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荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞分离培养及冷冻保存方法研究 被引量：11
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作者 王亮 刘婷婷 +3 位作者 彭涛 朱海 汪汉卿 曹旭 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第5期9-12,共4页
试验对荷斯坦奶牛耳组织成纤雏细胞的分离、体外培养及5种冷冻保存方法进行了研究。结果表明：用DMEM／F12＋20％胎牛血清＋100IU／mL双抗的完全培养液进行组织块培养，能获得良好的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞原代培养物；成纤维细胞... 试验对荷斯坦奶牛耳组织成纤雏细胞的分离、体外培养及5种冷冻保存方法进行了研究。结果表明：用DMEM／F12＋20％胎牛血清＋100IU／mL双抗的完全培养液进行组织块培养，能获得良好的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞原代培养物；成纤维细胞混合培养物经Trypsin-EDTA（0．25％Trypsin，1mmol／LEDTA．4Na）消化所收集到的细胞主要为成纤维细胞，经2—3代传代，可得到纯化的荷斯坦奶牛耳组织成纤维细胞。纯化培养的成纤维细胞在冷冻保护剂和血清成分相同的每件下，选用5种不同的冷冻保存方法进行冷冻保存，其中使用70％细胞悬液＋20％胎牛血清＋10％DMSO的冷冻保存悬液，先在4℃预冷平衡0.5h，接着在液氮罐口的气态氮中悬挂4h，然后沉入液氮的方法冻存的细胞，解冻后，经台盼蓝染色后进行细胞活力分析，活细胞率为86．68％；培养48h后细胞贴壁率为86．40％，明显高于其他几种方法。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 成纤维细胞 体外培养 冷冻保存 活细胞率 细胞贴壁率
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