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褐黄血蜱的形态学与分子生物学鉴定 被引量:13
1
作者 严芬 程天印 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期912-916,共5页
鉴定采自河南信阳、湖南华容、山西太谷刺猬、犬的蜱。借助体视显微镜对蜱样进行形态观察;克隆、分析其COX1与ITS1序列,对比分析同源性并构建系统发生树。形态学鉴定和分子生物学鉴定结果表明,采自河南信阳、湖南华容、山西太谷刺猬、... 鉴定采自河南信阳、湖南华容、山西太谷刺猬、犬的蜱。借助体视显微镜对蜱样进行形态观察;克隆、分析其COX1与ITS1序列,对比分析同源性并构建系统发生树。形态学鉴定和分子生物学鉴定结果表明,采自河南信阳、湖南华容、山西太谷刺猬、犬体表的蜱均为褐黄血蜱。湖南、河南、山西也成为褐黄血蜱的分布地。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 形态学鉴定 COX1 ITS1 分子生物学鉴定 系统发生树
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褐黄血蜱唾液菌群结构分析 被引量:10
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作者 和小明 唐欢 程天印 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期588-590,共3页
为了解褐黄血蜱唾液内细菌的种类和传播途径,本研究分别提取褐黄血蜱饱血、半饱血的蜱虫及其唾液细菌总DNA,以其为模板,以通用引物扩增细菌16S r DNA V3区,并对其进行序列分析。结果表明,唾液内优势菌序列分别与狡诈球菌、鞘氨醇单胞菌... 为了解褐黄血蜱唾液内细菌的种类和传播途径,本研究分别提取褐黄血蜱饱血、半饱血的蜱虫及其唾液细菌总DNA,以其为模板,以通用引物扩增细菌16S r DNA V3区,并对其进行序列分析。结果表明,唾液内优势菌序列分别与狡诈球菌、鞘氨醇单胞菌属、立克次体、不可培养的细菌序列高度相似。虫体的优势菌序列与葡萄球菌属、立克次体、柯克斯体属的序列相似。饱血、半饱血蜱的唾液菌群结构存在一定差异,而蜱虫与其唾液的菌群结构差异很大。本研究表明褐黄血蜱唾液含条件致病菌,有经唾液传播疾病的潜在风险。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 PCR-DGGE 唾液 菌群
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不同地区褐黄血蜱的基因变异及遗传进化分析 被引量:8
3
作者 李中波 尧国民 +4 位作者 罗维 王湘 程天印 刘国华 侯强红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期2150-2159,共10页
为探究不同区域褐黄血蜱的基因变异情况及其遗传进化关系,试验以采集自湖南、河南省的20只褐黄血蜱为研究对象,通过PCR扩增其内转录间隔区Ⅱ(ITS-2)和烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nad1)基因序列,并对所获序列进行基因变异分析;在所获ITS-2和nad... 为探究不同区域褐黄血蜱的基因变异情况及其遗传进化关系,试验以采集自湖南、河南省的20只褐黄血蜱为研究对象,通过PCR扩增其内转录间隔区Ⅱ(ITS-2)和烟酰胺脱氢酶亚基Ⅰ(nad1)基因序列,并对所获序列进行基因变异分析;在所获ITS-2和nad1基因序列的基础上,对不同地区褐黄血蜱的遗传进化关系进行分析,并利用ITS-2和nad1基因序列分别构建褐黄血蜱的系统进化树。结果显示,褐黄血蜱ITS-2基因序列长度均为1160 bp,nad1基因序列长度均为285 bp;两省褐黄血蜱ITS-2及nad1基因的种内差异分别为0~1.9%和0~0.4%;湖南省褐黄血蜱的种内差异分别为0~1.4%和0~0.4%,而河南省的种内差异分别为0~1.2%和0~0.4%;两省褐黄血蜱ITS-2及nad1基因的种间差异分别为37.0%~52.0%和13.6%~24.8%。系统进化树结果显示,所有来自于两省的褐黄血蜱共处于同一分支上。结果表明,来自于两省的褐黄血蜱之间均存在基因变异的现象,但湖南省褐黄血蜱的基因变异程度和遗传多样性均高于河南省;两省褐黄血蜱之间的亲缘关系较近,暗示两省褐黄血蜱之间有基因交流,未出现遗传分化。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 ITS-2基因 nad1基因 基因变异 遗传进化
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褐黄血蜱脂肪酸结合蛋白对褐黄血蜱卵及其原生质蛋白影响的研究
4
作者 王兰兰 刘金宝 程天印 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期342-349,共8页
为了解蜱类脂肪酸结合蛋白(FABP)及其基因的结构和功能,本研究基于褐黄血蜱转录组文库中的Contig 879序列设计引物,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增其两翼缺失部分,拼接后得到编码褐黄血蜱FABP (HfFABP)的全长cDNA序列;采用qPCR法... 为了解蜱类脂肪酸结合蛋白(FABP)及其基因的结构和功能,本研究基于褐黄血蜱转录组文库中的Contig 879序列设计引物,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增其两翼缺失部分,拼接后得到编码褐黄血蜱FABP (HfFABP)的全长cDNA序列;采用qPCR法检测该基因在褐黄血蜱的不同发育阶段、不同组织器官中的转录水平;采用平行反应监测(PRM)法分析HfFABP dsRNA干扰对褐黄血蜱产卵和孵化,以及卵原生质蛋白的影响。结果显示,HfFABP的cDNA全长1 443 bp,ORF长396 bp,编码132个氨基酸的多肽。HfFABP基因在雌蜱中的转录水平高于幼蜱、若蜱和雄蜱;在蜱的卵巢、中肠和体壳中的转录水平高于其在唾液腺中的转录水平;吸血使HfFABP基因的转录水平升高。HfFABP dsRNA干扰使蜱产卵减少,其中约30%的卵大小不均、蜡质增多、塌瘪易裂;表观正常的卵孵化率降低,原生质中的FABP、卵黄蛋白原(Vitellogenin)、弹性蛋白酶抑制剂(Neutrophil elastase inhibitor)、天冬氨酸蛋白酶(Aspartic protease)和热休克蛋白83 (Heat shock protein 83)等12种蛋白的丰度大幅下降(P<0.01、P<0.05)。上述结果首次表明HfFABP在蜱卵发育过程中发挥重要作用,本研究为HfFABP在抑制雌蜱生殖中的应用提供科学依据。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 脂肪酸结合蛋白(FABP) cDNA末端快速扩增技术(RACE) 平行反应监测(PRM)
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原核表达的褐黄血蜱唾液腺蛋白和铁蛋白1的免疫保护效果评价
5
作者 陈玲 陈浩 +4 位作者 岳婵娟 马锐 范雪阳 刘颂蕊 杨光友 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期688-697,共10页
旨在获得褐黄血蜱重组蛋白(rHfFer1和rHfAV422)并评价其作为抗蜱疫苗的免疫保护效果。通过原核表达获得rHfFer1和rHfAV422,然后将22只新西兰兔随机分为3组(皂素对照组和两个免疫组),其中皂素对照组6只,两个免疫组各8只,所有兔均免疫两次... 旨在获得褐黄血蜱重组蛋白(rHfFer1和rHfAV422)并评价其作为抗蜱疫苗的免疫保护效果。通过原核表达获得rHfFer1和rHfAV422,然后将22只新西兰兔随机分为3组(皂素对照组和两个免疫组),其中皂素对照组6只,两个免疫组各8只,所有兔均免疫两次,首免14 d后同等剂量进行二免,二免后一周感染幼蜱,根据蜱的饱血率和蜕皮率为指标评估抗蜱效果。结果显示,rHfFer1和rHfAV422免疫组的饱血率和蜕皮率与对照组均存在显著差异(P<0.05),计算得出rHfFer1和rHfAV422的抗蜱效果分别为68.06%和50.00%。研究结果表明,rHfFer1和rHfAV422可以作为抗蜱疫苗研发的候选抗原。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 铁蛋白1 Fer1 唾液腺蛋白 AV422 重组蛋白 抗蜱效果
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浙江省硬蜱科一新纪录种的形态学与分子生物学鉴定 被引量:6
6
作者 刘营 侯娟 +9 位作者 李天奇 贯长辉 吴雪 吴红照 凌锋 张蓉 施旭光 任江萍 陈恩富 孙继民 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2020年第2期164-168,共5页
目的对浙江省2018年蜱类监测过程中发现的一新纪录种进行鉴定。方法蜱标本采自浙江省椒江区、安吉和浦江县的家养动物体表及草丛、灌木丛;先以形态学鉴定,然后用PCR方法扩增得到蜱的线粒体16S rRNA基因和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基... 目的对浙江省2018年蜱类监测过程中发现的一新纪录种进行鉴定。方法蜱标本采自浙江省椒江区、安吉和浦江县的家养动物体表及草丛、灌木丛;先以形态学鉴定,然后用PCR方法扩增得到蜱的线粒体16S rRNA基因和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因,测序后进行同源性分析。结果2018年浙江省共采集到该新纪录种13只,均为雄蜱,形态学鉴定为褐黄血蜱(Haemaphysalis flava Neumann,1897)。该蜱16S rRNA基因与已知褐黄血蜱(河南,KX450282.1)线粒体16S rRNA基因片段匹配度达100%,与其他血蜱属的同源性在86.9%~92.2%,分歧度在8.2%~14.7%之间;该蜱COⅠ基因与已知褐黄血蜱(湖南,KJ195464.1)线粒体COⅠ基因片段匹配度达99.8%,与其他血蜱属的同源性在84.7%~90.7%,分歧度在10.0%~17.2%之间。结论形态学和分子生物学鉴定方法相结合能更准确地鉴定蜱的种类。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 新纪录种 分子鉴定
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3种褐黄血蜱基因组DNA提取方法的比较
7
作者 焦雪丽 张鑫 +1 位作者 杨惠 苏婧 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2024年第4期354-358,共5页
目的在保持褐黄血蜱Haemaphysalis flava寄生蜱虫体形态完整的前提下,综合比较95℃水浴法、改良碱裂解法、离心柱法3种提取方法对蜱组织DNA提取质量的差异,筛选适用于蜱鉴定分型的高效稳定基因组DNA提取方法。方法取蜱标本的一只足作为... 目的在保持褐黄血蜱Haemaphysalis flava寄生蜱虫体形态完整的前提下,综合比较95℃水浴法、改良碱裂解法、离心柱法3种提取方法对蜱组织DNA提取质量的差异,筛选适用于蜱鉴定分型的高效稳定基因组DNA提取方法。方法取蜱标本的一只足作为实验样本,通过95℃水浴法、改良碱裂解法和离心柱法分别提取样品中基因组DNA,检测提取物浓度以及A260/A280和A260/A230比值,并通过PCR技术检测蜱分型相关基因16S rDNA(16S ribosoma DNA,16S核糖DNA)、ITS2(internal transcribed spacer 2,内转录间隔区2)的片段扩增效率,综合分析3种提取方法的优劣。多组之间使用单因素方差分析(ANOVA检验),两组之间比较采用t检验分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果3种提取方法均可获得足量的蜱基因组DNA,改良碱裂解法提取效率显著高于其他2种方法(P<0.05),A260/A280和A260/A230比值结果表明离心柱提取法获得的DNA纯度更高,进一步的PCR实验表明,在模板量一致的情况下,以离心柱法提取的DNA为模板扩增产生的16S rDNA、ITS2片段扩增效率更高,而以95℃水浴法提取的DNA为模板扩增产生的16S rDNA、ITS2片段效率较低。结论离心柱法是提取蜱基因组DNA高效且实用的方法,能够在保持虫体形态完整的情况下满足对寄生蜱进行后续基因分型实验的要求。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 寄生蜱 基因组DNA 核酸提取 PCR
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褐黄血蜱HSP70-b2及其类14-Mer肽的作用研究 被引量:1
8
作者 程天印 吴聪颖 +1 位作者 刘雨珂 段德勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2570-2580,共11页
褐黄血蜱(Haemaphysalis flava,H.flava)热休克蛋白70-b2(heat shock protein 70-b2,HSP70-b2)属于HSP70家族。为评估褐黄血蜱HSP70-b2的抗凝血活性、免疫原性及其类14-Mer肽的作用,本研究通过RACE技术扩增褐黄血蜱HSP70-b 2基因全长;... 褐黄血蜱(Haemaphysalis flava,H.flava)热休克蛋白70-b2(heat shock protein 70-b2,HSP70-b2)属于HSP70家族。为评估褐黄血蜱HSP70-b2的抗凝血活性、免疫原性及其类14-Mer肽的作用,本研究通过RACE技术扩增褐黄血蜱HSP70-b 2基因全长;定点突变其编码类14-Mer肽段序列获得HSP70-b2^(M)基因全长;分别构建原核表达质粒,经原核表达、镍柱层析纯化获得可溶性重组蛋白,体外凝血四项试验评估rHSP70-b2与rHSP70-b2^(M)的抗凝血活性;将重组蛋白与弗氏(不)完全佐剂按推荐剂量乳化,皮下免疫Sprague Dawley(SD)大鼠,间接ELISA检测血清抗体效价,探究rHSP70-b2与rHSP70-b2^(M)的免疫原性。结果显示:HSP70-b 2基因全长2413 bp,开放阅读框长1905 bp,编码蛋白中具有HSP70蛋白家族标签。成功将HSP70-b 2中编码类14-Mer肽段的核酸序列突变为编码14-Mer肽段的核酸序列。与对照组相比,rHSP70-b2和rHSP70-b2^(M)对凝血酶原时间(prothrombin time,PT)和活化部分凝血酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)无显著作用(P>0.05),但均可延长凝血酶时间(thrombin time,TT)和纤维蛋白原(FIB)凝血时间(P<0.05),且rHSP70-b2^(M)与rHSP70-b2的抗血凝效果相近(P>0.05)。大鼠血清中抗体效价随免疫次数的增加而提升,且rHSP70-b2诱导产生的抗体水平极显著高于rHSP70-b2^(M)(P<0.01)。综上表明:rHSP70-b2和rHSP70-b2^(M)在体外可通过延长凝血酶时间和降低纤维蛋白原含量发挥抗凝血作用;rHSP70-b2和rHSP70-b2^(M)均具有良好的免疫原性,可诱发体液免疫。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 HSP70-b2 定点突变 原核表达 抗凝活性 免疫原性
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褐黄血蜱中肠内容物菌群结构分析 被引量:5
9
作者 杨亚 刘进辉 程天印 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期270-273,共4页
为了解褐黄血蜱的带菌情况及其公共卫生意义,本研究在无菌条件下采集褐黄血蜱中肠内容物,提取细菌总DNA为模板,采用通用引物PCR扩增细菌16S r DNA V3区,经DGGE电泳回收DGGE 16个优势条带,并选取其中13个条带进行测序分析,结果显示,选取... 为了解褐黄血蜱的带菌情况及其公共卫生意义,本研究在无菌条件下采集褐黄血蜱中肠内容物,提取细菌总DNA为模板,采用通用引物PCR扩增细菌16S r DNA V3区,经DGGE电泳回收DGGE 16个优势条带,并选取其中13个条带进行测序分析,结果显示,选取条带分别与立克次氏体属、柯克斯氏体属、假单胞菌属、葡萄球菌属、大肠杆菌属等高度相似。采用传统细菌学方法,从中肠内容物培养分离到2株细菌,经鉴定其中1株为蜡样芽胞杆菌。对各地区褐黄血蜱半饱血雌成蜱和吸血雄成蜱中肠菌群结构分析结果表明其带菌情况基本相同,但饱血雌成蜱3个地区间具有较大的差异;而饱血雌蜱和其它两种状态下的蜱肠道菌群也有差异。贝纳柯克斯氏体、菊欧文氏菌、肺炎克雷伯菌及软腐果胶杆菌是褐黄血蜱中肠内的优势菌。本研究利用PCR-DGGE技术分析褐黄血蜱中肠内容物,为蜱传播疾病的研究奠定基础。 展开更多
关键词 PCR-DGGE 褐黄血蜱 菌群 中肠
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湖南和河南两省来源的褐黄血蜱遗传多样性及遗传进化关系分析 被引量:5
10
作者 李中波 尧国民 +4 位作者 罗维 王湘 程天印 刘国华 侯强红 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第19期90-95,共6页
为了探究湖南和河南两省来源的褐黄血蜱遗传多样性及遗传进化关系,试验采用PCR方法扩增来自于湖南、河南两省的20只褐黄血蜱的核糖体ITS-1及线粒体cox1基因序列,通过DNAStar、MegAlign、ClustalX、PhyML 3.0及MEGA 5.0软件分析其遗传多... 为了探究湖南和河南两省来源的褐黄血蜱遗传多样性及遗传进化关系,试验采用PCR方法扩增来自于湖南、河南两省的20只褐黄血蜱的核糖体ITS-1及线粒体cox1基因序列,通过DNAStar、MegAlign、ClustalX、PhyML 3.0及MEGA 5.0软件分析其遗传多样性及遗传进化关系。结果表明:褐黄血蜱ITS-1和cox1基因序列的长度分别为1500 bp和850 bp,经校准、对齐后的长度分别为1302 bp和800 bp;来自于湖南省褐黄血蜱ITS-1及cox1基因序列的种内差异分别为0~1.3%、0~0.4%;来自于河南省褐黄血蜱ITS-1、cox1基因序列的种内差异分别为0.1%~1.0%、0~0.1%,两省褐黄血蜱ITS-1、cox1基因序列的种内差异分别为0~1.3%、0~0.4%,种间差异分别为50.66%~52.77%、2.5%~14.3%;ITS-1基因序列的A+T和G+C含量分别为46.1%~46.3%、53.7%~53.9%;cox1基因序列的A+T和G+C含量分别为60.6%~62.6%、37.4%~39.4%;在构建的2个遗传进化树中,来自于湖南与河南两省的褐黄血蜱均处于一个分支上,两者亲缘关系较近。说明尽管来自于两省的褐黄血蜱之间均存在遗传变异现象,但亲缘关系较近,未出现遗传分化。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 ITS-1 cox1 遗传多样性 遗传进化
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褐黄血蜱卵蛋白质组分析 被引量:5
11
作者 徐律 程天印 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期627-636,共10页
本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和U... 本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和Uniprot数据库对各蛋白成分进行鉴定。结果显示:从褐黄血蜱卵黄蛋白提取液中检出特异性肽段221条,由此鉴定蛋白53种,其中高可信蛋白12种,能够确定的功能蛋白有肌动蛋白(actin)和卵黄蛋白原Ⅱ(vitellogenin 2,Vg-2),且Vg-2与卵黄蛋白(vitellins, Vn)一级结构相同。蜱卵原生质所含蛋白较少;Vg-2是蜱卵内存在的唯一一种卵黄蛋白原。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 液相色谱-串联质谱 卵黄蛋白原 特异性肽段
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不同地区褐黄血蜱的单倍型多态性、遗传分化和种系发育关系分析
12
作者 李中波 侯强红 +1 位作者 舒鸣 程天印 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期60-66,共7页
为了探究不同地区褐黄血蜱的单倍型多态性、遗传分化和种系发育关系,本试验以采自于湖南、河南两省的褐黄血蜱(各10只,共20只)为研究对象,通过PCR扩增其细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cox1)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅳ(nad4)基... 为了探究不同地区褐黄血蜱的单倍型多态性、遗传分化和种系发育关系,本试验以采自于湖南、河南两省的褐黄血蜱(各10只,共20只)为研究对象,通过PCR扩增其细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cox1)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基Ⅳ(nad4)基因序列,对其单倍型多态性(Hd)、遗传分化和种系发育关系进行分析。结果显示,cox 1基因序列(849 bp)包含4个变异位点,5个单倍型(h=5,A1~A5,Hd=0.653),其基因分化系数(Gst)=0.061,遗传分化系数(Fst)=-0.047,基因流(Nm)=-5.625;nad 4基因序列(626 bp)包含3个变异位点,3个单倍型(h=3,B1~B3,Hd=0.363),其Gst=0.004,Fst=0.074,Nm=3.125;cox 1+nad 4基因序列包含7个变异位点,7个单倍型(h=7,C1~C7,Hd=0.768),其Gst=-0.010,Fst=-0.015,Nm=-16.560;在所构建的种系发育树中,20只褐黄血蜱均处于种系发育树的一个分支。结果表明,湖南、河南两省的褐黄血蜱个体之间虽表现出单倍型多态性,但它们之间具有较近的亲缘关系,尚未出现遗传分化。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 cox 1 nad 4 基因变异 单倍型多态性 遗传分化 种系发育关系
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褐黄血蜱雌蜱不同消化阶段中肠蛋白组学分析 被引量:3
13
作者 李中波 尧国民 +1 位作者 侯强红 程天印 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第2期607-618,共12页
本研究旨在探明4个时间段褐黄血蜱(采自刺猬体表)中肠蛋白质成分,揭示参与血餐消化的蛋白种类及其含量变化规律。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对采集于刺猬体表的4个时间段褐黄血蜱的中肠蛋白组成分进行检测。基于该蜱的唾液、中... 本研究旨在探明4个时间段褐黄血蜱(采自刺猬体表)中肠蛋白质成分,揭示参与血餐消化的蛋白种类及其含量变化规律。采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对采集于刺猬体表的4个时间段褐黄血蜱的中肠蛋白组成分进行检测。基于该蜱的唾液、中肠转录组翻译文库及Uniprot数据库,利用软件Mascot 2.2对所获肽段及蛋白质进行鉴定。结果显示:在褐黄血蜱中肠蛋白提取液中共检测出特异性肽段3046条,鉴定303种蛋白,其中271种为高可信蛋白;在所有的高可信蛋白中,23种含量较为丰富,125种在后期消化阶段(第2至第4阶段)的含量为0,123种的含量发生不同程度的变化(24种蛋白的含量变化明显,其中12种含量上升明显,12种含量下降明显)。确定148种高可信蛋白来自于刺猬血清,推断24种可信蛋白可能参与蜱虫对血餐的消化。 展开更多
关键词 液相色谱-串联质谱 褐黄血蜱 中肠蛋白
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褐黄血蜱卵蛋白的鉴定及在卵孵化过程中的量变 被引量:1
14
作者 徐义葳 李丹 程天印 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4410-4419,共10页
【目的】探明褐黄血蜱卵蛋白成分及其在胚胎发育过程中的作用,为筛选抗蜱生殖疫苗分子奠定基础。【方法】提取褐黄血蜱孵化0、7、14、21 d的卵蛋白,以过滤器辅助样品制备(filter-aided sample preparation, FASP)法酶解卵蛋白,液相色谱... 【目的】探明褐黄血蜱卵蛋白成分及其在胚胎发育过程中的作用,为筛选抗蜱生殖疫苗分子奠定基础。【方法】提取褐黄血蜱孵化0、7、14、21 d的卵蛋白,以过滤器辅助样品制备(filter-aided sample preparation, FASP)法酶解卵蛋白,液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)分离、检测酶解特异性肽段,搜索该蜱中肠转录组文库鉴定卵原生质中的蛋白,登录NCBI对各蛋白进行注释;以Maxquant计算各蛋白的iBAQ(intensity-based absolute quantification)和非标记定量(Label-free quantification, LFQ),分析各蛋白在不同孵化时间的相对丰度及其增减,并对高可信蛋白序列进行GO功能富集分析。【结果】本研究共检出特异性肽段1 044条,由此鉴定多肽291种,其中高可信的(unique peptides≥2)112种,但仅39种有相关文献。基于文献,按照功能将39种蛋白归类于酶、酶抑制剂、转运蛋白、热休克蛋白、细胞骨架蛋白及未知蛋白6类;酶、酶抑制剂、转运蛋白、热休克蛋白都有家族蛋白共存的情况。定量分析显示,在新产褐黄血蜱卵中,丰度最高的是Contig14782,其次为Contig6575。至孵化结束时,在20种高丰度蛋白中,1种(Contig2242)显著升高(P<0.05),14种显著下降(P<0.05),5种增减不显著。GO功能富集分析表明,本次鉴定的高可信蛋白主要定位于胞外区域,参与免疫调节过程,发挥结合蛋白质和RNA的作用。【结论】褐黄血蜱卵蛋白成分复杂、种类众多,包括酶、酶抑制剂、转运蛋白、热休克蛋白、细胞骨架蛋白等,其中酶是最多的一类。在孵化期间,绝大多数蛋白酶和酶抑制剂丰度显著下降。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 卵蛋白 液相色谱-串联质谱 定量分析
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褐黄血蜱产卵和孵化规律观察 被引量:2
15
作者 车瑞波 张清飞 赵瑜 《动物医学进展》 北大核心 2021年第8期68-72,共5页
褐黄血蜱是我国中东部各省、市、自治区的优势蜱种,其可携带多种病毒、细菌、支原体、螺旋体等病原,对人类健康和公共卫生安全构成潜在威胁。由于该蜱偏好于侵袭野生动物.尤其是刺猬,故长期被忽视。该论文对褐黄血蜱产卵和孵化进行观察... 褐黄血蜱是我国中东部各省、市、自治区的优势蜱种,其可携带多种病毒、细菌、支原体、螺旋体等病原,对人类健康和公共卫生安全构成潜在威胁。由于该蜱偏好于侵袭野生动物.尤其是刺猬,故长期被忽视。该论文对褐黄血蜱产卵和孵化进行观察,结果表明,褐黄血蜱卵呈椭圆形,其大小约535.63μm×361.56μm,重量0.064mg。26℃〜30℃均是褐黄血蜱产卵的适宜温度,在这些温度下,雌蜱产卵量与体重有正相关关系;产卵过程受培养温度、雌蜱体重影响较大。在26℃〜30℃下,孵化温度升高则孵化时间缩短。32℃不是孵化褐黄血蜱卵的最适温度。研究温度对黄血蜱产卵和孵化的影响,对建立实验种群、开展试验研究和防控实践具有重要意义。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 产卵 卵孵化 温度
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红原县龙日坝地区蜱类调查研究
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作者 赵晓东 李世林 +8 位作者 何小强 董丽娟 贾运强 王燕文 李小伟 益西拉姆 杨壮 何明珠 郝力力 《草学》 2021年第5期73-75,共3页
为了解红原县寄生蜱和游离蜱的种类及分布情况,为蜱的防控提供依据,本研究采用人工布旗法和体表检蜱法收集蜱标本,通过形态学和分子生物学鉴定种类。结果表明:红原县龙日坝地区存在嗜群血蜱和褐黄血蜱;藏绵羊体表带蜱指数为5;游离蜱平... 为了解红原县寄生蜱和游离蜱的种类及分布情况,为蜱的防控提供依据,本研究采用人工布旗法和体表检蜱法收集蜱标本,通过形态学和分子生物学鉴定种类。结果表明:红原县龙日坝地区存在嗜群血蜱和褐黄血蜱;藏绵羊体表带蜱指数为5;游离蜱平均密度指数为2.93只/(布旗100m·h),灌木草甸蜱密度最高,为7.2只/(布旗100m·h),亚高山草甸蜱密度其次,为1.6只/(布旗100m·h)。调查结果显示,放牧要远离灌木草甸,定期药浴或注射阿维菌素,可减少蜱传疾病的风险,降低藏绵羊死亡率。 展开更多
关键词 红原 布旗法 嗜群血蜱 褐黄血蜱
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褐黄血蜱cystatin基因全长的克隆及原核表达研究
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作者 和小明 刘磊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第23期13-16,20,265,共6页
为了探讨褐黄血蜱体内半胱氨酸蛋白抑制剂(cystatin)蛋白及其编码基因的情况,试验基于褐黄血蜱唾液腺转录组数据库中搜索的注释为cystatin的contig_43533序列设计引物,RACE扩增其5′端和3′端,拼接获得cDNA全长,利用生物信息学软件进行... 为了探讨褐黄血蜱体内半胱氨酸蛋白抑制剂(cystatin)蛋白及其编码基因的情况,试验基于褐黄血蜱唾液腺转录组数据库中搜索的注释为cystatin的contig_43533序列设计引物,RACE扩增其5′端和3′端,拼接获得cDNA全长,利用生物信息学软件进行分析;以饱血褐黄血蜱雌成虫全蜱总cDNA为模板,扩增cystatin-ORF,构建重组表达载体,原核表达、纯化制备cystatin重组蛋白。结果表明:褐黄血蜱cystatin cDNA全长635 bp,包含396 bp的开放阅读框架,编码一个含131个氨基酸残基的蛋白,原核表达可获得褐黄血蜱cystatin重组蛋白。说明褐黄血蜱cystatin蛋白能在大肠杆菌内以可溶性形式稳定表达。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 基因全长 克隆 原核表达 纯化
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褐黄血蜱Hf05基因的克隆及表达分析
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作者 匡利平 徐律 王晓君 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期568-572,共5页
目的对褐黄血蜱Hf05基因进行克隆及表达分析。方法基于褐黄血蜱中肠转录组文库中的Contig16575序列设计引物,RACE法扩增Hf05 cDNA全长,利用生物信息学软件进行分析;利用qRT-PCR分析褐黄血蜱Hf05基因在不同发育阶段、不同吸血状态下的雌... 目的对褐黄血蜱Hf05基因进行克隆及表达分析。方法基于褐黄血蜱中肠转录组文库中的Contig16575序列设计引物,RACE法扩增Hf05 cDNA全长,利用生物信息学软件进行分析;利用qRT-PCR分析褐黄血蜱Hf05基因在不同发育阶段、不同吸血状态下的雌成蜱和不同组织的表达水平。结果Hf05 cDNA全长1 058 bp,ORF长531 bp,编码176个氨基酸;其表达情况为:饱血雌成蜱>饱血若蜱>饱血幼蜱>雄成蜱(P<0.05),饱血雌成蜱>3/4饱血雌成蜱>1/2饱血雌成蜱>1/4饱血雌成蜱(P<0.05),饱血雌成蜱体壳>半饱血雌成蜱体壳>饱血雌成蜱唾液腺>半饱血雌成蜱唾液腺(P<0.05)。结论成功克隆褐黄血蜱Hf05基因,该基因编码176个氨基酸的Hf05蛋白,qRT-PCR检测Hf05基因在饱血褐黄血蜱雌成蜱高表达。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 Hf05 RACE QRT-PCR
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褐黄血蜱与铃头血蜱的分子生物学鉴定 被引量:6
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作者 高东亚 田俊华 +6 位作者 覃新程 王剑波 康雁君 张景山 周敦金 张居农 张永振 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2012年第4期280-284,共5页
目的建立2种形态学特征非常相近的褐黄血蜱及铃头血蜱的分子生物学鉴定方法,探讨它们的系统发生关系。方法在湖北省从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定完毕后,采用PCR方法从2种血蜱基因组中扩增12SrDNA、16SrDNA及线粒体细胞色素氧化酶亚... 目的建立2种形态学特征非常相近的褐黄血蜱及铃头血蜱的分子生物学鉴定方法,探讨它们的系统发生关系。方法在湖北省从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定完毕后,采用PCR方法从2种血蜱基因组中扩增12SrDNA、16SrDNA及线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因,测序后进行同源性分析,用PAUP4.0软件分别构建系统发生树并进行系统进化分析。结果 2种血蜱12SrDNA、16SrDNA及COⅠ基因之间的同源性分别为90.8%、90.4%和86.8%,湖北省采集的褐黄血蜱3个基因片段与已知褐黄血蜱的同源性分别为100%、99.5%和99.7%。用这2种蜱的12SrDNA、16SrDNA及COⅠ基因的核苷酸序列分别构建系统发生树,湖北省采集的褐黄血蜱与已知的褐黄血蜱聚在一起,褐黄血蜱及铃头血蜱均形成独立的分支,但用3个基因构建的系统发生树中血蜱属不同种间的亲缘关系不同。结论对于形态学特征相近蜱种的鉴定,在传统形态学分类的基础上结合分子生物学鉴定方法能更准确地鉴定蜱的种类,也能更好地了解其进化关系,为蜱传播疾病的预防控制提供依据。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 铃头血蜱 种类鉴定 系统发生分析
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新产褐黄血蜱卵原生质蛋白组成和状态研究
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作者 李丹 徐义葳 程天印 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第8期924-928,933,共6页
目的分析新产褐黄血蜱卵原生质蛋白及功能,揭示蜱胚发育的物质需求,为创新免疫控蜱策略奠定基础。方法采用LC/MS/MS技术,搜索唾液腺转录组文库鉴定褐黄血蜱卵原生质蛋白和高丰度卵成分。结果检获特异性肽段503条,由此鉴定多肽137条,高... 目的分析新产褐黄血蜱卵原生质蛋白及功能,揭示蜱胚发育的物质需求,为创新免疫控蜱策略奠定基础。方法采用LC/MS/MS技术,搜索唾液腺转录组文库鉴定褐黄血蜱卵原生质蛋白和高丰度卵成分。结果检获特异性肽段503条,由此鉴定多肽137条,高可信的82条,属于79种蛋白,其中34种已知功能的分别属于酶类、蛋白酶抑制剂、转运蛋白、蛋白合成与修饰、免疫相关蛋白等五类;序列比对表明,在抑制剂和转运蛋白两类中,成员有明显的家族性;定量分析显示,在卵蛋白中,丰度最高的蛋白是contig_43009+19714,另外三种分别为contig_42244+44787、contig_195、contig_12613,其丰度排名依次为第2、6、7。电泳显示,新鲜卵蛋白大小25-400 ku之间,但分布不均,在近120 ku、90 ku等9处形成浓染条带;切带分析显示,9个条带中的高丰度蛋白均为contig_43009、contig_19714、contig_42244、contig_44787等Vn片段,说明蜱卵产出时其内的Vn(或Vg)已降解成大小不同的肽段。结论新产褐黄血蜱卵原生质蛋白具有多样性、系统性和家族性。 展开更多
关键词 褐黄血蜱卵 LC/MS/MS 蛋白酶抑制剂
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