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1种植物瞬时表达捻转血矛线虫氨基肽酶基因和Hc23基因方法的建立
1
作者 叶莉莎 张挺 +3 位作者 廖聪 李婷婷 田振东 胡敏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2420-2426,共7页
为建立利用植物细胞瞬时表达反刍动物寄生线虫捻转血矛线虫优势抗原的方法,选取了氨基肽酶基因Hc-ap-10和优选抗原分子基因Hc23作为目标基因,将经过密码子优化的Hc-ap-10(AP10^(op))和Hc23分别插入pH7lic-EGFP表达载体并在N、C两端均添... 为建立利用植物细胞瞬时表达反刍动物寄生线虫捻转血矛线虫优势抗原的方法,选取了氨基肽酶基因Hc-ap-10和优选抗原分子基因Hc23作为目标基因,将经过密码子优化的Hc-ap-10(AP10^(op))和Hc23分别插入pH7lic-EGFP表达载体并在N、C两端均添加核定位信号(nuclear localization sequence,NLS),使用电转法将pH7dNLSAP10^(op)和pH7dNLSHc23分别转入GV3101根癌农杆菌中,随后将根癌农杆菌悬液侵染本氏烟草,最后通过荧光显微镜观察目标蛋白定位情况,并提取侵染烟草叶片总蛋白,使用Western blot检测蛋白的表达量。结果显示,成功构建了植物双元表达载体pH7dNLSAP10^(op)和pH7dNLSHc23,荧光显微镜观察发现在目的基因N、C两端添加了核定位信号后的质粒转化根癌农杆菌。该方法外源表达的膜蛋白pH7dNLSAP10^(op)和pH7dNLSHc23都成功表达在本氏烟草叶片的细胞核上,Western blot也成功检测到Hc23和AP10^(op)蛋白,且Hc23蛋白的表达水平相对较高。结果表明,添加了核定位信号能成功将目的蛋白表达在植物细胞核上;密码子优化有利于大分子蛋白的高效表达,但对于一些相对分子质量相对较小的蛋白可能是非必要的。该研究成功将2种抗原分子表达在植物细胞中,为后续疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 瞬时表达 捻转血矛线虫 氨基肽酶 hc23基因 核定位信号 根癌农杆菌 本氏烟草
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