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鼠伤寒沙门菌小RNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD的表达调控
1
作者 陈世雄 潘永 +5 位作者 令狐远凤 张家莉 杨婉 武绍碧 叶景芬 杨琦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1263-1273,共11页
【目的】探究小RNA(small RNA,sRNA)RybB和伴侣蛋白Hfq对沙门氏菌孔蛋白OmpD表达的调控作用。【方法】以鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium,STM)为研究对象,将含有编码β-半乳糖苷酶的lacZ报告基因的pCE40质粒转入ompD基因单缺失菌... 【目的】探究小RNA(small RNA,sRNA)RybB和伴侣蛋白Hfq对沙门氏菌孔蛋白OmpD表达的调控作用。【方法】以鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium,STM)为研究对象,将含有编码β-半乳糖苷酶的lacZ报告基因的pCE40质粒转入ompD基因单缺失菌株中以获得lacZ报告菌株;在此基础上,利用P22噬菌体转导技术分在lacZ报告菌株中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短以获得双突变实验菌株,以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。通过β-半乳糖苷酶活性试验和RT-qPCR探究sRNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD表达的调控作用。【结果】成功在lacZ报告菌中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短等双缺失实验菌株,以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。与野生型(wild type,WT)菌株相比,在lacZ报告菌株中,hfq基因截短为87个氨基酸序列的突变株中的OmpD蛋白活性下调了2.16%,其余实验株OmpD蛋白的β-半乳糖苷酶活性均呈上升趋势。与WT菌株相比,实验菌株ompD基因转录水平除了STM LT2ΔompD::lacZΔhfq65的上调不具有显著性外,其余实验菌株均显著(P<0.05)上调,其中lacZ报告菌株、rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株ompD基因转录水平上调最明显,为1.83倍。【结论】ompD基因的转录及蛋白表达主要受hfq基因和sRNA RybB的负反馈调节;Hfq的远端面在对ompD基因的转录抑制中起关键作用。通过多个基因突变菌株的构建,阐述了sRNA伴侣蛋白Hfq与孔蛋白OmpD的相互作用关系,探索了Hfq对ompD的调控关键区域,丰富了sRNA的调控理论。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 λ-Red同源重组 sRNA RybB hfq ompD
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细菌非编码小RNA的分类及功能简介 被引量：6
2
作者 聂佳佳 金鑫 +1 位作者 孟宪臣 朱国强 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期75-79,共5页
细菌非编码小RNA（non-coding small RNA,简称sRNA）是一类长度为40~500个核苷酸,在基因组中被转录但不编码蛋白质的一类RNA分子。它们大多数在Hfq的协助下,通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、群体感应... 细菌非编码小RNA（non-coding small RNA,简称sRNA）是一类长度为40~500个核苷酸,在基因组中被转录但不编码蛋白质的一类RNA分子。它们大多数在Hfq的协助下,通过碱基配对识别靶标mRNA,在转录后水平调节基因的表达,是细菌代谢、群体感应和适应环境变化及毒力基因表达的重要调节因子。本文对sRNA的分类及功能作如下综述。 展开更多
关键词 细菌非编码小RNA hfq 分类 功能
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沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB靶基因trpE的鉴定 被引量：5
3
作者 潘永 杨阳 +2 位作者 李晨 刘丽娟 杨琦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1777-1782,共6页
trpE基因在鼠伤寒沙门菌中编码邻氨基苯甲酸合酶Ⅰ并参与氨基酸生物合成和代谢。为鉴定鼠伤寒沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB所调控的基因trpE,本研究基于前期鼠伤寒沙门菌Hfq基因敲除株及gcvB基因敲除株转录组分析基础上,利用Red同源重组... trpE基因在鼠伤寒沙门菌中编码邻氨基苯甲酸合酶Ⅰ并参与氨基酸生物合成和代谢。为鉴定鼠伤寒沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB所调控的基因trpE,本研究基于前期鼠伤寒沙门菌Hfq基因敲除株及gcvB基因敲除株转录组分析基础上,利用Red同源重组系统构建trpE基因lac融合菌株,并利用P22噬菌体转导技术构建gcvB和Hfq基因单缺失和双缺失菌株,通过β半乳糖苷酶试验检测trpE基因在不同情况下蛋白表达活性,结合生物信息学系统TargetRNA2预测GcvB R1区与trpE mRNA的作用位点。结果表明,与野生型菌株相比,gcvB基因敲除导致trpE基因蛋白表达量增加1.2倍,Hfq基因敲除后表达量增加1.1倍,而双敲除增加量仅为0.5倍。Target RNA2预测trpE mRNA与GcvB R1区可形成8个连续或18个不连续的碱基互补。以上结果表明trpE基因受GcvB和Hfq调控,且极大可能受GcvB直接调控。本研究为鼠伤寒沙门菌GcvB的作用机理研究奠定理论基础,丰富了GcvB的靶基因数目。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 小RNA hfq β半乳糖苷酶试验 trpE基因
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细菌Hfq蛋白的结构、功能及作用机制 被引量：5
4
作者 樊奔 陈晟 李昱龙 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期155-162,共8页
非编码小RNA(small RNA,sRNA)是细菌基因转录后调控的一个重要层次,也是近十年来原核生物研究领域的焦点之一。大多数sRNA的作用与Hfq蛋白密切相关,即Hfq可以促进sRNA与其靶标mRNA的互补配对,进而影响翻译的进行或者mRNA的稳定性。笔者... 非编码小RNA(small RNA,sRNA)是细菌基因转录后调控的一个重要层次,也是近十年来原核生物研究领域的焦点之一。大多数sRNA的作用与Hfq蛋白密切相关,即Hfq可以促进sRNA与其靶标mRNA的互补配对,进而影响翻译的进行或者mRNA的稳定性。笔者对Hfq的结构、Hfq参与sRNA调节作用的机制、Hfq在多种细菌中的功能表型进行了综述。Hfq是一个保守的蛋白质,在很多细菌中广泛存在,并与真核生物中参与mRNA剪切与降解活动的Sm蛋白同源。在结构上,Hfq具有两个非等同的RNA结合面,可以结合并介导多个RNA分子的相互作用,其结构体现了和功能的高度统一性。目前,对Hfq的研究主要集中于革兰氏阴性细菌中,在革兰氏阳性细菌中,Hfq的功能尚不明晰;此外,在许多重要的细菌中,Hfq影响功能表型的具体机制也不清楚。因此,今后有必要进一步精细研究Hfq的分子结构特征和功能特点,深入分析Hfq对细菌表型多样化的影响机制,探究Hfq影响靶标分子和功能表型的详尽机制。 展开更多
关键词 hfq SRNA 非编码RNA 调节性RNA 转录后调控
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细菌非编码RNA及其分子伴侣Hfq 被引量：5
5
作者 徐巧林 宋艳钊 郭岩彬 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1511-1520,共10页
细菌在生存过程中要面对复杂多样的环境,在长期进化过程中,细菌逐渐形成不同的应答机制来感应环境信号的变化,并通过精确的基因表达来调控生理生化反应。基因表达调控可分为转录水平和转录后水平两个方面,对于细菌来说,非编码RNA在转录... 细菌在生存过程中要面对复杂多样的环境,在长期进化过程中,细菌逐渐形成不同的应答机制来感应环境信号的变化,并通过精确的基因表达来调控生理生化反应。基因表达调控可分为转录水平和转录后水平两个方面,对于细菌来说,非编码RNA在转录后调控上发挥着重要的作用,而大多数非编码RNA与靶标m RNA的相互作用过程又离不开Hfq蛋白的辅助。本文综述了非编码RNA的分类、调控特点,伴侣蛋白Hfq的结构、功能以及两者相互作用的机制,以期深入了解非编码RNA及其伴侣蛋白Hfq在转录后调控中发挥的作用。 展开更多
关键词 转录后调控 非编码RNA hfq
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细菌sRNA伴侣蛋白Hfq的研究进展 被引量：4
6
作者 宋兰 周先礼 +1 位作者 岳俊杰 梁龙 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2009年第2期186-189,共4页
细菌sRNA能调节不同的功能,从结构调节到催化作用,影响生物体中各种各样的加工过程,包括RNA加工,mRNA稳定性,翻译,蛋白质稳定性和蛋白质分泌。小RNA(sRNA)通过多种机制发挥作用,其中许多需要RNA伴侣蛋白Hfq辅助。它们通过与靶RNA结合而... 细菌sRNA能调节不同的功能,从结构调节到催化作用,影响生物体中各种各样的加工过程,包括RNA加工,mRNA稳定性,翻译,蛋白质稳定性和蛋白质分泌。小RNA(sRNA)通过多种机制发挥作用,其中许多需要RNA伴侣蛋白Hfq辅助。它们通过与靶RNA结合而参与到不同的RNA反应中。本文对sRNA伴侣蛋白Hfq的作用机制进行了综述。 展开更多
关键词 SRNA 伴侣蛋白 hfq 作用机制
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鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和伴侣蛋白Hfq对Ⅲ型分泌系统相关基因的调控
7
作者 张家莉 潘永 +3 位作者 段世宇 令狐远凤 郑如雯 杨琦 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2023年第4期512-518,共7页
细菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)与毒力密切相关。为探究鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和伴侣蛋白Hfq对T3SS相关基因spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK的调控,利用Red同源重组技术构建了上述基因与lacZ的融合菌株,在此基础上利用P22噬菌体转... 细菌的Ⅲ型分泌系统(T3SS)与毒力密切相关。为探究鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和伴侣蛋白Hfq对T3SS相关基因spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK的调控,利用Red同源重组技术构建了上述基因与lacZ的融合菌株,在此基础上利用P22噬菌体转导技术分别构建上述融合菌株与gcvB、hfq的单缺失菌株,通过qPCR和β-半乳糖苷酶试验分别检测gcvB、hfq缺失后各基因的转录水平和蛋白水平的变化。结果显示:与标准菌株相比,gcvB缺失后,spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调;prgJ、prgK的转录水平上调,蛋白水平下调。hfq缺失后,spaP、invC、prgH、prgI、invG的转录水平和蛋白水平均上调,prgH、prgI、prgJ、prgK的蛋白水平下调。表明Hfq和GcvB均可对spaP、invC、invG、prgH、prgI、prgJ、prgK进行调控。上述结果可为鼠伤寒沙门菌sRNA GcvB和Hfq的作用机理研究提供参考。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 RED同源重组 GcvB hfq Ⅲ型分泌系统
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不同碳源对溶藻弧菌黏附相关表型的影响初探及Hfq对其的调控 被引量：4
8
作者 邓益琴 赵哲 +1 位作者 刘松林 陈偿 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期99-107,共9页
为探讨不同碳源对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)黏附相关表型的影响及Hfq对其的调控作用,研究了D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-海藻糖和D-果糖对溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq缺失株及回补株的运动性、菌落形态、鞭毛、胞外多糖及生物膜合成的影... 为探讨不同碳源对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)黏附相关表型的影响及Hfq对其的调控作用,研究了D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-海藻糖和D-果糖对溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq缺失株及回补株的运动性、菌落形态、鞭毛、胞外多糖及生物膜合成的影响。研究结果显示,4种碳源均使溶藻弧菌群集运动(swarmming)显著增强(P<0.001),并受Hfq正调控;游动性(swimming)显著减弱(P<0.01),但不受Hfq调控;菌落变得褶皱,并受Hfq负调控;4种碳源不影响溶藻弧菌鞭毛及胞外多糖合成,但D-果糖使其生物膜合成减少,并受Hfq负调控。实验分析表明:4种碳源可能通过调控溶藻弧菌黏性阻力及能量代谢来调控其运动性;并可能通过调控胞外多糖分子结构及理化性质影响其菌落形态;另外,D-果糖在调控生物膜形成过程中具有重要作用;因此,添加不同碳源会影响溶藻弧菌黏附相关表型,可能影响其致病性,但具体调控机制需进一步研究。 展开更多
关键词 碳源 溶藻弧菌 hfq 黏附相关表型
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鼠伤寒沙门菌伴侣蛋白Hfq与oppA mRNA 5′ UTR结合位点的预测与验证分析
9
作者 张家莉 潘永 +2 位作者 杨阳 令狐远凤 杨琦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1434-1441,1449,共9页
OppA与鼠伤寒沙门菌氨基酸和肽的摄取有着重要的关系,oppA mRNA是已验证受Hfq伴侣蛋白依赖型小RNA GcvB转录后调控的靶标,GcvB与oppA mRNA的作用机制已经确认,但Hfq与oppA mRNA之间的互作机制尚未明确。为明确Hfq与oppA mRNA潜在的作用... OppA与鼠伤寒沙门菌氨基酸和肽的摄取有着重要的关系,oppA mRNA是已验证受Hfq伴侣蛋白依赖型小RNA GcvB转录后调控的靶标,GcvB与oppA mRNA的作用机制已经确认,但Hfq与oppA mRNA之间的互作机制尚未明确。为明确Hfq与oppA mRNA潜在的作用位点,分析Hfq与oppA mRNA (ARN)n基序的作用关系。本研究利用5′-RACE验证oppA mRNA转录起始位点和oppA mRNA 5′UTR,使用Mfold软件预测oppA mRNA部分序列的二级结构并根据(ARN)n基序的特征筛查oppA mRNA 5′UTR的ARN基序,利用λ-Red同源重组技术构建oppA mRNA不同(ARN)n基序敲除和突变的lacZ基因融合菌株,通过qRT-PCR试验和β-半乳糖苷酶试验的检测oppA的转录水平和蛋白表达量的变化。经验证oppA mRNA 5′UTR长度为159 bp,在oppA mRNA 5′UTR中预测到2个Hfq结合偏好型基序ARN-1和ARN-2。对ARN-1和ARN-2基序分别或同时敲除或点突变,oppA mRNA的转录水平和蛋白水平的变化呈现相似的结果。与Western blot相比,oppA基因转录和蛋白水平总体呈下调趋势。综上所述,经预测的ARN-1和ARN-2基序与Hfq转录后负调控oppA mRNA的作用机制无明显的关联,推测其为oppA mRNA翻译所需元件。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 hfq 5′UTR oppA
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汽车车身铝合金板材热冲压模内淬火工艺技术 被引量：6
10
作者 王清仙 黄艳灵 陈春龙 《制造技术与机床》 北大核心 2016年第8期54-57,共4页
热冲压成形及模内淬火工艺(HFO)是一种针对于复杂冲压形状的高强度铝合金板材的先进生产工艺方法,可以提升高强度铝合金板材的冲压性能,同时又避免了热成形后的材料性能严重下降,可大规模提升铝材料的应用在轻量化车身中所占比重,对于... 热冲压成形及模内淬火工艺(HFO)是一种针对于复杂冲压形状的高强度铝合金板材的先进生产工艺方法,可以提升高强度铝合金板材的冲压性能,同时又避免了热成形后的材料性能严重下降,可大规模提升铝材料的应用在轻量化车身中所占比重,对于汽车轻量化开发具有很重要的研发价值。对HFQ工艺流程、在汽车上的应用以及目前的研发进展进行了系统的介绍。 展开更多
关键词 汽车车身 铝合金 冲压 热冲压成形及模内淬火
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铝合金板温成形和热成形技术应用研究 被引量：6
11
作者 吴新星 范家春 +2 位作者 邢阳 倪娟丽 俞雁 《轻合金加工技术》 CAS 2021年第1期22-28,共7页
为解决强度高的铝合金板材冷成形时塑性差、容易开裂及回弹量大等问题,铝合金温成形和热成形技术受到关注。对铝合金板温成形和热成形的特点进行了论述,对于5×××系铝合金,温、热成形可有效提高合金成形性能,实现对形状... 为解决强度高的铝合金板材冷成形时塑性差、容易开裂及回弹量大等问题,铝合金温成形和热成形技术受到关注。对铝合金板温成形和热成形的特点进行了论述,对于5×××系铝合金,温、热成形可有效提高合金成形性能,实现对形状复杂零件的成形,但强度不会增加;而对于6×××系或7×××系铝合金,采用固溶处理-成形-冷模淬火(HFQ)的热成形工艺可获得兼具复杂形状和高强度的零件。并从工程应用角度,介绍了目前国内外HFQ铝合金热成形技术在汽车应用方面的最新进展。最后以7075-T6铝合金为例,阐述了用该工艺制备高强度铝合金零件的优势和未来国产化应用需要解决的难点。 展开更多
关键词 铝合金 温成形 热成形 固溶处理-成形-冷模淬火 轻量化
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大黄鱼来源波罗的海希瓦氏菌SB-19的hfq基因功能分析 被引量：2
12
作者 江京洋 韦旭航 +2 位作者 朱军莉 吴敏 冯立芳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第8期135-141,共7页
为分析大黄鱼来源波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)中分子伴侣Hfq的功能,对具有强致腐能力的波罗的海希瓦氏菌SB-19中hfq基因进行敲除,比较野生株(wide type,WT)和敲除株(knock out,KO)在生长速率、群体感应、抗逆境以及对灭菌鱼... 为分析大黄鱼来源波罗的海希瓦氏菌(Shewanella baltica)中分子伴侣Hfq的功能,对具有强致腐能力的波罗的海希瓦氏菌SB-19中hfq基因进行敲除,比较野生株(wide type,WT)和敲除株(knock out,KO)在生长速率、群体感应、抗逆境以及对灭菌鱼汁致腐效果的差异。结果表明:波罗的海希瓦氏菌SB-19中存在1个hfq基因,其基因表达水平随着细胞密度的增加而升高;在30℃培养条件下,WT株和KO株的生长速率接近,但在4℃培养条件下,与WT株相比,KO株的生长出现明显迟滞且稳定期的细胞密度较低;WT株与KO株分泌信号分子的能力相近,但KO株表现出较低的生物被膜形成能力和胞外蛋白酶活性,而且接种KO株的灭菌鱼汁也产生较少的挥发性盐基氮和三甲胺;此外,KO株对盐分、营养、重金属、消毒剂等胁迫条件更为敏感。上述结果表明Hfq参与波罗的海希瓦氏菌SB-19株的多种代谢调控,影响细菌的生长、群体感应、致腐能力、抗逆境能力等,即Hfq是一种全局性调控因子,整体调节波罗的海希瓦氏菌SB-19的诸多生理活动。本实验为波罗的海希瓦氏菌的基础生物学研究和海产品中微生物的致腐机制提供理论基础。 展开更多
关键词 大黄鱼 波罗的海希瓦氏菌 hfq 致腐 功能分析
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单核细胞增生李斯特菌非编码RNA的结构与功能 被引量：3
13
作者 张再超 彭叶龙 +2 位作者 孟庆玲 乔军 陈创夫 《生命的化学》 CAS CSCD 2013年第4期443-448,共6页
单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种食源性致病菌,它的调节RNA与致病性之间有密切关系,感染生物学将其作为重要的研究方向。L.monocytogenes拥有大量顺式编码RNA和反式编码RNA,它们在L.monocytogenes糖代谢、离子转运... 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种食源性致病菌,它的调节RNA与致病性之间有密切关系,感染生物学将其作为重要的研究方向。L.monocytogenes拥有大量顺式编码RNA和反式编码RNA,它们在L.monocytogenes糖代谢、离子转运、生物膜形成、侵染、胞内寄生及环境应激方面发挥重要的调节作用。因此,L.monocytogenes非编码RNA的种类和作用机制值得关注。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 非编码RNA hfq
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Hfq对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力的调控分析 被引量：3
14
作者 邓益琴 赵晶晶 +2 位作者 刘松林 赵哲 陈偿 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期604-611,共8页
为探讨分子伴侣Hfq对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力的调控作用,本文分析了溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq突变株及回补株各项与毒力相关的生理生化指标。研究结果显示:在半固体和固体LBS平板中,缺失株游动和涌动能力显著降低(P<0.001... 为探讨分子伴侣Hfq对溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)毒力的调控作用,本文分析了溶藻弧菌ZJ-T野生株、hfq突变株及回补株各项与毒力相关的生理生化指标。研究结果显示:在半固体和固体LBS平板中,缺失株游动和涌动能力显著降低(P<0.001);hfq缺失株生物膜合成速度及合成量降低,但解离速度增加;在限铁环境下,缺失株生长有所减弱;缺失株胞外蛋白酶分泌增强(P<0.01);同野生株和突变株相比,缺失株对小鼠成肌细胞系C2C12细胞几乎不致死,且其对石斑鱼的半数致死量提高3个数量级。实验结果表明:Hfq对溶藻弧菌毒力具有重要调控作用,并通过调控其运动、生物膜形成、铁代谢、胞外蛋白酶分泌等生理生化过程从而调控其毒力。本研究可为溶藻弧菌病害暴发的防治提供重要理论依据。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 hfq 毒力
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肠炎沙门氏菌hfq缺失株的构建和对fliC基因的调控分析 被引量：2
15
作者 孟霞 孟宪臣 +4 位作者 朱春红 王亨 王金秋 聂佳佳 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期720-724,共5页
Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株... Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株中鞭毛主要结构蛋白fliC的表达情况。结果表明与野生株相比,hfq突变株fliC的表达量明显下降,只有野生株的3.7%。细菌运动性试验表明突变株在半固体培养基上的运动能力减弱。以上结果表明Hfq蛋白可调节鞭毛结构蛋白FliC的表达,造成FliC蛋白表达量明显下降,鞭毛的合成受到抑制,从而导致肠炎沙门氏菌的运动能力减弱。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 hfq FLIC 运动性
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细菌非编码小RNA的研究与展望 被引量：2
16
作者 朱阵 刘翠翠 +3 位作者 王婧 张继瑜 魏小娟 邢守叶 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期45-47,共3页
细菌非编码小RNA（sRNA）是近年来在原核生物体内发现的长度在40∽500 bp的RNA。sRNA在基因组中被转录,但自身不能编码蛋白质,一般需要Hfq协助,在转录后水平与mRNA结合,影响mRNA的稳定性和翻译,从而调控生命活动,是细菌代谢、群体感应... 细菌非编码小RNA（sRNA）是近年来在原核生物体内发现的长度在40∽500 bp的RNA。sRNA在基因组中被转录,但自身不能编码蛋白质,一般需要Hfq协助,在转录后水平与mRNA结合,影响mRNA的稳定性和翻译,从而调控生命活动,是细菌代谢、群体感应、适应环境、应激反应及毒力基因表达的重要调节因子。目前,各类细菌中发现的sRNA超过150种,研究方法主要有传统的实验室检测分析法和基于生物信息学的预测法。 展开更多
关键词 细菌非编码小RNA(sRNA) 基因组 转录 hfq MRNA 调节因子
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沙门菌sRNA GcvB及伴侣蛋白Hfq对靶基因stm4351的调控作用 被引量：1
17
作者 张家莉 杨阳 +3 位作者 潘永 段世宇 令狐远凤 杨琦 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第3期381-386,共6页
为探究sRNA GcvB与伴侣蛋白Hfq对靶基因stm4351的调控作用,通过λred同源重组、FLP/FRT重组和转导构建了基因缺失菌株Δstm4351∷lacZ、stm4351ΔgcvB∷cat、stm4351Δhfq∷tetRA、stm4351Δhfq∷tetRAΔgcvB∷cat,并通过β-半乳糖苷酶(... 为探究sRNA GcvB与伴侣蛋白Hfq对靶基因stm4351的调控作用,通过λred同源重组、FLP/FRT重组和转导构建了基因缺失菌株Δstm4351∷lacZ、stm4351ΔgcvB∷cat、stm4351Δhfq∷tetRA、stm4351Δhfq∷tetRAΔgcvB∷cat,并通过β-半乳糖苷酶(LacZ)试验和荧光定量PCR试验测定了gcvB与hfq缺失后LacZ活性和stm4351转录水平的变化情况.β-半乳糖苷酶试验结果显示:gcvB或hfq缺失菌株的LacZ活性均升高,表明stm4351基因的蛋白表达水平升高;hfq缺失菌株的LacZ活性高于gcvB缺失菌株;hfq和gcvB同时缺失后,LacZ活性比单缺失菌株高.荧光定量PCR结果显示:hfq缺失后,stm4351的转录量极显著下降;而gcvB缺失及hfq和gcvB同时缺失对stm4351转录量的影响不显著.以上结果说明:GcvB、Hfq均对stm4351的表达存在抑制作用;在Hfq的辅助作用下,GcvB对stm4351表达的抑制作用增强;Hfq协同GcvB对stm4351的调控途径可能有2种或更多;同时,Hfq对stm4351的保护或激活作用可能受到GcvB的影响. 展开更多
关键词 沙门菌 GcvB hfq 靶基因 调控机理
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Hfq对伤寒沙门菌高渗应激早期基因表达的调节 被引量：2
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作者 谢新民 李安平 +4 位作者 杜鸿 茅凌翔 罗哲 王敏 黄新祥 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第1期1-5,共5页
目的:探查伤寒沙门菌hfq基因在高渗应激早期对其他基因表达的影响。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片技术,比较伤寒沙门菌野生株和hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期的基... 目的:探查伤寒沙门菌hfq基因在高渗应激早期对其他基因表达的影响。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株;利用伤寒沙门菌全基因组芯片技术,比较伤寒沙门菌野生株和hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期的基因表达谱差异,并选择部分表达差异基因进行实时定量PCR验证。结果:伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株制备成功;基因表达谱比较分析结果表明伤寒沙门菌hfq基因缺陷变异株在高渗应激早期有62个基因表达上调,有32个基因表达下调。实时定量PCR结果与芯片分析一致。结论:Hfq作为一个调节因子在伤寒沙门菌高渗应激早期对基因表达起重要调节作用。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 hfq 高渗应激 基因芯片分析
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Hfq对霍乱弧菌环境适应能力的影响及相关基因的转录调控 被引量：2
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作者 陈秀琴 闫志勇 +4 位作者 李杰 王瑞白 闫梅英 阚飙 高鹤 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期241-246,共6页
目的通过表型实验分析Hfq蛋白对霍乱弧菌环境适应能力的影响，并通过分子实验验证Hfq对环境生存及致病相关基因转录的调控。方法基于自杀质粒缺失霍乱弧菌的hfq基因，并构建相应回补株；通过表型实验，比较霍乱弧菌野生株和hfq突变株在... 目的通过表型实验分析Hfq蛋白对霍乱弧菌环境适应能力的影响，并通过分子实验验证Hfq对环境生存及致病相关基因转录的调控。方法基于自杀质粒缺失霍乱弧菌的hfq基因，并构建相应回补株；通过表型实验，比较霍乱弧菌野生株和hfq突变株在细菌运动能力、生物膜形成、外膜抗性和氧化应激能力上的差异；应用逆转录荧光定量PCR（RT-qPCR）技术对Hfq可能调控的相关基因的转录水平进行比较。结果成功构建霍乱弧菌hfq缺失株及回补株，表型实验表明hfq突变株的菌株游动性降低，生物膜形成能力增强，对十二烷基磺酸钠（SDS）和庆大霉素的耐受性显著下降，并且与野生株相比，hfq突变株对H2O2刺激更为敏感。RT-qPCR实验证明Hfq对霍乱弧菌鞭毛合成、胞外多糖合成、外膜蛋白以及氧化应激相关基因的转录有调控作用。结论Hfq蛋白作为RNA伴侣分子，能够通过调控一些生存及致病相关基因的转录进而影响霍乱弧菌的生物膜形成、氧化应激反应、抗生素抗性等能力，表明Hfq可能与其他调控子一起，在霍乱弧菌的生存、代谢以及致病因子转录的协调控制上起关键作用。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 hfq 环境适应 转录调控
原文传递
大肠杆菌RNA分子伴侣Hfq与DsrA和rpoS作用机制的研究进展 被引量：1
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作者 王丽君 王维维 +2 位作者 龚庆国 吴季辉 施蕴渝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第7期627-633,共7页
RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然... RNA分子伴侣Hfq是细菌重要的转录后调节因子,它能够帮助非编码small RNA(sRNA)与目标mRNA配对.mRNArpoS编码的稳态sigma因子σS是大肠杆菌中应激响应的核心调控因子.在低温下,Hfq蛋白对于sRNA DsrA介导的mRNArpoS的翻译激活是必需的.然而,Hfq使用何种机制来促进sRNA和mRNA配对一直有两种并不互斥的模型存在:Hfq远侧和近侧两个表面同时结合sRNA和mRNA,使得两条RNA相互靠近,便于形成碱基配对;Hfq可能结合一条或者两条RNA,改变它们的二级结构或者三级结构,从而促进sRNA-mRNA配对的实现.最近的研究报道,成功在体外捕捉到了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物,测定了AU6A-Hfq-A7三元复合物的晶体结构,并且在大肠杆菌体内证实了三元复合物的形成对于Hfq帮助sRNA DsrA激活mRNA rpoS的翻译是重要的.本文以sRNA DsrA和mRNA rpoS为例综述了蛋白质Hfq与RNA的结合特性,同时也讨论了sRNA-Hfq-mRNA三元复合物的存在对于研究sRNA介导的调控机制的一些启示. 展开更多
关键词 hfq RNA分子伴侣 SRNA DSRA MRNA RPOS hfq-RNA复合物晶体结构 翻译激活
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