溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2是对Ⅱ型单纯疱疹病毒HSV-2进行基因改造后得到的新型溶瘤病毒。UL19基因编码的VP5蛋白为oHSV2主要衣壳蛋白之一。在前期已经通过GST pull-down与质谱检测分析确定了oHSV2的VP5蛋白为人类白细胞抗原E(HLA-E)...溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2是对Ⅱ型单纯疱疹病毒HSV-2进行基因改造后得到的新型溶瘤病毒。UL19基因编码的VP5蛋白为oHSV2主要衣壳蛋白之一。在前期已经通过GST pull-down与质谱检测分析确定了oHSV2的VP5蛋白为人类白细胞抗原E(HLA-E)的相互作用蛋白的基础上,将HLA-E作为NK与CTL等免疫细胞表面CD94/NKG2A的强效抑制性配体,当它与CD94/NKG2A结合后,NK与CTL细胞的免疫功能会受到一定程度的抑制。前期研究已证实oHSV2会在体外上调部分肿瘤细胞系表面HLA-E表达,为探究oHSV2是否通过VP5蛋白上调肿瘤细胞系表面HLA-E的表达,进而影响HLA-E和CD94/NKG2A的结合,最终改变NK细胞的抗肿瘤能力,通过PiggyBac转座系统构建稳定表达VP5蛋白的人胃腺癌细胞BGC823-VP5细胞系。所构建的细胞系经流式检测单克隆细胞阳性率在99%以上;Western Blot检测到VP5蛋白在细胞内表达;实时无标记动态细胞分析技术(RTCA Real Time Cell AnaIysis)检测表明BGC823-VP5细胞系与亲本细胞BGC823细胞生长活性一致。稳定表达VP5蛋白的人胃癌细胞BGC823-VP5细胞系的构建,为进一步研究oHSV2上VP5蛋白在人胃癌BGC823细胞内影响HLA-E的表达,进而影响免疫细胞的抗肿瘤能力奠定了基础。展开更多
文摘溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒oHSV2是对Ⅱ型单纯疱疹病毒HSV-2进行基因改造后得到的新型溶瘤病毒。UL19基因编码的VP5蛋白为oHSV2主要衣壳蛋白之一。在前期已经通过GST pull-down与质谱检测分析确定了oHSV2的VP5蛋白为人类白细胞抗原E(HLA-E)的相互作用蛋白的基础上,将HLA-E作为NK与CTL等免疫细胞表面CD94/NKG2A的强效抑制性配体,当它与CD94/NKG2A结合后,NK与CTL细胞的免疫功能会受到一定程度的抑制。前期研究已证实oHSV2会在体外上调部分肿瘤细胞系表面HLA-E表达,为探究oHSV2是否通过VP5蛋白上调肿瘤细胞系表面HLA-E的表达,进而影响HLA-E和CD94/NKG2A的结合,最终改变NK细胞的抗肿瘤能力,通过PiggyBac转座系统构建稳定表达VP5蛋白的人胃腺癌细胞BGC823-VP5细胞系。所构建的细胞系经流式检测单克隆细胞阳性率在99%以上;Western Blot检测到VP5蛋白在细胞内表达;实时无标记动态细胞分析技术(RTCA Real Time Cell AnaIysis)检测表明BGC823-VP5细胞系与亲本细胞BGC823细胞生长活性一致。稳定表达VP5蛋白的人胃癌细胞BGC823-VP5细胞系的构建,为进一步研究oHSV2上VP5蛋白在人胃癌BGC823细胞内影响HLA-E的表达,进而影响免疫细胞的抗肿瘤能力奠定了基础。