先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A定点突变及蛋白表达研究 被引量：2

1

作者 史瑞明 强华 +2 位作者 张艳敏 马爱群 高洁 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期223-226,共4页

目的构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法采用一步法构建SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型... 目的构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法采用一步法构建SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型和突变型质粒分别转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜观察钠通道蛋白在HEK293细胞的表达与定位,Western blot检测其蛋白表达。结果经电泳及DNA测序显示突变型1507-1509位点成功缺失9个碱基,野生型与突变型均在HEK293细胞膜上表达,且表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建钠通道基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多

关键词 先天性QT间期延长综合征 SCN5A基因 定点突变 真核表达载体 人胚肾293细胞

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汉坦病毒感染人胚肾细胞诱导凋亡的研究 被引量：2

2

作者 高巍 王晓燕 +1 位作者 刘伟 康鹏 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第22期4671-4673,共3页

目的探讨汉坦病毒在人胚肾细胞(HEK-293)内的增殖及诱导凋亡的机制。方法采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原,用westen blot方法测定汉坦病毒作用后bcl-2、bax、Cyt-c及caspase-3的表达。结果汉坦病毒感染细胞后用间接免疫荧... 目的探讨汉坦病毒在人胚肾细胞(HEK-293)内的增殖及诱导凋亡的机制。方法采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原,用westen blot方法测定汉坦病毒作用后bcl-2、bax、Cyt-c及caspase-3的表达。结果汉坦病毒感染细胞后用间接免疫荧光法可在感染的HEK-293胞浆内检测出汉坦病毒抗原;Western blot-ting结果显示,随着汉坦病毒浓度增加,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Cyt-c蛋白及caspase-3酶原活化片段表达升高。结论汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,可能通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 汉坦病毒 人胚肾细胞 细胞凋亡

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凋亡相关蛋白在汉坦病毒诱导HEK-293细胞凋亡过程中的表达及意义 被引量：1

3

作者 高巍 王晓燕 +1 位作者 刘伟 康鹏 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第2期111-114,共4页

目的探讨Bcl-2、Bax及Caspase-3在汉坦病毒诱导人胚肾细胞(HEK-293)凋亡过程中的变化,为研究汉坦病毒诱导人胚肾细胞损伤的机制提供参考。方法体外培养HEK-293细胞,分为正常对照组和汉坦病毒处理的感染组,采用间接免疫荧光法检测HEK-29... 目的探讨Bcl-2、Bax及Caspase-3在汉坦病毒诱导人胚肾细胞(HEK-293)凋亡过程中的变化,为研究汉坦病毒诱导人胚肾细胞损伤的机制提供参考。方法体外培养HEK-293细胞,分为正常对照组和汉坦病毒处理的感染组,采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原;用Westen blot方法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平。结果汉坦病毒感染HEK-293细胞1 d后即开始出现荧光阳性细胞,随着时间延长,荧光强度逐渐增强,细胞胞浆内出现大量片状或颗粒性的黄绿色荧光;Western blot结果显示,与对照组比较,汉坦病毒感染1 d后Bcl-2、Bax蛋白及Caspase-3酶原活化片段表达量未见明显变化(P>0.05),感染3 d和5 d后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Caspase-3酶原活化片段表达升高(P<0.05)。结论汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,其损伤机制可能与Bcl-2表达减少和Bax蛋白表达上调,通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡有关。 展开更多

关键词 汉坦病毒 HEK-293细胞 细胞凋亡 Bcl-2 BAX CASPASE-3

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溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能

4

作者 范超 傅鸣宇 +1 位作者 肖中举 唐杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期801-806,811,共7页

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体-绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技... 目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体-绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细胞膜上表达,并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并具有一定的离子选择性。结论 SLC26A转运体家族能够在HEK-293细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法,为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。 展开更多

关键词 人胚肾293细胞 溶质转运体26A家族 全细胞膜片钳 非线性膜电容

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线性化聚乙烯亚胺介导的高效瞬时转染条件的优化

5

作者 陈玥如 赵忆宁 +3 位作者 唐悦 王婉 傅生芳 李雄雄 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第3期156-160,共5页

目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)介导的高效瞬时转染条件,提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率.方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluore... 目的优化线性化聚乙烯亚胺(polyethylenimine linear,PEI)介导的高效瞬时转染条件,提高重组蛋白在人胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)293F悬浮细胞中的瞬时表达效率.方法构建和鉴定重组质粒增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)/pcDNA3.1+,通过瞬时转染的方式将质粒转入HEK293F细胞中进行表达.对转染试剂PEI与重组质粒的比例以及收获时间进行优化,通过倒置显微镜观察、SDS-PAGE和流式细胞仪检测目标蛋白的表达量,确定目标蛋白在HEK293F细胞中的最佳表达条件.采用优化后的条件在T500摇瓶(工作体积120 ml)中进行扩大表达.结果构建的重组质粒EGFP/pcDNA3.1+序列正确,在重组质粒浓度为3.0μg/ml、DNA∶PEI为2∶1、转染后24 h添加终浓度为2 mmol/L的丙戊酸钠、转染后4 d收获条件下,目的蛋白的表达量最高.此条件也适用于放大培养体积至T500的瞬时转染.结论优化了一种快速有效的基于PEI的瞬时转染方法来高水平表达重组蛋白. 展开更多

关键词 线性化聚乙烯亚胺 瞬时转染 人胚胎肾293F细胞 增强型绿色荧光蛋白

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多质粒共转染建立Cav1.3 L-型钙通道的研究模型 被引量：2

6

作者 强华 魏峰 +3 位作者 张爱峰 史瑞明 孙超峰 马爱群 《陕西医学杂志》 CAS 2009年第6期643-644,647,共3页

目的:提高多质粒转染效率,建立钙离子通道的研究模型。方法:在传统的脂质体转染过程中,通过不断调整细胞密度、转染质粒DNA的量,将含Cav1.3L-型钙通道相关亚基的质粒DNA转染至HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术检测Cav1.3L-型钙通道的... 目的:提高多质粒转染效率,建立钙离子通道的研究模型。方法:在传统的脂质体转染过程中,通过不断调整细胞密度、转染质粒DNA的量,将含Cav1.3L-型钙通道相关亚基的质粒DNA转染至HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术检测Cav1.3L-型钙通道的电流表达。结果:转染后的HEK293T细胞在荧光显微镜下可见明显的绿色荧光;全细胞膜片钳技术检测出Cav1.3 L-型钙通道电流的表达。结论:通过调整细胞密度和转染质粒DNA的量,可以提高脂质体介导多质粒共转染HEK293T细胞的效率,建立钙离子通道的研究模型。 展开更多

关键词 钙通道 L型 基因 脂质体 @人胚胎肾 293T细胞

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中国大鲵虹彩病毒对293T细胞系的感染性研究 被引量：1

7

作者 罗振寰 李蔚 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期291-299,共9页

中国大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)属于虹彩病毒科蛙病毒属,对两栖类具有强致病率,给两栖类养殖业带来了严重的经济损失。本研究将人胚肾细胞系(293T)作为CGSIV的潜在宿主细胞系,通过验证26℃下CGSIV对293T... 中国大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,CGSIV)属于虹彩病毒科蛙病毒属,对两栖类具有强致病率,给两栖类养殖业带来了严重的经济损失。本研究将人胚肾细胞系(293T)作为CGSIV的潜在宿主细胞系,通过验证26℃下CGSIV对293T细胞的感染性及病毒特性,为将293T发展成为CGSIV病毒研究的细胞系模型打下基础。利用PCR、Western Blot和透射电镜等技术对CGSIV感染293T细胞及其在293T细胞中的基因表达、病毒复制及子代病毒等进行验证;并通过半数组织培养感染剂量(Median tissue culture infectious dose,TCID50)法和绝对定量qPCR检测CGSIV在293T中的病毒滴度及病毒含量。结果表明:293T在接种CGSIV 72 h时出现了典型的病变特征;成功在受感染的293T细胞内检测到CGSIV基因组及病毒相关基因的转录和翻译,表明CGSIV能够成功感染293T细胞并在细胞内顺利完成病毒相关基因的表达;通过透射电镜观察到293T细胞内呈晶格状排列且横切面为正六边形的病毒粒子,病毒感染实验显示其病毒粒子能够感染鲤鱼上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum cyprinid,EPC),表明CGSIV能够在293T细胞内顺利完成其生活周期,产生具感染力的完整子代病毒;CGSIV在293T细胞内的病毒滴度约为2.26×105TCID50/mL;CGSIV在293T细胞中的复制时序表明病毒在感染24 h内复制缓慢,36 h后进入复制高峰期并延续于整个感染周期内。综上,在26℃下,CGSIV能够感染293T细胞系,并在细胞内完成其生活周期,产生具有感染力的完整子代病毒;另外,CGSIV对293T细胞的感染与鱼类细胞相比,其感染病变时间也有所延长。本研究为发展293T细胞作为CGSIV病毒研究的细胞系新模型奠定了基础。 展开更多

关键词 中国大鲵虹彩病毒(CGSIV) 人胚肾细胞系(293T) 病毒感染 病毒生活周期 细胞系模型

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稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原CTLA-4的293T细胞株的建立 被引量：1

8

作者 茹晓荣 刘永兰 向安 《医学分子生物学杂志》 CAS 2014年第5期252-256,共5页

目的：构建稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxicTlymphocyteantigen-4，CTLA-4）的293T细胞株。方法首先从人外周血获取PBMC加以T细胞活化；PCR扩增CTLA-4转录本，连接pUCm-T质粒引入HindⅢ和EcoRⅠ双酶切位点后转入真核细... 目的：构建稳定表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（cytotoxicTlymphocyteantigen-4，CTLA-4）的293T细胞株。方法首先从人外周血获取PBMC加以T细胞活化；PCR扩增CTLA-4转录本，连接pUCm-T质粒引入HindⅢ和EcoRⅠ双酶切位点后转入真核细胞表达质粒pcDNA3．1；重组质粒pcDNA3．1-CTLA-4经脂质体转染293T细胞，以抗生素G418筛选表达CTLA-4的293T细胞；定量PCR、免疫荧光分别检测293T细胞CTLA-4表达与细胞定位。结果血样来源T细胞经活化后表达CTLA-4转录本。HindⅢ和EcoRⅠ双酶切证实重组质粒内CTLA-4插入序列正确；RT-PCR及免疫荧光检测证实293T细胞能够稳定表达目的蛋白CTLA-4，并定位于细胞膜表面。结论成功构建的pcDNA3．1-CTLA-4重组真核表达载体，在293T细胞膜表面实现了稳定表达，为进行相关生物学理论与应用研究打下基础。 展开更多

关键词 T淋巴细胞相关抗原-4 293T细胞 基因克隆 真核表达

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脂质体介导hHCN_2基因转染HEK293细胞的效率研究 被引量：1

9

作者 贾建博 方易冰 +3 位作者 卞铁荣 陈枫 于风旭 廖斌 《泸州医学院学报》 2012年第3期248-250,共3页

目的:脂质体介导重组起搏基因pIRES2-EGFP-HCN2转染HEK293细胞,观察转染效率,探讨其构建生物起搏器的可行性。方法:对含hHCN2cDNA的PTR载体进行转化和扩增,将所得hHCN2基因定向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,双酶切来鉴定克隆的正确... 目的:脂质体介导重组起搏基因pIRES2-EGFP-HCN2转染HEK293细胞,观察转染效率,探讨其构建生物起搏器的可行性。方法:对含hHCN2cDNA的PTR载体进行转化和扩增,将所得hHCN2基因定向克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,双酶切来鉴定克隆的正确性。将重组质粒用脂质体转染HEK293,荧光显微镜观察EGFP的表达并计算转染效率。结果:构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2。荧光显微镜下可见转染后的HEK293呈绿色荧光,其转染效率可达90%以上。结论:成功构建了重组质粒pIRES2-EGFP-HCN2,并用脂质体转染的方法导入HEK293细胞,为生物起搏的研究奠定实验基础。 展开更多

关键词 脂质体 hHCN2 HEK293 基因转染

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早老素通过下调CDK4使HEK293T细胞周期阻滞

10

作者 宋浩昌 余辉 +1 位作者 刘新光 陈维春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期96-102,共7页

早老素(progerin)的累积导致儿童早老症(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)的发生,并与正常衰老相关。早老素能使细胞内稳态失衡但分子机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨早老素导入人胚胎肾293T细胞(human embryo kidney 29... 早老素(progerin)的累积导致儿童早老症(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)的发生,并与正常衰老相关。早老素能使细胞内稳态失衡但分子机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨早老素导入人胚胎肾293T细胞(human embryo kidney 293T cell,HEK293T)后细胞增殖、周期变化的分子机制。形态学观察发现过表达早老素的HEK293T细胞密度下降,(57±2.47)%细胞核形态皱缩。细胞增殖和周期实验证明早老素使细胞增殖减慢,发生G1/S期阻滞,G1细胞从(42.3±1.31)%升至(47.2±1.26)%,而S期细胞从(43.1±1.36)%降至(38.5±1.42)%。Western印迹结果显示早老素的高表达引起p21蛋白表达上调(103.2±1.49)%,CDK4下调(63±1.52)%,而p53、ATM、Cyclin E1以及p16等蛋白质水平均不变;HEK293T细胞中早老素的过表达导致γ-H2AX水平下调(53±1.36)%,H2O2处理后变化趋势不变。我们的研究结果提示,早老素通过上调p21和下调CDK4使细胞发生周期阻滞,不能增加HEK293T细胞的损伤及衰老。 展开更多

关键词 早老症 早老素 人胚胎肾293T细胞 细胞周期阻滞 衰老

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脂质体介导hHCN2基因转染HEK293细胞

11

作者 赵欣 杨向军 +5 位作者 白霞 周玲 李红霞 程绪杰 蒋彬 蒋文平 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期451-452,共2页

目的建立一种研究离子通道的有效模型。方法采用Lipofacta mine2000脂质体将人的超极化激活的环核苷酸门控(HCN)基因转染人胚胎肾(HEK)293细胞,利用全细胞膜片钳技术检测克隆人HCN2基因的表达。结果pcDNA3-hHCN2真核表达载体转染HEK293... 目的建立一种研究离子通道的有效模型。方法采用Lipofacta mine2000脂质体将人的超极化激活的环核苷酸门控(HCN)基因转染人胚胎肾(HEK)293细胞,利用全细胞膜片钳技术检测克隆人HCN2基因的表达。结果pcDNA3-hHCN2真核表达载体转染HEK293细胞3d后,全细胞膜片钳技术记录到克隆人HCN2基因编码的通道电流。结论全细胞膜片钳技术稳定、可靠,可为开展克隆离子通道结构和功能关系研究提供基础。 展开更多

关键词 人胚胎肾293细胞 脂质体 基因

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人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控

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作者 柳满 任悦 +2 位作者 高玉风 王芳 余佳 《基础医学与临床》 2021年第5期630-635,共6页

目的探讨人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控。方法通过Polysome profiling结合Western blot实验检测并验证HEK293细胞中mRNA的翻译活性;通过针对RPL10A和RPS17两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀、建库测序(RIP-seq)及生物信息学分析,获得参... 目的探讨人胚胎肾细胞系HEK293中的翻译调控。方法通过Polysome profiling结合Western blot实验检测并验证HEK293细胞中mRNA的翻译活性;通过针对RPL10A和RPS17两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀、建库测序(RIP-seq)及生物信息学分析,获得参与HEK293细胞蛋白质合成调控的相关分子。结果在两种核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀实验富集的分子中共有129种基因,其中93.8%为蛋白质编码基因;且功能与RNA剪接、分解代谢、MAPK信号通路、染色体定位、RNA转运等相关。结论通过针对核糖体蛋白的RNA免疫共沉淀可以获得HEK293细胞中活跃翻译的mRNA。 展开更多

关键词 人胚胎肾细胞系293 Polysome profiling RNA结合蛋白 免疫共沉淀

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