环介导等温扩增技术快速检测副溶血性弧菌 被引量：7

1

作者 张如胜 宋克云 +1 位作者 苏良 魏泉德 《国际检验医学杂志》 CAS 2009年第3期217-219,共3页

目的建立一种检测副溶血性弧菌(Vp)快速且特异的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法针对副溶血性弧菌不耐热溶血素(tlh)基因特异性序列的6个位点设计4条LAMP引物,65℃保温约60 min,完成对副溶血性弧菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBRGree... 目的建立一种检测副溶血性弧菌(Vp)快速且特异的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法针对副溶血性弧菌不耐热溶血素(tlh)基因特异性序列的6个位点设计4条LAMP引物,65℃保温约60 min,完成对副溶血性弧菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBRGreen I染色、电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测1株副溶血性弧菌和12株非副溶血性弧菌来验证LAMP方法的特异性;将副溶血性弧菌菌液作一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测,比较两者敏感性。结果 1株副溶血性弧菌出现LAMP扩增反应:通过肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,酶切证实了LAMP产物的特异性;12株非副溶血性弧菌未出现LAMP扩增。LAMP检测tlh基因的特异性和敏感性与普通PCR相同,LAMP检测tlh基因的检测下限为15 cfu/mL。结论建立了一种快速、敏感、特异的副溶血性弧菌检测方法,适合日常监测及快速检测的需要。 展开更多

关键词 核酸扩增技术 弧菌 副溶血性 溶血素蛋白质类 临床实验室技术

下载PDF 职称材料

芪杞参颗粒对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能的影响 被引量：4

2

作者 李宏 戴学文 +1 位作者 房志仲 高卫真 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第9期906-909,共4页

目的研究芪杞参颗粒对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能的影响。方法 6周龄昆明种小鼠分空白对照组、芪杞参颗粒高、中、低剂量组,小鼠腹腔注射鸡红细胞混悬液,观察芪杞参颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;制备绵羊红细胞(SRBC),观察... 目的研究芪杞参颗粒对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能的影响。方法 6周龄昆明种小鼠分空白对照组、芪杞参颗粒高、中、低剂量组,小鼠腹腔注射鸡红细胞混悬液,观察芪杞参颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;制备绵羊红细胞(SRBC),观察血球凝集程度,测定血清溶血素;以靶细胞(YAC-1细胞)与脾细胞(效应细胞)的反应检测芪杞参颗粒对小鼠自然杀伤(NK)细胞活性的影响;采用淋巴细胞转化法观察芪杞参颗粒对细胞免疫的影响;计算小鼠胸腺质量/体质量及脾脏质量/体质量为脏器系数观察芪杞参颗粒对小鼠脏器的影响。结果与对照组比较,芪杞参颗粒显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;对小鼠体液免疫功能有一定的增强作用;可增强小鼠NK细胞活性;对刀豆蛋白(Con)A诱导下的小鼠淋巴细胞转化有增强作用;对脏器系数没有显著的影响。结论芪杞参颗粒具有明显的免疫调节作用,预示其有良好的应用前景。 展开更多

关键词 芪杞参颗粒 免疫 细胞 体液免疫 吞噬作用 溶血素蛋白质类 杀伤细胞 天然 淋巴细胞活化

下载PDF 职称材料

蜡样芽胞杆菌plcR基因功能及其无义突变株特征分析 被引量：2

3

作者 王晓景 王东澍 +5 位作者 吕宇飞 冯尔玲 潘超 朱力 王恒樑 刘先凯 《军事医学》 CAS 北大核心 2020年第2期116-121,共6页

目的分析比较蜡样芽胞杆菌HN001与plcR基因无义突变株HN1M的生物特征,并研究蜡样杆菌中plcR基因的功能。方法绘制生长曲线比较蜡样杆菌HN001和HN1M的生长性能;鉴别培养基平板比较两菌株产胞外酶能力;结晶紫染色法测定两菌株生物膜形成;R... 目的分析比较蜡样芽胞杆菌HN001与plcR基因无义突变株HN1M的生物特征,并研究蜡样杆菌中plcR基因的功能。方法绘制生长曲线比较蜡样杆菌HN001和HN1M的生长性能;鉴别培养基平板比较两菌株产胞外酶能力;结晶紫染色法测定两菌株生物膜形成;RT-PCR分析两菌株中溶血酶、磷脂酶和肠毒素基因的转录水平;以C57BL/6N小鼠为动物模型比较两菌株的毒力大小。结果与HN001相比,HN1M稳定期菌密度和生物膜形成能力显著升高,溶血能力、产卵磷脂酶能力和对小鼠致病性显著减弱;HN1M中毒力基因hlyD、clO、hly、cerA、cerB、plcA、cytK、nhe和hblCDB转录水平显著下调;tlyA和hblA转录水平无显著差异。结论与HN001相比,蜡样杆菌plcR基因无义突变株HN1M溶血酶和磷脂酶的活性明显降低,毒力明显减弱,该研究为开发蜡样杆菌工程菌和研究plcR的功能提供了新思路。 展开更多

关键词 蜡样芽胞杆菌 plcR调节子 溶血素蛋白质类 磷脂酶类 生物膜 肠毒素类 毒力 基因表达调控

原文传递

δ溶血素G10S突变与β溶血素联合检测对金黄色葡萄球菌ST59型的鉴定作用 被引量：1

4

作者 王妍乐 罗振 +3 位作者 邱怡瑄 佘鹏飞 陈丽华 伍勇 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期464-468,共5页

目的探讨δ溶血素G10S突变(HldG10S)与β溶血素(β-toxin)联合检测对金黄色葡萄球菌ST59型的鉴定作用。方法收集中南大学湘雅三医院检验科2017年11月至2018年4月非重复分离的82株金黄色葡萄球菌临床菌株,通过基质辅助激光解吸电离飞行... 目的探讨δ溶血素G10S突变(HldG10S)与β溶血素(β-toxin)联合检测对金黄色葡萄球菌ST59型的鉴定作用。方法收集中南大学湘雅三医院检验科2017年11月至2018年4月非重复分离的82株金黄色葡萄球菌临床菌株,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)对菌株进行常规鉴定并获取菌株的质谱图,根据δ溶血素(Hld)的m/z表达强度,将所有菌株分为HldG10S(3036±2.0)m/z、Hld(3006±2.0)m/z及ND(无δ溶血素质谱峰)3个组,利用多位点序列分型(MLST)方法检测各组ST59型分布情况,并采用反向协同溶血试验进行β-toxin表型测定,比较HldG10S、β-toxin单项和联合检测鉴定ST59的敏感度、特异度和准确度。结果82株菌中21株表达HldG10S毒素,占25.6%;39株表达Hld毒素,占47.6%;22株不表达HldG10S与Hld毒素,占26.8%。HldG10S组中16株为ST59,占76.19%(16/21);Hld与ND两组中均无ST59。HldG10S组中16株ST59菌株均产β-toxin,而5株非ST59菌株均未检测到β-toxin产生。HldG10S与β-toxin联合检测鉴定ST59的特异度(100%)与准确度(100%)显著高于HldG10S、β-toxin单项检测的特异度(92.4%,77.3%)和准确度(80.5%,81.7%)(χ2=19.472,P<0.001;χ2=17.792,P<0.001)。结论HldG10S与β-toxin联合检测能初步快速鉴定ST59,可辅助常规监测金黄色葡萄球菌流行变化趋势。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 细菌蛋白质类 溶血素蛋白质类 突变 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离

原文传递

梅毒螺旋体溶血素生物信息学分析 被引量：1

5

作者 吴移谋 李思佳 +4 位作者 李威威 杨鸿钰 唐园园 余翔 王建业 《中南医学科学杂志》 CAS 2022年第5期642-646,共5页

目的 本研究旨在对梅毒螺旋体(Tp)的5种溶血素进行进一步的生物信息学分析,为后续研究溶血素家族蛋白在Tp致病过程中的致病机制提供依据。方法 通过使用NCBI、BLAST、CDD、BioEdit、ExPASy、SignalP、TMHMM、MEGA、PSORTb 3.0、ABCpred... 目的 本研究旨在对梅毒螺旋体(Tp)的5种溶血素进行进一步的生物信息学分析,为后续研究溶血素家族蛋白在Tp致病过程中的致病机制提供依据。方法 通过使用NCBI、BLAST、CDD、BioEdit、ExPASy、SignalP、TMHMM、MEGA、PSORTb 3.0、ABCpred等生物信息学分析方法分析梅毒螺旋体溶血素家族蛋白的一般性质、信号肽、糖基化、磷酸化位点、亚细胞位置、二级结构、功能结构域及抗原表位。结果 预测了Tp中5个溶血素家族蛋白一般性质,Tp1037功能结构域不同于其余4种,Tp0028含有1个信号肽,Tp0027含有1个糖基化位点,Tp0027和Tp1037有多个跨膜结构域,5个溶血素家族蛋白均含有多个磷酸化位点和B细胞、T细胞表位。结论 Tp含有5个溶血素家族蛋白基因,提示Tp入侵宿主时这些基因产物极有可能通过其膜成孔毒性损伤靶细胞,从而致病。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 溶血素蛋白家族 基因特征

下载PDF 职称材料

LA0202为钩端螺旋体中一孔形成溶血素蛋白(英文)

6

作者 杨杨 秦金红 +3 位作者 钟怡 何平 胡宝瑜 郭晓奎 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期831-836,共6页

目的研究LA0202为孔形成溶血素。方法体外克隆表达LA0202蛋白。纯化的LA0202蛋白作用绵羊血细胞观察LA0202的溶血活性并用渗透压保护剂PEG6000添加到作用体系研究渗透压保护剂对LA0202溶血活性的影响。透射电镜及扫描电镜观察LA0202作... 目的研究LA0202为孔形成溶血素。方法体外克隆表达LA0202蛋白。纯化的LA0202蛋白作用绵羊血细胞观察LA0202的溶血活性并用渗透压保护剂PEG6000添加到作用体系研究渗透压保护剂对LA0202溶血活性的影响。透射电镜及扫描电镜观察LA0202作用于体外培养的肝细胞后对细胞的毒性。结果渗透压保护剂PEG6000能够抑制LA0202的溶血活性。LA0202作用于肝细胞后引起肝细胞的毒性损伤。结论LA0202为一孔形成溶血素。 展开更多

关键词 溶血素 钩端螺旋体 蛋白 PEG6000 溶血活性 扫描电镜观察 细胞观察 体外培养

下载PDF 职称材料

水生动物病原菌Ⅵ型分泌系统(T6SS)及其溶血素共调节蛋白研究进展

7

作者 伍水龙 黄瑜 +3 位作者 王蓓 汤菊芬 蔡佳 简纪常 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期162-171,共10页

Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是多种革兰氏阴性菌编码的蛋白分泌装置,在毒力因子释放、生物被膜形成、铁离子摄取、囊泡运输、环境压力适应性及细菌胞内存活等方面发挥着重要功能,在副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)... Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是多种革兰氏阴性菌编码的蛋白分泌装置,在毒力因子释放、生物被膜形成、铁离子摄取、囊泡运输、环境压力适应性及细菌胞内存活等方面发挥着重要功能,在副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)和迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)等水生动物病原菌的致病过程中发挥着关键作用。然而,有关水生动物病原菌T6SS组分及其功能的报道还比较匮乏。本文对几种水生动物病原菌T6SS的生物学功能与调控机理,以及T6SS关键调控因子溶血素共调节蛋白Hcp的系统进化关系与功能等最新研究情况进行了综述,并在水生动物病原菌T6SS的生物学功能、T6SS活性调控与环境因素的关联性、T6SS与致病菌代谢之间的调控关系等方面提出未来研究建议,以期为进一步开展水生动物致病机制研究及水产养殖细菌病的防控提供新思路。 展开更多

关键词 Ⅵ型分泌系统 水生动物病原菌 溶血素共调节蛋白 系统进化树 功能位点

下载PDF 职称材料

霍乱弧菌溶血素共调节蛋白(Hcp)的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

8

作者 蔡远凤 贾城壹 王光丽 《现代检验医学杂志》 CAS 2024年第5期189-192,204,共5页

目的原核表达、纯化霍乱弧菌溶血素共调节蛋白(hemolysin coregulatory protein,Hcp),并制备其多克隆抗体。方法PCR扩增霍乱弧菌Hcp基因并克隆入pET28a载体中构建重组表达载体;将重组载体pET28a-hcp转化E.coil BL21(DE3)中,进行表达条... 目的原核表达、纯化霍乱弧菌溶血素共调节蛋白(hemolysin coregulatory protein,Hcp),并制备其多克隆抗体。方法PCR扩增霍乱弧菌Hcp基因并克隆入pET28a载体中构建重组表达载体;将重组载体pET28a-hcp转化E.coil BL21(DE3)中,进行表达条件优化及表达形式鉴定。获取可溶性Hcp蛋白行Ni-NTA柱纯化,纯化的Hcp蛋白免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,并用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,以评估其免疫原性。再以Western blot法分析抗体对霍乱弧菌Hcp蛋白的特异性识别。结果重组载体pET28a-hcp的酶切片段与预期相符,测序结果与GenBank数据库中hcp基因序列一致,成功构建pET28a-hcp重组质粒,重组质粒经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达相对分子量为28kD的目的蛋白;经Ni-NTA柱纯化后获得较纯的Hcp蛋白,免疫小鼠可获得效价为1∶512000的抗Hcp多克隆抗体(anti-Hcp);Western blot鉴定结果显示anti-Hcp具有识别霍乱弧菌Hcp蛋白的特异性。结论成功获得可溶形式表达的Hcp蛋白,免疫小鼠后获得高效价的抗Hcp多克隆抗体,为后续研究Hcp蛋白在非O1/非O139群霍乱弧菌T6SS致病过程中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 非O1/非O139群霍乱弧菌 溶血素共调节蛋白 原核表达 多克隆抗体

下载PDF 职称材料

类鼻疽杆菌Ⅵ型分泌系统蛋白Hcp1的重组表达及免疫学性质鉴定 被引量：4

9

作者 章美娟 胡治强 +6 位作者 夏瑀培 袁思琪 闫晶敏 饶承龙 李倩 杨文波 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期2296-2301,共6页

目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅵ型分泌系统溶血素共调节蛋白1(hemolysin coregulated protein 1,Hcp1),并对其免疫学性质进行鉴定。方法利用DNA重组技术以pET-28a表达系统在E.coli BL21(DE3)中重组表达Hcp1;通过亲和层析制备高纯度Hcp1蛋白;... 目的重组表达类鼻疽杆菌Ⅵ型分泌系统溶血素共调节蛋白1(hemolysin coregulated protein 1,Hcp1),并对其免疫学性质进行鉴定。方法利用DNA重组技术以pET-28a表达系统在E.coli BL21(DE3)中重组表达Hcp1;通过亲和层析制备高纯度Hcp1蛋白;采用腹腔注射免疫小鼠制备抗Hcp1血清,ELISA检测抗体滴度,免疫印迹及免疫荧光分析抗体的免疫反应性。结果成功获得纯度达95%的重组Hcp1蛋白,该蛋白免疫小鼠后获得的抗血清具有较好的特异性和较高的抗体滴度(1∶512000),表现出良好的免疫原性和免疫反应性。结论成功制备了具有生物学活性的Hcp1重组蛋白及其抗血清。 展开更多

关键词 类鼻疽杆菌 Ⅵ型分泌系统蛋白 溶血素共调节蛋白1 重组表达

下载PDF 职称材料

鸭疫里默氏杆菌假定溶血素相关蛋白基因Riean_0415的原核表达及溶血活性检测 被引量：2

10

作者 姜盼 孙冰清 +5 位作者 崔俊生 陶敏捷 丁云竹 薛亚飞 刘光清 胡青海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第2期31-34,共4页

为了分析鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)假定的含CBS结构域的溶血素相关蛋白(hypothetical hemolysinrelated protein,HRP)的功能,本研究根据血清10型鸭疫里氏杆菌HXb2株Riean_0415基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采... 为了分析鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)假定的含CBS结构域的溶血素相关蛋白(hypothetical hemolysinrelated protein,HRP)的功能,本研究根据血清10型鸭疫里氏杆菌HXb2株Riean_0415基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用PCR扩增了Riean_0415基因,并进行了序列测定与分析。然后将Riean_0415基因克隆到原核表达载体p ET-43.1a,再用亲和层析纯化获得诱导表达的重组蛋白r HRP。溶血活性检测结果表明表达的重组蛋白r HRP具有裂解鸭红细胞的活性。本研究结果为进一步研究r HRP蛋白的功能和鸭疫里默氏杆菌的溶血机制等奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 溶血素相关蛋白 原核表达 溶血活性检测

下载PDF 职称材料

2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备 被引量：1

11

作者 韩明月 潘秀珍 +3 位作者 邵珠卿 葛俊超 王长军 唐家琪 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期927-930,共4页

目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.col... 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猪链球菌 溶血素样蛋白 克隆 表达

下载PDF 职称材料

利用Red重组系统敲除鼠伤寒沙门氏菌Ⅵ型分泌系统相关基因 被引量：2

12

作者 王萍 董俊芳 邹清华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2529-2536,共8页

【背景】沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,可引起广泛的胃肠炎以及伤寒、副伤寒,其致病机制一直未被阐明。基因敲除技术在研究沙门氏菌致病性方面发挥了重要作用,然而目前的敲除技术仍存在费时、成功率低的问题。研究发现鼠伤寒沙... 【背景】沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,可引起广泛的胃肠炎以及伤寒、副伤寒,其致病机制一直未被阐明。基因敲除技术在研究沙门氏菌致病性方面发挥了重要作用,然而目前的敲除技术仍存在费时、成功率低的问题。研究发现鼠伤寒沙门氏菌含有Ⅵ型分泌系统,其组成成分之一溶血素共调节蛋白(Hemolysin-coregulated protein,Hcp)可能在其致病过程中发挥了重要作用。【目的】拟通过对3个编码Hcp蛋白的基因进行敲除,在鼠伤寒沙门氏菌中建立一套方便快捷的重组系统,从而用于沙门氏菌致病性的研究。【方法】以pKD4为模板,扩增两端带有目的基因同源序列的卡那霉素抗性基因片段,将片段导入含重组酶系统的目的菌,重组后再导入质粒pCP20消除抗性基因片段,达到无痕敲除的效果。【结果】对3个单独的hcp基因及其组合进行了敲除,得到了所需的基因缺失株,并总结出了一些实验过程中可能遇到的问题的解决方案。【结论】Red重组系统可用于鼠伤寒沙门菌的基因敲除,通过优化同源片段的长度、PCR模板浓度、L-阿拉伯糖加入时间、实验过程中的温度等实验条件,提高Red重组系统在沙门氏菌中的重组效率。此方法简单、快速,重组效率高,值得推广。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 Ⅵ型分泌系统 溶血素共调节蛋白 RED重组系统

原文传递