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切胶免疫制备腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体 被引量：12
1
作者 姜静 孙其飞 +6 位作者 陈勇 高媛 柳晓兰 高建恩 朱红 孙启鸿 王松灵 《北京口腔医学》 CAS 2007年第5期254-256,共3页
目的通过切胶免疫制备人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备提供抗原解决方案。方法将腮腺液经超滤法浓缩蛋白后,进行SDS-PAGE分析,切取分子量约为50-65kDa的高丰度蛋白条带,研磨后注射新西兰大耳白兔... 目的通过切胶免疫制备人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备提供抗原解决方案。方法将腮腺液经超滤法浓缩蛋白后,进行SDS-PAGE分析,切取分子量约为50-65kDa的高丰度蛋白条带,研磨后注射新西兰大耳白兔诱导产生免疫应答并制备兔抗人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,并应用蛋白免疫印记(Westernblot)等方法进行抗体鉴定。结果成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体。结论成功制备和鉴定了人腮腺液高丰度蛋白多克隆抗体,为下一步腮腺液高丰度蛋白单克隆抗体制备及唾液蛋白质组学研究奠定基础。 展开更多
关键词 腮腺液 高丰度蛋白 多克隆抗体 唾液
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乙腈沉淀法去除人血清中高丰度蛋白的探索性研究 被引量：6
2
作者 覃健 胡天桥 +3 位作者 张志勇 何敏 韦霄 蒋智华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第5期963-964,共2页
目的:探索乙腈沉淀法去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法:应用不同体积的乙腈对血清样品进行处理,Tric ine-SDS-PAGE电泳检测去除高丰度蛋白的效果。结果:乙腈沉淀法能在去除血清高中丰度蛋白的同时收获更多的10 kD以下的小分子量蛋白,... 目的:探索乙腈沉淀法去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法:应用不同体积的乙腈对血清样品进行处理,Tric ine-SDS-PAGE电泳检测去除高丰度蛋白的效果。结果:乙腈沉淀法能在去除血清高中丰度蛋白的同时收获更多的10 kD以下的小分子量蛋白,2倍体积乙腈结合一定浓度的TFA能有效地去除血清高中丰度蛋白。结论:乙腈沉淀法能去除血清中高丰度蛋白,是一种分离血清部分小分子量蛋白质简便、经济、有效的前期处理方法。 展开更多
关键词 乙腈沉淀 高丰度蛋白
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甲醇沉淀法去除人血清高丰度蛋白质的实验研究 被引量：4
3
作者 曹璐颖 郑文杰 李克 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第11期1151-1154,共4页
目的常用人血清高丰度蛋白质(high abundant proteins,HAP)去除方法操作较繁且成本高,文中探索建立简便有效的甲醇沉淀法去除人血清HAP。方法用不同体积的甲醇处理血清样品,然后与原血清样品上样进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(s... 目的常用人血清高丰度蛋白质(high abundant proteins,HAP)去除方法操作较繁且成本高,文中探索建立简便有效的甲醇沉淀法去除人血清HAP。方法用不同体积的甲醇处理血清样品,然后与原血清样品上样进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析,并对去除HAP后的样品进行蛋白定量检测。结果 SDS-PAGE显示,经甲醇处理过的血清样品与原血清电泳结果相比,相对分子质量在50 000～80 000间的清蛋白等HAP被明显去除,血清清蛋白平均浓度显著降低,由(47.65±0.35)g/L下降至(1.16±0.08)g/L,去除率达97%以上,占血清总蛋白质比例由65.4%下降为49.3%,其差异具有统计学意义(P<0.01)。同时一些被HAP掩盖的低丰度蛋白质(low abundant proteins,LAP)有所显现和保留。结论甲醇沉淀法可简便有效地去除人血清中清蛋白等HAP,为进一步行血清蛋白质组学分析奠定基础。 展开更多
关键词 甲醇沉淀法 高丰度蛋白质 低丰度蛋白质 清蛋白去除
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乙腈、乙醇、色谱柱去除血清高丰度蛋白方法的比较 被引量：3
4
作者 李茵 廖明 +5 位作者 何晓 周怡 罗蓉 李洪涛 王云 何敏 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期976-980,共5页
目的比较乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法应用乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法对血清样品进行处理,Bis-Tris Mini Gels电泳和双向凝胶电泳检测去除高... 目的比较乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法应用乙腈沉淀法、乙醇沉淀法和多重亲和去除色谱柱Human 14法对血清样品进行处理,Bis-Tris Mini Gels电泳和双向凝胶电泳检测去除高丰度蛋白的效果。结果从一维胶电泳图灰度值分析,血清经过乙腈法、色谱柱法、乙醇法处理后,白蛋白条带灰度值由原血清的19分别变成157.2,40.8和8.2;从2-DE电泳图分析看出,多重亲和去除色谱柱Human 14法处理后的蛋白点数显著增多,比原血清增加了137个;乙腈法和乙醇法处理后虽然蛋白点减少了,却有低丰度蛋白质点显现出来。结论乙腈沉淀法能在去除血清中高丰度蛋白的同时收获更多的10kD以下的小分子量蛋白;乙醇沉淀法虽然能去除部分高丰度蛋白,但小分子量蛋白的收获量较少;而多重亲和去除色谱柱Human 14法不仅能有效地去除血清中高丰度蛋白的干扰,且保留了大量的小分子量蛋白。 展开更多
关键词 血清 高丰度蛋白
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两种去除血清高丰度蛋白方法的比较 被引量：3
5
作者 覃健 张志勇 +1 位作者 何敏 胡天桥 《预防医学情报杂志》 CAS 2010年第4期322-324,共3页
目的比较乙腈沉淀法和MERCK公司的血清白蛋白和IgG去除试剂盒去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法应用乙腈沉淀法和MERCK公司的血清白蛋白和IgG去除试剂盒对血清样品进行处理,Tricine-SDS-PAGE电泳和SELDI-TOF-MS检测去除高丰度蛋白的... 目的比较乙腈沉淀法和MERCK公司的血清白蛋白和IgG去除试剂盒去除人血清中高丰度蛋白的效果。方法应用乙腈沉淀法和MERCK公司的血清白蛋白和IgG去除试剂盒对血清样品进行处理,Tricine-SDS-PAGE电泳和SELDI-TOF-MS检测去除高丰度蛋白的效果。结果乙腈沉淀法能在去除血清高中丰度蛋白的同时收获更多的10kD以下的小分子量蛋白,MERCK公司的试剂盒也能有效地去除血清高中丰度蛋白,特异性较好。结论2种方法均能去除血清中高丰度蛋白,需根据研究目的选择适合的方法。 展开更多
关键词 高丰度蛋白 去除 比较
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离心超滤法去除血清大相对分子质量高丰度蛋白质的实验研究 被引量：2
6
作者 李克 朱慧 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第20期2359-2360,2363,共3页
目的建立离心超滤法去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质的实验方法,研究其去除效果及重复性。方法取血清与20%乙腈按1∶4(V/V)混合,将混合后的血清分别加入相对分子质量分离点(MWCO)为100×103、50×103、30×103及10... 目的建立离心超滤法去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质的实验方法,研究其去除效果及重复性。方法取血清与20%乙腈按1∶4(V/V)混合,将混合后的血清分别加入相对分子质量分离点(MWCO)为100×103、50×103、30×103及10×103超滤膜离心管中,离心15min(8000×g)。滤液真空冷冻干燥后,以超纯水按浓缩10倍复溶。分别应用Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳法和二元梯度高效液相色谱法(HPLC)分析比较血清中大相对分子质量高丰度蛋白质去除效果,考察经50×103超滤膜离心去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质后保留低丰度蛋白质的重复性。结果以选择MWCO为50×103和30×103较为适宜。电泳分离结果显示,经离心超滤后滤过液中大相对分子质量高丰度蛋白质,特别是清蛋白得到有效去除。HPLC检测结果显示,选用MWCO为50×103超滤膜分离后,血清低丰度蛋白质数量保留适中。重复性统计结果显示,小相对分子质量低丰度蛋白质相对保留时间和相对峰面积RSD值分别小于0.46%和5.56%。结论离心超滤法去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质步骤较为简便、重复性好,为进一步深入研究血清蛋白质组学奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白质组学 离心超滤法 高丰度蛋白质 低丰度蛋白质
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单克隆抗体制备的亲和填料在血浆高丰度蛋白分离中的应用 被引量：2
7
作者 王云丹 宁云山 +5 位作者 彭丹丹 李妍 方勤美 邓新宇 姜颖 李明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期71-77,共7页
分离去除高丰度蛋白成为血浆蛋白质组研究的关键问题之一。从已建株的17株抗人血浆白蛋白单克隆抗体库中选出一株合适抗体。该抗体用Protein G Sepharose 4B吸附,然后用交联剂DMP(庚二亚氨酸二甲酯二盐酸盐)使之与Protein G蛋白共价交... 分离去除高丰度蛋白成为血浆蛋白质组研究的关键问题之一。从已建株的17株抗人血浆白蛋白单克隆抗体库中选出一株合适抗体。该抗体用Protein G Sepharose 4B吸附,然后用交联剂DMP(庚二亚氨酸二甲酯二盐酸盐)使之与Protein G蛋白共价交联。实验结果显示600μl(结合1mg抗体)胶能分离10μl血浆中的白蛋白和球蛋白。填料重复使用10次后吸附能力无显著改变。对填料的吸附蛋白进行MALDI-TOF/TOF鉴定主要为白蛋白和球蛋白及其碎片,但发现吸附的蛋白有转铁蛋白,纤维蛋白原,抗胰蛋白酶,前脂蛋白,Vitamin D结合蛋白,Keratin 10和CD5抗原相似蛋白。实验结果表明该方法能在固定目的抗体的同时最大量地保持抗体活性,该方法有望在蛋白质组学研究的高丰度蛋白分离中得到广泛应用。 展开更多
关键词 单克隆抗体 定向固定 高丰度蛋白 血浆蛋白质组
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黄瓜叶片蛋白质双向电泳样品分级优化 被引量：9
8
作者 任丽萍 范海延 +3 位作者 王珊珊 郝宇涵 宫玉洁 朱延姝 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1706-1710,共5页
以‘津研4号’苗期叶片为材料,采用聚乙二醇(PEG)分级沉淀法对黄瓜叶片蛋白质样品进行分级分离,将黄瓜叶片中存在的高丰度蛋白1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶特异性地集中于一个组分之中,以提高对黄瓜叶片蛋白质双向电泳中低丰度蛋白质... 以‘津研4号’苗期叶片为材料,采用聚乙二醇(PEG)分级沉淀法对黄瓜叶片蛋白质样品进行分级分离,将黄瓜叶片中存在的高丰度蛋白1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶特异性地集中于一个组分之中,以提高对黄瓜叶片蛋白质双向电泳中低丰度蛋白质的检测率。结果表明:(1)分级后各组分和全蛋白在SDS-PAGE谱带中差异显著,全蛋白得到了有效的分离。(2)二维电泳图谱上点的分辨率有很大的提高,所有组分的点数是未分级前的3倍之多。(3)浓度为24%的PEG-4000富集高丰度蛋白Rubisco的效果最好。该方法可推广应用于黄瓜叶片蛋白质组分析的样品制备。 展开更多
关键词 黄瓜叶片 1 5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶 聚乙二醇 双向电泳
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两种方法去除肺癌患者血清高丰度蛋白的研究 被引量：1
9
作者 马梅兰 曾家豫 +3 位作者 马瑾 袁红霞 牛童 廖世奇 《甘肃医药》 2016年第1期4-6,共3页
目的:去除肺癌血清中的高丰度蛋白,为寻找肺癌早期肿瘤标志物奠定基础。方法:血清经除脂后按血清:水:乙腈=1:2:4.5(v/v/v)沉淀分离高丰度蛋白,用SDS-PAGE验证去除效果。试剂盒去除血清高丰度蛋白,对体检健康者和非小细胞肺癌患者去除高... 目的:去除肺癌血清中的高丰度蛋白,为寻找肺癌早期肿瘤标志物奠定基础。方法:血清经除脂后按血清:水:乙腈=1:2:4.5(v/v/v)沉淀分离高丰度蛋白,用SDS-PAGE验证去除效果。试剂盒去除血清高丰度蛋白,对体检健康者和非小细胞肺癌患者去除高丰度蛋白前后的血清凝胶电泳图像进行分析。结果:经本法去除后血清蛋白含量呈显著降低。与等量上样原血清电泳结果相比,相对分子量在50-80k D间的蛋白质被明显去除,而被其掩盖的相对分子质量在10k D以下的低丰度蛋白质得以显现。结论:乙腈沉淀法提供了一种经济、简便、重复性较好的人血清高丰度蛋白去除方法,为进一步寻找肺癌早期肿瘤标志物奠定了基础并提供了技术支持。 展开更多
关键词 肺癌 高丰度蛋白 低丰度蛋白
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