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Hsa-miR-218靶向调控LASP1对宫颈癌HeLa细胞生长的影响 被引量：9
1
作者 邱瑜 黄建平 +3 位作者 周勤仙 王欢 石回刚 何金花 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1572-1577,共6页
目的:探讨人微小RNA-218(Homo sapiens microRNA-218,hsa-miR-218)对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法:构建hsa-miR-218的重组慢病毒表达载体pmiR-218,并将pmiR-218感染至HeLa细胞,台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化,WST-8法检... 目的:探讨人微小RNA-218(Homo sapiens microRNA-218,hsa-miR-218)对宫颈癌HeLa细胞生长的影响及分子机制。方法:构建hsa-miR-218的重组慢病毒表达载体pmiR-218,并将pmiR-218感染至HeLa细胞,台盼蓝拒染法检测细胞数量的变化,WST-8法检测细胞活力,构建萤光素酶报告基因载体验证miR-218与LIM和SH3蛋白1(LASP1)的相互结合作用,real-time PCR检测LASP1的mRNA相对表达水平,Western blot检测LASP1蛋白的表达水平。结果:经DNA测序证实与设计完全一致,测序结果显示成功构建了重组慢病毒表达载体pmiR-218。pmiR-218转染HeLa细胞72 h后HeLa细胞存活数量为176±9,对HeLa细胞活力的抑制率具有时间效应关系,较空白对照组比较,差异显著(P<0.05);萤光素酶活性结果显示,克隆LASP1-3’UTR的质粒与miR-218 mimics共转染293T细胞,引起萤光素酶活性的减低;real-time PCR结果显示转染pmiR-218后,miR-218表达水平增加;过表达miR-128能下调LASP1 mRNA及蛋白的相对表达水平,与空白对照组及阴性对照组比较,差异显著(P<0.01)。结论:pmiR-218有效抑制HeLa细胞的生长,并具有时间-效应关系,其机制可能是miR-218通过靶向结合LASP1的3’UTR,从而下调其在HeLa细胞的表达有关。 展开更多
关键词 人微小RNA-218 LIM和SH3蛋白1 宫颈癌 HeLa细胞
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hsa—miR-218下调Survivin表达影响鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡 被引量：2
2
作者 农朝赞 黄之虎 +3 位作者 韦士喻 郭灵霄 李育敏 杨林杰 《医学分子生物学杂志》 CAS 2014年第1期32-36,共5页
目的研究hsa-miR-218对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡的影响，探讨其作用机制。方法构建hsa-miR-218的真核表达载体（pmiR-218），利用LipofectamineTM2000将PmiR-218转染CNE-2Z细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测PmiR-218对CNE-2Z细胞... 目的研究hsa-miR-218对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡的影响，探讨其作用机制。方法构建hsa-miR-218的真核表达载体（pmiR-218），利用LipofectamineTM2000将PmiR-218转染CNE-2Z细胞，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测PmiR-218对CNE-2Z细胞增殖的影响；AnnexinV／PI双染流式细胞仪检测，miR-218对CNE-2Z细胞凋亡的影响；Western印迹检测细胞内Survivin蛋白表达水平。结果成功构建hsa-miR-218的真核表达载体，miR-218。与随机对照组相比，转染PmiR-218的CNE-2Z细胞增殖受到明显抑制（P〈0．05），细胞早期凋亡显著增加（P〈0．05）。与随机对照组相比，PmiR-218抑制细胞内Survivin蛋白的表达。结论，miR-218可抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用机制与下调Survivin基因表达有关，提示hsa-miR-218在鼻咽癌的发生发展中扮演着肿瘤抑制基因的作用，可能是鼻咽癌治疗的新靶点。 展开更多
关键词 hsa-mir-218 SURVIVIN 鼻咽癌 CNE-2Z细胞 增殖 凋亡
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