胞生成素
单克隆抗体
制备
鉴定
下载PDF
职称材料
人促红细胞生成素N糖图谱离子色谱分析方法的联合验证
2
作者
史新昌
于雷
+3 位作者
秦玺
安怡方
李响
周勇
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024年第9期1096-1101,1108,共7页
目的对离子色谱(ion chromatography,IC)联用脉冲安培检测器(pulsed amperometric detector,PAD)分析重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)N糖图谱方法进行多实验室联合验证。方法将rhEPO供试品用25 mmol/L磷...
目的对离子色谱(ion chromatography,IC)联用脉冲安培检测器(pulsed amperometric detector,PAD)分析重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)N糖图谱方法进行多实验室联合验证。方法将rhEPO供试品用25 mmol/L磷酸盐缓冲液超滤置换缓冲体系,调整浓度至2 mg/mL,用糖苷酶F酶切后,经乙醇沉淀,取上清冷冻干燥,获得rhEPO游离N糖。色谱条件:分析柱为Dionex CarboPac PA200,保护柱为Dionex CarboPac PA200;流动相A为50 mmol/L氢氧化钠溶液,流动相B为200 mmol/L氢氧化钠溶液,流动相C为250 mmol/L乙酸钠溶液;进样体积为25μL;流速为0.5 mL/min;柱温为30℃;梯度洗脱;使用仪器自带分析软件进行峰簇最高峰保留时间和峰簇面积百分比积分。选择3家实验室(L1~L3)进行方法的联合验证,包括准确度、精密度、线性、检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantification,LOQ)、稳定性。结果rhEPO N糖各峰簇清晰可见;3个实验室不同浓度供试品各峰簇面积百分比均在84%~116%之间,方法准确度良好;各峰簇最高峰保留时间RSD均<5%,面积百分比RSD均<10%,方法重现性良好;蛋白浓度在1.0~3.0 mg/mL范围内,线性良好,R2>0.98;LOD约为0.10 mg/mL,LOQ约为0.32 mg/mL;在2~8℃下存放48 h,稳定性良好。结论建立了rhEPO N糖图谱IC法,联合验证指标良好,为rhEPO质量标准的提高提供了技术支持。
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关键词
人促红细胞生成素
N糖图谱
离子色谱
联合验证
原文传递
人红细胞生成素单克隆抗体的制备研究
3
作者
朱绿松
李文辉
梁秋波
《黑龙江医药》
CAS
2000年第1期21-22,共2页
将杂交瘤细胞接种子BAIB/C小鼠腹腔内,令细胞增殖,抽取接种杂交瘤细胞后两周左右的腹水,采用硫酸胺盐析,饱和度为50％,然后上DEAE-Cellulose DE52柱,NaCl浓度梯度洗脱,所得单克隆抗体纯度达90％,可用于免疫亲和柱的制备。
关键词
人经细胞生成素
单克隆抗体
制备
hepo
下载PDF
职称材料
题名
人红细胞生成素单克隆抗体的制备、鉴定及应用研究
被引量：
3
1
作者
施水良
曾怡
金以丰
谢弘
机构
南京大学生物化学系
中国科学院上海细胞生物学研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第1期54-59,共6页
文摘
用rhEPO作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,用碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEPO,包被PVC板,对杂交瘤用ELISA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG_1、IgG_(2b),轻链均为k链,K_d分别为5.53×10^(-10)mol/L和1.34×10^(-10)mol/L。用Western blot方法证明两者对hEPO具有高度的专一性,能特异地识别rhEPO和尿源hEPO。所制备单抗可作为亲和层析的配体,用于再生障碍性贫血病人尿中EPO及哺乳类工程细胞所表达的hEPO的分离、纯化,并可用于hEPO的定量检测。
关键词
人红细胞生成素
单克隆抗体
制备
鉴定
Keywords
Monoclonal
antibody
(Mab),
human
erythropoietin
(
hepo
)
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
人促红细胞生成素N糖图谱离子色谱分析方法的联合验证
2
作者
史新昌
于雷
秦玺
安怡方
李响
周勇
机构
中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024年第9期1096-1101,1108,共7页
基金
国家质量基础设施体系(2021YFF0600804)。
文摘
目的对离子色谱(ion chromatography,IC)联用脉冲安培检测器(pulsed amperometric detector,PAD)分析重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)N糖图谱方法进行多实验室联合验证。方法将rhEPO供试品用25 mmol/L磷酸盐缓冲液超滤置换缓冲体系,调整浓度至2 mg/mL,用糖苷酶F酶切后,经乙醇沉淀,取上清冷冻干燥,获得rhEPO游离N糖。色谱条件:分析柱为Dionex CarboPac PA200,保护柱为Dionex CarboPac PA200;流动相A为50 mmol/L氢氧化钠溶液,流动相B为200 mmol/L氢氧化钠溶液,流动相C为250 mmol/L乙酸钠溶液;进样体积为25μL;流速为0.5 mL/min;柱温为30℃;梯度洗脱;使用仪器自带分析软件进行峰簇最高峰保留时间和峰簇面积百分比积分。选择3家实验室(L1~L3)进行方法的联合验证,包括准确度、精密度、线性、检出限(limit of detection,LOD)和定量限(limit of quantification,LOQ)、稳定性。结果rhEPO N糖各峰簇清晰可见;3个实验室不同浓度供试品各峰簇面积百分比均在84%~116%之间,方法准确度良好;各峰簇最高峰保留时间RSD均<5%,面积百分比RSD均<10%,方法重现性良好;蛋白浓度在1.0~3.0 mg/mL范围内,线性良好,R2>0.98;LOD约为0.10 mg/mL,LOQ约为0.32 mg/mL;在2~8℃下存放48 h,稳定性良好。结论建立了rhEPO N糖图谱IC法,联合验证指标良好,为rhEPO质量标准的提高提供了技术支持。
关键词
人促红细胞生成素
N糖图谱
离子色谱
联合验证
Keywords
human
erythropoietin
(
hepo
)
N-glycan
profile
Ion
chromatography(IC)
Interlaboratory
validation
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
人红细胞生成素单克隆抗体的制备研究
3
作者
朱绿松
李文辉
梁秋波
机构
哈尔滨医药工程技术研究开发中心
出处
《黑龙江医药》
CAS
2000年第1期21-22,共2页
文摘
将杂交瘤细胞接种子BAIB/C小鼠腹腔内,令细胞增殖,抽取接种杂交瘤细胞后两周左右的腹水,采用硫酸胺盐析,饱和度为50％,然后上DEAE-Cellulose DE52柱,NaCl浓度梯度洗脱,所得单克隆抗体纯度达90％,可用于免疫亲和柱的制备。
关键词
人经细胞生成素
单克隆抗体
制备
hepo
Keywords
Monoclonal
antibody(Mab)
human
erythropoietin
(
hepo
)
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人红细胞生成素单克隆抗体的制备、鉴定及应用研究
施水良
曾怡
金以丰
谢弘
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996
3
下载PDF
职称材料
2
人促红细胞生成素N糖图谱离子色谱分析方法的联合验证
史新昌
于雷
秦玺
安怡方
李响
周勇
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2024
0
原文传递
3
人红细胞生成素单克隆抗体的制备研究
朱绿松
李文辉
梁秋波
《黑龙江医药》
CAS
2000
0
下载PDF
职称材料
已选择
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