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HRM法检测结直肠癌组织KRAS基因密码子12和13点突变 被引量：8
1
作者 陈志红 郭爱林 +7 位作者 安社娟 郑有为 马冬 苏健 谢至 黄迎 陈世良 吴一龙 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期209-212,共4页
目的建立HRM法检测大肠癌患者肿瘤组织KRAS（v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog）基因突变的方法。方法采用HRM法对含不同比例KRAS基因突变型质粒的系列混合样本进行检测，以评价其灵敏度。应用HRM法检测60份大肠... 目的建立HRM法检测大肠癌患者肿瘤组织KRAS（v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog）基因突变的方法。方法采用HRM法对含不同比例KRAS基因突变型质粒的系列混合样本进行检测，以评价其灵敏度。应用HRM法检测60份大肠癌患者新鲜肿瘤组织KRAS基因密码子12和13的突变状况，并与直接测序法的结果进行比较分析。结果HRM法只需在PCR结束后直接运行高分辨熔解，即可获得检测结果。HRM法可检出系列混合样本中突变型质粒比例为10％的突变，其检测灵敏度达10％。HRM法从60份大肠癌患者组织标本中，检出17份KRAS基因密码子12或13突变（28．3％）；直接测序法检出15份（25．0％）突变，2份未检出KRAS基因突变。HRM法检测的敏感度为100％（15／15），特异度为96％（43／45）。结论HRM法在筛选大肠癌标本的KRAS基因突变类型时，具有操作简便、快速、灵敏，单管避免污染等优点，完全符合临床个体化治疗的要求，值得推广。 展开更多
关键词 高分辨率熔解法 KRAS基因 结直肠肿瘤
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EGFR突变对非小细胞肺癌预后的影响 被引量：3
2
作者 冒学莲 杨翊柠 +4 位作者 汤珣 竺明晨 王承霞 陈艳 严枫 《中国肿瘤外科杂志》 CAS 2020年第3期192-197,共6页
目的探讨EGFR基因突变对非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床特征,预后的价值,揭示总生存期(OS)≥3年的生存特点。方法回顾性分析2013年1月1日至2018年6月30日南京医科大学附属肿瘤医院接受个体化治疗的349例NSCLC患者临床资料。对应收集石蜡... 目的探讨EGFR基因突变对非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床特征,预后的价值,揭示总生存期(OS)≥3年的生存特点。方法回顾性分析2013年1月1日至2018年6月30日南京医科大学附属肿瘤医院接受个体化治疗的349例NSCLC患者临床资料。对应收集石蜡包埋组织标本,采用HRM法,检测组织中EGFR基因第18、19、20、21外显子的突变状态,分析EGFR基因突变与患者临床病理参数的相关性。Kaplan-Meier方法和χ2分析随访资料完整的249例患者EGFR基因突变对生存的影响,揭示OS≥3年生存影响因素。结果在349例NSCLC肺癌患者中,EGFR基因突变率为50.4%,EGFR基因主要高突变人群是女性(62.2%)和腺癌患者(52.0%),<60岁易发生19突变(28.9%),≥60岁(32.0%)和女性(37.8%)易发生21突变,差异具有统计学意义(P<0.05)。EGFR18、20、双突变和临床特征之间无统计学意义(P>0.05)。截至2018年12月15日,249例随访完整的患者中,中位生存时间为23个月。EGFR基因的总突变和21突变,与野生型相比较,能显著提高无进展生存期(PFS)和OS,差异具有统计学意义(P<0.05)。EGFR18、19、20、双突变的PFS生存率,与野生型相比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。OS≥3年和OS≤1年的患者在性别、TNM分期、淋巴结转移、EGFR总突变率、21的突变率及靶向治疗率方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论EGFR基因的总突变和21突变的患者均能明显延长生存期。 展开更多
关键词 基因突变 非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 HRM 生存分析
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基于法布里-珀罗微腔激光的高分辨率熔解技术研究 被引量：3
3
作者 梁希月 侯梦迪 +2 位作者 张婷婷 邱诚玉 王文杰 《激光与光电子学进展》 CSCD 北大核心 2018年第10期270-275,共6页
基于所制备的高品质法布里-珀罗(F-P)光学微腔,研究了一种基于激光信号的腔内高灵敏度熔解(HRM)曲线检测方法,即将F-P光学微腔作为微激光腔,将嵌入式饱和染料作为增益介质,以产生的激光信号作为检测信号,通过温度扫描,实现了对碱基错配... 基于所制备的高品质法布里-珀罗(F-P)光学微腔,研究了一种基于激光信号的腔内高灵敏度熔解(HRM)曲线检测方法,即将F-P光学微腔作为微激光腔,将嵌入式饱和染料作为增益介质,以产生的激光信号作为检测信号,通过温度扫描,实现了对碱基错配DNA分子的高灵敏度检测与筛查。分别研究了25个碱基对和50个碱基对的目标DNA及碱基错配DNA的熔解曲线,理论及实验结果表明:基于激光信号的HRM检测技术具有低的熔解温度和高的信噪比。 展开更多
关键词 生物光学 高分辨熔解技术 光微流激光 法布里-珀罗光学微腔
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高分辨率熔解曲线法检测JAK2基因V617F突变及其应用 被引量：1
4
作者 郑卫东 方伟 +3 位作者 刘艳辉 罗盈 杜欣 陈志红 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期602-604,共3页
目的探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用。方法以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条... 目的探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用。方法以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条件,分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测,评价2种检测方法结果的一致性。结果 HRM法可检出系列混合样本中5%的突变型等位基因突变,且重复性较高。以测序法为金标准,HRM法的敏感性和特异性均为100%,两种方法结果一致。结论 HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测,具有较高的敏感性和特异性,可用于JAK2基因V617F突变的临床检测。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线法 JAK2基因 V617F突变 骨髓增殖性肿瘤
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高分辨率熔解曲线法在BIM基因2,903bp片段插入/缺失检测中的应用 被引量：2
5
作者 夏金晶 白浩 +4 位作者 熊丽纹 李蓉 颜波 邵敏华 韩宝惠 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期238-242,共5页
背景与目的 BIM基因编码的蛋白属于BCL2蛋白家族的成员,作为凋亡调控因子参与多种细胞活动。BIM基因上2,903bp的插入缺失片段与非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向用药的获得性耐药相关。建立并优化HRM方法有助于快速、准确地检测BIM基因2,903 b... 背景与目的 BIM基因编码的蛋白属于BCL2蛋白家族的成员,作为凋亡调控因子参与多种细胞活动。BIM基因上2,903bp的插入缺失片段与非小细胞肺癌EGFR-TKI靶向用药的获得性耐药相关。建立并优化HRM方法有助于快速、准确地检测BIM基因2,903 bp片段的缺失,为临床工作提供指导性的意见。本研究建立与稳定了HRM的检测方法,并在30例肺癌样本以及30例正常对照样本中检测BIM基因缺失情况。方法设计、合成针对BIM基因片段缺失的引物,优化高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析方法。并选取部分样本通过普通PCR方法和直接测序法检测BIM基因缺失情况。野生型模板扩增产物其解链温度要高于缺失型产物的解链温度。野生型和缺失型产物的熔解曲线可见明显差异,相应的Tm值相差约2.5 oC。结果经过HRM基因突变分析方法,在30例肺癌样本中检测到1例为BIM基因纯合缺失型,7例为杂合缺失型,22例为野生型。在30例正常对照样本中检测,2例为杂合缺失型,28例为野生型。结论本研究建立的对BIM基因片段缺失的高分辨率熔解曲线法是一种,灵敏、准确、快速、高通量的方法。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线法 BIM基因 肺肿瘤
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检测AKT1基因E17K突变的高分辨率熔解曲线法(HRM) 被引量：1
6
作者 任浩洋 《科学技术与工程》 2010年第26期6405-6408,共4页
建立并优化HRM方法检测AKT1基因的E17K(49G>A)突变,并在85例非小细胞肺癌中应用该法检测AKT1基因的E17K突变。设计、合成针对AKT1基因的E17K突变的引物、探针,优化不对称PCR条件及高分辨率熔解曲线(HRM)基因突变分析方法。对85例非... 建立并优化HRM方法检测AKT1基因的E17K(49G>A)突变,并在85例非小细胞肺癌中应用该法检测AKT1基因的E17K突变。设计、合成针对AKT1基因的E17K突变的引物、探针,优化不对称PCR条件及高分辨率熔解曲线(HRM)基因突变分析方法。对85例非小细胞肺癌标本提取的基因组DNA,应用HRM基因突变分析方法和直接测序的方法检测了AKT1基因的E17K突变情况。经优化后,设计的引物在不对称PCR反应条件下可扩增出良好的条带。检测探针与野生型模板的扩增产物杂交后,其解链温度要高于与突变型产物杂交的解链温度。野生型和突变型的质粒模板所产生的熔解曲线可见显著差异,相应的Tm值相差约3.5℃。经HRM基因突变分析方法和直接测序法检测,在85例非小细胞肺癌标本检测到1例AKT1基因的E17K位点为杂合突变型,其余均为野生型。本研究建立的对AKT1E47K突变检测的HRM方法是一种灵敏、准确、快速的方法。另外,本研究仅在非小细胞肺癌患者中发现频率极低的AKT1E47K突变。 展开更多
关键词 高分辨率熔解曲线法 AKT1基因 非小细胞肺癌
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高分辨率熔解曲线检测大肠癌KRAS基因突变 被引量：1
7
作者 张彩凤 夏永华 +1 位作者 李贞娟 韩宇 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期29-33,共5页
目的研究高分辨率熔解曲线(HR M)检测大肠癌KR AS突变的准确性及敏感性。方法采用HR M检测大肠癌KR AS基因外显子2和3突变情况并与直接测序比较,研究HR M准确性。用KR AS野生型样本系列稀释KR AS外显子2第12个密码子突变型(0,1%,5%,10%,... 目的研究高分辨率熔解曲线(HR M)检测大肠癌KR AS突变的准确性及敏感性。方法采用HR M检测大肠癌KR AS基因外显子2和3突变情况并与直接测序比较,研究HR M准确性。用KR AS野生型样本系列稀释KR AS外显子2第12个密码子突变型(0,1%,5%,10%,15%),采用HR M检测,评价其灵敏度。结果81例大肠癌肿瘤组织石蜡标本,检测到11例KR AS外显子2突变(13.58%),外显子3无突变。162例正常组织标本未检测到突变。HRM检测与测序结果一致率100%。HRM可检测到1%KRAS外显子2第12个密码子突变型。结论 HRM可以准确定性的检测KRAS基因突变分型,灵敏度达1%。 展开更多
关键词 高分辨率熔解法 KRAS基因 大肠癌 准确性 灵敏度
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