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AdTK治疗肺癌的实验研究 被引量：9
1
作者 李秋香 李冬田 +1 位作者 朱乃军 佟惠春 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期288-292,共5页
构建含HSV-TK基因的重组腺病毒AdTK,在两种肺癌细胞和鼠肺癌模型中对AdTK/GCV系统进行抑瘤实验研究。方法:采用同源重组法构建AdTK,用MTT法测定AdTK/GCV系统对H460、PG49人肺癌细胞的生长抑制率,建立T739鼠肺癌模型,观察AdTK/GCV系统对... 构建含HSV-TK基因的重组腺病毒AdTK,在两种肺癌细胞和鼠肺癌模型中对AdTK/GCV系统进行抑瘤实验研究。方法:采用同源重组法构建AdTK,用MTT法测定AdTK/GCV系统对H460、PG49人肺癌细胞的生长抑制率,建立T739鼠肺癌模型,观察AdTK/GCV系统对瘤体大小及鼠存活期的影响。结果:成功构建AdTK,AdTK转染H460、PG49细胞后对细胞抑制率随AdTK、GCV及药物作用时间的增加而增高,有显著性差异,小鼠体内实验中观察到AdTK/GCV系统对鼠肺癌有明显生长抑制作用,且明显延长了小鼠的存活期。结论:本文建立的AdTK/GCV系统在体内外对肺癌细胞均有明显抑制作用,为AdTK用于基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒 hsv-tk基因 肿瘤 治疗 基因治疗
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Hsv-tk、重组人IL-2、TNF-α融合基因表达载体的构建与鉴定 被引量：5
2
作者 鱼兵 成诗银 张惠中 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期1019-1023,共5页
目的:构建含有Hsvtk、重组人IL2rhIL2、TNFαrhTNFα不同组合融合基因的逆转录病毒表达载体。方法:经分离人外周血单个核细胞peripheralbloodmononuclearcellPBMC总RNA,以反转录聚合酶链反应reversetranscriptionpolymerasechainreactio... 目的:构建含有Hsvtk、重组人IL2rhIL2、TNFαrhTNFα不同组合融合基因的逆转录病毒表达载体。方法:经分离人外周血单个核细胞peripheralbloodmononuclearcellPBMC总RNA,以反转录聚合酶链反应reversetranscriptionpolymerasechainreactionRTPCR制备人IL2互补DNAcomplementaryDNAcDNA模板。分别以PCR方法扩增3种基因,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEMTEasy,挑取阳性克隆经鉴定后测序。将测序正确的各目的基因分别从测序载体相应酶切位点消化后,回收并纯化后与经相同双酶消化后的线性化PLXSN表达载体连接,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经筛选后随机挑取阳性菌落后,提取质粒酶切鉴定插入片段大小和位置以获得正确重组子。按上述定向克隆方法依次将各片段正向插入至PLXSN表达载体的多克隆位点间,以构建含不同融合基因的真核表达载体。结果:经限制性酶切分析及PCR方法鉴定,各插入基因及融合基因大小、位置、方向均正确无误。结论:Hsvtk、IL2、TNFα不同组合融合基因表达载体的成功构建为喉癌的基因治疗提供部分实验基础也为表达具有多功能活性的新型融合蛋白和发现细胞因子的新功能提供有利条件。 展开更多
关键词 hsv-tk基因 白细胞介素-2 肿瘤坏死因子-α 融合基因 载体 喉癌 基因治疗
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B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用 被引量：6
3
作者 王烈 卫立辛 +5 位作者 王飞 曹贵松 钱其军 杨广顺 郭亚军 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期229-232,共4页
目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88... 目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88细胞株建立乳腺癌动物模型 ,随机分为对照组、TK组、B7组及 TK/B7组 ,每组 2 0只。 2周后于瘤体内分别注射转染有空载体及不同的重组载体的乳腺癌细胞 ,3d后于腹腔内连续注射无环鸟苷 (GCV) 15 d(5 0 mg· kg- 1· d- 1 ) ,观察肿瘤体积、荷瘤生存时间的变化和组织病理改变。结果 :B7组、TK/B7组肿瘤内淋巴细胞浸润明显增多。与对照组相比 ,TK组、B7组肿瘤生长减缓 ,体积减小 ,荷瘤生存期延长 ,两组间均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,而 TK /B7组尤为显著 (P<0 .0 1) ;TK组与 B7组相比则无显著差异。 结论 :HSV- TK,B7基因联合治疗乳腺癌动物模型 ,能直接杀伤肿瘤 ,抑制肿瘤生长 ,延长荷瘤动物的生存期。 展开更多
关键词 基因治疗 乳腺癌 B7基因 hsv-tk基因
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HSV-tk/GCV自杀基因系统对骨肉瘤细胞体外杀伤效应 被引量：6
4
作者 胡铁山 李贵涛 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第3期204-207,共4页
目的 :观察HSV tk/GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS 2的体外杀伤作用 .方法 :构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN ,在lipofectamine2 0 0 0介导下转染PA31 7包装细胞 ,G4 1 8筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,用NIH3T3测定病毒滴度 ,将重组病... 目的 :观察HSV tk/GCV系统对骨肉瘤细胞SAOS 2的体外杀伤作用 .方法 :构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN ,在lipofectamine2 0 0 0介导下转染PA31 7包装细胞 ,G4 1 8筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,用NIH3T3测定病毒滴度 ,将重组病毒感染人骨肉瘤细胞SAOS 2 ,G4 1 8筛选出抗性克隆命名为SAOS/tk ,以RT PCR及Southernblot检测tk基因的整合及表达 .观察tk基因修饰细胞生长状况及MTT法观察前药对tk基因修饰骨肉瘤细胞的杀伤效应 .结果 :RT PCR及South ernblot分析证明tk基因在人骨肉瘤细胞系SAOS 2中有整合及表达 ;SAOS/tk与未转基因的原肿瘤细胞相比 ,两者生长速度及形态结构无明显差别 ;在前药敏感性试验中 ,GCV对SAOS/tk细胞的杀伤作用十分明显 ,半数致死量约为 1mg/L ,而亲本细胞SAOS 2和空白质粒转染SAOS/0细胞 ,半数致死量大于 1 0 0mg/L .tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗 ,SAOS/tk占混合细胞总数的 2 0 %时即可杀伤约 5 0 %的混合培养细胞 .结论 :人骨肉瘤细胞系SAOS 2对HSV tk/GCV系统高度敏感 ,并且有明显的旁观者效应 。 展开更多
关键词 骨肉瘤 hsv—tk基因 基因治疗
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携带HSV-TK基因的人肝癌特异性EB病毒表达载体的构建及临床意义 被引量：3
5
作者 胡俊波 吴在德 +1 位作者 颜子颖 侯云德 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期153-154,共2页
构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重组ＤＮＡ技术将ＨＳＶ－ＴＫ基因插入到含有及不含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体ＰＥＢＡＦ５．１、ｐＤＲ２中，并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。结果ＴＫ... 构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重组ＤＮＡ技术将ＨＳＶ－ＴＫ基因插入到含有及不含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体ＰＥＢＡＦ５．１、ｐＤＲ２中，并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。结果ＴＫ基因成功地克隆入ＰＥＢＡＦ５．１及ｐＤＲ２中。结论含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体是原发性肝癌基因治疗中新型、理想的候选载体之一。 展开更多
关键词 肝肿瘤 EB病毒 载体 hsv-tk基因
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放射诱导HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达的研究 被引量：5
6
作者 康保国 王卫东 +1 位作者 陈正堂 李德志 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第6期505-507,510,共4页
目的构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性。方法利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载... 目的构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性。方法利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆,转染细胞给予2Gy X线照射后,检测照射前后不同时相点细胞内TK表达情况,及不同浓度前药GCV对转染重组载体和对照载体的肺癌细胞的生长抑制率。结果照射后转染同步放大重组载体的细胞内TK的表达明显强于对照组,且随时间的推移而逐渐增强,以照射后16h最为明显。同一浓度的GCV对转染同步放大载体的A549细胞的抑制率明显高于对照组和未转染组,IC50也明显低于对照组和未转染组。结论同步放大基因电路明显增强了靶细胞内HSV-TK基因的表达,进一步完善了放射-基因治疗这一新的肿瘤治疗模式。 展开更多
关键词 肺肿瘤 基因电路 hsv-tk基因 放射基因-治疗
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HSV-tk基因/GCV系统治疗鼠脑胶质瘤实验研究 被引量：3
7
作者 李承晏 李涛 +4 位作者 余绍祖 曾庆杏 王镇涛 夏明珠 李茂进 《卒中与神经疾病》 2000年第1期10-13,共4页
目的 :探索 HSV-tk基因 /GCV系统对大鼠脑胶质瘤的体内外治疗效果。方法 :用 PA3 1 7细胞包装STK质粒 ,形成产病毒细胞 PA3 1 7tk,产生假逆转录病毒颗粒 ,NIH3 T3细胞测定病毒滴度。96孔培养板接种 2 4孔C6细胞 ,2 4孔 C6tk+细胞 ,4 8... 目的 :探索 HSV-tk基因 /GCV系统对大鼠脑胶质瘤的体内外治疗效果。方法 :用 PA3 1 7细胞包装STK质粒 ,形成产病毒细胞 PA3 1 7tk,产生假逆转录病毒颗粒 ,NIH3 T3细胞测定病毒滴度。96孔培养板接种 2 4孔C6细胞 ,2 4孔 C6tk+细胞 ,4 8小时后换入含 GCV的培养液 ,GCV浓度按 0、0 .2 5ug/ml、0 .5ug/ml、0 .75ug/ml、1 ug/ml、5ug/ml、1 0 ug/ml、1 0 0 ug/ml递增 ,每种浓度 3孔 ,5天后 MTT法测量细胞存活率。体外培养鼠胶质瘤细胞C6,立体定向注入鼠颅内 ,分别在第 1 0、1 6、2 5天 ,MRI测量胶质瘤大小、位置。实验组瘤内注入 2 0 ul病毒悬液 ,隔日再注入一次 ,对照组注射等体积生理盐水 ,次日起腹腔注射 GCV3 0 mg· kg- 1·day- 1 ,连续 1 2天 ,治疗后第 1 4天 ,MRI测量胶质瘤大小。结果 :转 tk基因后的胶质瘤细胞对 GCV高度敏感。 MRI显示将 tk基因导入颅内胶质瘤 ,GCV治疗后肿瘤明显减小或消失。结论 :HSV-tk基因 /GCV系统能有效杀伤脑胶质瘤细胞。 展开更多
关键词 hsv-tk基因 基因治疗 脑胶质瘤
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Hsv-tk、重组人TNF-α融合基因表达载体的构建及瞬时表达 被引量：4
8
作者 成诗银 鱼兵 张惠中 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第8期20-23,28,共5页
目的 :构建 pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体 ,观察其在喉癌细胞Hep - 2中的瞬时表达。方法 :应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体 pGEM -T -Easy测序 ,利用逆转录病毒载体PLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK -rhTNF -... 目的 :构建 pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体 ,观察其在喉癌细胞Hep - 2中的瞬时表达。方法 :应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体 pGEM -T -Easy测序 ,利用逆转录病毒载体PLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK -rhTNF -α并将其亚克隆至pEGFP -N3的EcoRI和BamHI位点间 ,成功构建表达载体 pEGFP -TK -rhTNF -α ,并在该载体转染人喉癌细胞Hep - 2后观察融合蛋白表达情况。结果 :酶切鉴定证实TK -rhTNF -α融合基因片段已克隆到pEGFP -N3的EcoRI和BamHI位点间 ,并在转染人喉癌细胞Hep - 2中观察到TK -rhTNF -α融合基因及绿色荧光蛋白的表达。结论 :pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体便于观察转染细胞中TK -rhTNF -α融合蛋白的表达情况及蛋白定位 。 展开更多
关键词 hsv-tk基因 肿瘤坏死因子-Α 融合基因 表达
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hTERT启动子调控TK基因靶向性杀伤鼻咽癌移植瘤的实验研究 被引量：5
9
作者 牟少凤 文忠 +3 位作者 郭梦和 谢民强 关小芳 申聪香 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期155-158,共4页
目的研究人端粒酶反转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统对鼻咽癌移植瘤的体内杀伤作用。方法采用培养细胞移植法,将人鼻咽癌细胞系C666-1接种于裸鼠腋部皮下,建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤... 目的研究人端粒酶反转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统对鼻咽癌移植瘤的体内杀伤作用。方法采用培养细胞移植法,将人鼻咽癌细胞系C666-1接种于裸鼠腋部皮下,建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型。将40只裸鼠随机分为5组:hTERTp/HSV-TK/PGL3/GCV组、CMV/HSV-TK/PGL3/GCV组、HSV-TK/PGL3/GCV组、GCV组及生理盐水组,每组8只。采用脂质体介导,进行瘤内直接注射,同时经腹腔给予GCV治疗,观察各组裸鼠生存状况及肿瘤相对体积、抑瘤率,并进行荷瘤裸鼠肝肾组织的常规病理检查。结果成功构建了C666-1裸鼠皮下移植瘤动物模型,hTERTp/HSV-TK/PGL3/GCV组移植瘤被明显抑制,抑瘤率达到45.51%,与HSV-TK/PGL3/GCV组、GCV组及生理盐水组(抑瘤率分别为5.52%、14.31%、0.03%)比较有显著性差异(P<0.01),肝肾病理检查发现,该组裸鼠肝肾均无明显病理学变化。CMV/HSV-TK/PGL3/GCV组的抑瘤率亦达到51.56%,但病理检查发现裸鼠出现肝肾毒性。结论hTERT启动子调控TK基因靶向治疗系统能够在体内特异性杀伤鼻咽癌移植瘤,而无明显全身毒副作用,是一种安全、有效的肿瘤靶向基因治疗系统,将为鼻咽癌临床基因治疗开辟新领域。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 肿瘤移植 hsv-tk基因 基因疗法 端粒 末端转移酶
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HSV-tk基因逆转录病毒重组体的构建与DNA序列分析 被引量：4
10
作者 陈建波 罗一鲁 +1 位作者 郭忠敏 陈系古 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第1期30-32,共3页
目的　构建含有单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (HSV1 tk)基因的逆转录病毒重组载体pLXSN TK。方法设计一对寡核苷酸引物 ,用PCR方法从质粒pHSV10 6中特异扩增HSV tk基因片段 ( 1168bp) ,分别用BamHI和Eco RI酶切后 ,定向连接到质粒pLXSN中 ... 目的　构建含有单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 (HSV1 tk)基因的逆转录病毒重组载体pLXSN TK。方法设计一对寡核苷酸引物 ,用PCR方法从质粒pHSV10 6中特异扩增HSV tk基因片段 ( 1168bp) ,分别用BamHI和Eco RI酶切后 ,定向连接到质粒pLXSN中 ,转化宿主菌TG1,分别用上述内切酶 ,PCR和DNA测序鉴定重组质粒。结果　酶切鉴定所切下的片段和PCR扩增的片段大小均与预计相符 ,测序结果与文献报道序列及预计结果一致 ,证实符合表达框架。结论　成功构建了HSV tk嵌合重组质粒pLXSN TK。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒属 胸苷激酶 hsv-tk基因 DNA序列 重组 质粒 pLXSN-tk 肿瘤 基因治疗
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逆转录病毒介导的HSV-TK基因对人骨肉瘤细胞的杀伤作用 被引量：3
11
作者 乔慧 丘钜世 朱全胜 《广东医学》 CAS CSCD 2001年第3期195-198,共4页
目的　探讨骨肉瘤基因治疗的可行性。方法　采用逆转录病毒介导的HSV -TK基因转移和GCV治疗的方法进行研究。结果　成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK ;采用DOTAP将其转入PA3 17细胞中进行包装 ,筛选 ,并进行病毒滴度测定... 目的　探讨骨肉瘤基因治疗的可行性。方法　采用逆转录病毒介导的HSV -TK基因转移和GCV治疗的方法进行研究。结果　成功构建含HyTK基因的重组逆转录病毒载体DORHyTK ;采用DOTAP将其转入PA3 17细胞中进行包装 ,筛选 ,并进行病毒滴度测定、收获病毒上清体外感染骨肉瘤细胞株OS73 2和SAOS -2。分别用PCR和RNA斑点杂交的方法证明假病毒中不含有复制活性病毒 ,HSV -TK基因已整合到宿主细胞基因组中 ,并获得表达。MTT比色法测定结果显示GCV对OS73 2TK和SAOS -2TK细胞均有明显的杀伤作用 ,且前者强于后者。旁观者效应在高细胞密度接种条件下强于低细胞密度 ,在SAOS -2细胞中的作用强于OS73 2。结论　HSV 展开更多
关键词 骨肿瘤 基因治疗 单纯疱疹病毒胸苷激酶-丙氧鸟苷 骨肉瘤 hsv-tk基因 逆转录病毒
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包载携有HSV-TK基因腺病毒PLG微球的制备 被引量：4
12
作者 刘自明 严律南 李馨筱 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2007年第4期399-402,共4页
目的探讨载病毒生物降解微球作为肝癌基因靶向治疗载体的可行性。方法用挥发溶媒聚合法制载重组病毒聚乳酸乙二醇〔poly(lactic/glycolic),PLG〕微球,观测其包封率、释放规律及释放病毒的活性。结果PLG微球包封率为19.3%,载病毒微球在1... 目的探讨载病毒生物降解微球作为肝癌基因靶向治疗载体的可行性。方法用挥发溶媒聚合法制载重组病毒聚乳酸乙二醇〔poly(lactic/glycolic),PLG〕微球,观测其包封率、释放规律及释放病毒的活性。结果PLG微球包封率为19.3%,载病毒微球在100h内释放病毒量接近50%,总的释放时间超过200h,释放出来的病毒保持活性。结论用PLG微球包载重组腺病毒,病毒释放出来后具有很高的活性,其作为肝癌的基因治疗载体具有较好的研究前景。 展开更多
关键词 基因治疗 生物降解微球 腺病毒 hsv-tk基因 肝癌
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HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究 被引量：4
13
作者 王继兵 葛坚 +2 位作者 段山 刘炳乾 郑建樑 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第3期281-284,共4页
目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观... 目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是HSV-TK/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 旁观者效应 hsv—tk基因 TENON囊 成纤维细胞 人
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腺病毒介导的HSV-tk体外抗喉癌作用 被引量：1
14
作者 陈立 李凡 +3 位作者 易世红 黄红兰 赵春燕 魏强 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期581-583,共3页
目的 :观察 HSV- tk/ GCV系统对喉癌细胞的杀伤作用。方法 :将带有报告基因 Lac Z的 5型缺陷性腺病毒载体 Ad CMVL ac Z感染喉癌细胞 Hep- 2 ,X- gal染色 ,测定腺病毒的转染率。利用同源重组技术构建含 HSV- tk基因的重组腺病毒载体 Ad ... 目的 :观察 HSV- tk/ GCV系统对喉癌细胞的杀伤作用。方法 :将带有报告基因 Lac Z的 5型缺陷性腺病毒载体 Ad CMVL ac Z感染喉癌细胞 Hep- 2 ,X- gal染色 ,测定腺病毒的转染率。利用同源重组技术构建含 HSV- tk基因的重组腺病毒载体 Ad CMVtk。Ad CMVtk感染 Hep- 2细胞后 ,加入 10 mg/ LGCV,观察瘤细胞存活率及旁观者效应。结果 :随着腺病毒感染复数量 (multiplicity of infection,MOI)增加 ,对 Hep- 2细胞转染率亦增加 ,10 0 %转染所需的 MOI为 2 0 0。 Ad CMVtk/ GCV对 Hep- 2细胞的杀伤强度与 Ad CMVtk量呈正向关系 ,即有浓度依赖性。此杀伤作用存在旁观者效应 ,但较弱。结论 :腺病毒介导的 HSV- tk/ 展开更多
关键词 腺病毒 hsv-tk基因 喉癌
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HER2靶向载HSV-TK基因纳米泡诱导胃癌细胞凋亡的体外研究 被引量：4
15
作者 辛莹 周厚妊 +3 位作者 张月 刘慧 黄驰 刘治军 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第2期106-110,116,共6页
目的探讨HER2靶向载单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因/AGM-CBA的全氟己烷纳米泡(tHAHT NB)的体外寻靶能力及核定位效应,以及在超声介导纳米泡破坏技术下tHAHT NB抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。材料与方法将实验分为MGC803组及... 目的探讨HER2靶向载单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因/AGM-CBA的全氟己烷纳米泡(tHAHT NB)的体外寻靶能力及核定位效应,以及在超声介导纳米泡破坏技术下tHAHT NB抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。材料与方法将实验分为MGC803组及NCI-N87组,通过激光共聚焦显微镜检测tHAHT NB的体外靶向情况,使用ImageJ软件半定量分析比较两组细胞周围累计荧光密度,分析NCI-N87组累计荧光密度与细胞数的相关性;通过激光共聚焦显微镜检测tHAHT NB对NCI-N87细胞的核定位效应;将实验分为tHAHT NB+US组、tHAHT NB组、tHER2 NB组、NB组、US组、正常细胞组及空白组,以MTT法观察细胞活性、Annexin V检测细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜下显示与MGC803组相比,NCI-N87组细胞周围可见明显红色荧光;半定量分析显示,与MGC803组相比,NCI-N87组累计荧光密度增高,且与细胞数目呈正相关(r=0.900,P<0.01);核定位实验显示NCI-N87组细胞核周围可见明显红色荧光。MTT法及Annexin V检测发现,与tHAHT NB组、tHER2 NB组、NB组及US组相比,tHAHT NB+US组细胞活性明显减低,细胞凋亡率显著增高。结论tHAHT NB可以靶向识别NCI-N87细胞,并具有核定位效应;联合超声介导纳米泡破坏技术能明显抑制NCI-N87细胞活性,并诱导细胞凋亡,为胃癌的非侵入性治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 胃肿瘤 纳米粒子 超声检查 hsv-tk基因 核定位效应 细胞凋亡 体外研究
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HSV-tk基因/GCV系统治疗肿瘤的旁观者效应与缝隙连接关系的研究 被引量：2
16
作者 曹剑峰 汪超英 +5 位作者 张涛 王志友 李涛 李玲莉 李承晏 余绍祖 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期21-23,共3页
目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－tk）基因／丙氧鸟苷（GCV）系统杀伤肿瘤细胞时旁观者效应与细胞间缝隙连接的关系。方法 用PA317细胞包装STK质粒（逆转录病毒载体介导的HSV-tk基因），形成假逆转录病毒颗粒，转染有缝隙连接的大... 目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－tk）基因／丙氧鸟苷（GCV）系统杀伤肿瘤细胞时旁观者效应与细胞间缝隙连接的关系。方法 用PA317细胞包装STK质粒（逆转录病毒载体介导的HSV-tk基因），形成假逆转录病毒颗粒，转染有缝隙连接的大鼠胶质瘤细胞C6和无缝隙连接的入宫颈癌细胞 Hela，制成 C6 tk+和 Helatk+细胞，将不同比例的C6和 C6 tk+、Hela和 Hela tk+细胞混合，每种比例8孔，培养 24h后 4孔加入含0．5μg/mlGCV的培养基，4孔作对照，6d后用MTT法测量细胞存活率。在两个培养皿中放入周围粘有33mm高滤纸的载玻片，分别接种 C6、C6 tk+细胞。细胞 80%汇合后将载玻片互换，并加入含0．5μg/ml GCV的培养基，6d后观察细胞形态。结果C6细胞组存在旁观者效应，Heal细胞组不存在旁观者效应。培养皿中tk+细胞大部分被杀死,tk-细胞无变化。结论HSV-tk基因/GCV系统杀伤肿瘤细胞时旁观者效应与细胞间缝隙连接有关。 展开更多
关键词 hsv-tk基因 基因治疗 肿瘤 旁观者效应 缝隙连接 GCV系统
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转TK基因的人结肠癌细胞对多种原药敏感性的研究 被引量：2
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作者 蒋琼 戈凯 +2 位作者 许德华 郑仲承 刘新垣 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第3期270-275,共6页
构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后，感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比，生长曲线无明显差... 构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后，感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比，生长曲线无明显差异，细胞形态亦无改变．细胞毒试验证明LoVo／LTKSN对GCV的敏感性很高，半杀伤浓度IC50为0.5μmol/L，比野生型细胞提高了4000倍以上．三种不同的原药GCV，ACV和BVDU对LoLo／LTKSN具有效果不等的杀伤作用．BVDU和GCV联合作用效果更好．旁杀伤效果十分明显，低浓度GCV就可以将合10%LoVo／LTKSN的混合细胞中的大部分肿瘤细胞杀死． 展开更多
关键词 结肠肿瘤 癌 癌细胞 hsv-tk基因 基因治疗
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利用HSV-TK基因治疗肝癌的离体研究 被引量：3
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作者 戎煜 安威 +1 位作者 高鼎成 杜国光 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期268-271,共4页
利用ＤＮＡ重组技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因克隆至逆转录病毒载体（ＸＭ－６／ＴＫ）。经ＰＡ３１７细胞包装后，转染人肝癌细胞ＨｅｐＧ２。结果显示，ＸＭ－６／ＴＫ转染ＨｅｐＧ２细胞与野生型相比，其生长特点和细胞形态未有改变。给... 利用ＤＮＡ重组技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因克隆至逆转录病毒载体（ＸＭ－６／ＴＫ）。经ＰＡ３１７细胞包装后，转染人肝癌细胞ＨｅｐＧ２。结果显示，ＸＭ－６／ＴＫ转染ＨｅｐＧ２细胞与野生型相比，其生长特点和细胞形态未有改变。给予抗病毒药物－环氧鸟苷（Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）后，转染细胞生长受到严重抑制，细胞数量明显降低。细胞学检查证实，ＧＣＶ处理后，转染细胞的死亡率显著增加。本结果提示。 展开更多
关键词 hsv-tk基因 基因治疗 人 肝癌细胞
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逆转录病毒介导的HSV-TK基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用 被引量：3
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作者 王毅 胡志前 +3 位作者 徐学俊 王元和 王强 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期328-330,共3页
目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV- TK)基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用。方法 :应用 PA317细胞包装的逆转录病毒介导的 HSV - TK基因系统 ,在体外以逆转录病毒上清感染法将 TK基因导入 MKN2 8人胃癌细胞 ,... 目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV- TK)基因系统对人胃癌细胞的转染及杀伤作用。方法 :应用 PA317细胞包装的逆转录病毒介导的 HSV - TK基因系统 ,在体外以逆转录病毒上清感染法将 TK基因导入 MKN2 8人胃癌细胞 ,并初步观察更昔洛韦 (GCV )对转染 TK基因的 MKN2 8胃癌细胞的杀伤作用。 结果 :TK基因可成功转导入MKN2 8细胞 ,且对细胞的生长状态无明显影响 ,但对 GCV的敏感性却显著增加 ;同时还观察到显著的“旁观者效应”。结论 :逆转录病毒介导的 HSV- TK系统对人胃癌细胞有较高的转染效率 ,GCV对转染阳性的胃癌细胞有显著的杀伤作用。 展开更多
关键词 胃肿瘤 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 更昔洛韦 基因治疗 基因转染 逆转录病毒 hsv-tk基因
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阳离子脂质体介导HSV-TK基因治疗人脑胶质瘤的实验研究 被引量：3
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作者 苏君 张学新 +1 位作者 于雁 肖宏 《中国神经肿瘤杂志》 2004年第1期32-36,共5页
颅内恶性肿瘤以胶质瘤最为多见,胶质瘤的预后较差,一直困扰着神经外科医师。本文旨在观察阳离子脂质体介导的HSV-TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞的杀伤作用。方法:本文将新近克隆并构建的含HSV-TK基因真核表达载体用阳离子脂质体介导转染... 颅内恶性肿瘤以胶质瘤最为多见,胶质瘤的预后较差,一直困扰着神经外科医师。本文旨在观察阳离子脂质体介导的HSV-TK/ACV系统对人脑胶质瘤细胞的杀伤作用。方法:本文将新近克隆并构建的含HSV-TK基因真核表达载体用阳离子脂质体介导转染至人脑胶质瘤细胞中,筛选出阳性克隆,通过MTT、FCM及AgNOR检测转染了HSV-TK基因的FJ905胶质瘤细胞对不同浓度的ACV的反应情况。结果:转染了TK基因的胶质瘤细胞在给予ACV后,细胞发生明显的肿胀、变性,以致形成碎片,而未转染TK基因的胶质瘤细胞变化不明显。转染TK基因和未转染TK的肿瘤细胞经ACV作用后,DNA的含量分别为65.81和109.43,两者之间差异显著(P<0.05)。AgNOR嗜银染色测定结果,转染了TK基因和未转染TK基因的肿瘤细胞经ACV作用后,两者测定结果分别为6.67±1.03和14.83±1.47,两者之间差异极显著(P<0.01)。结论:转染了TK基因的胶质瘤细胞对ACV的敏感性明显提高,ACV能明显抑制转染TK基因细胞的DNA合成;HSV-TK/ACV治疗后,人脑胶质瘤细胞的增殖活性降低了。提示HSV-TK/ACV系统可为胶质瘤的基因治疗提供一种可探索的方法。 展开更多
关键词 阳离子 脂质体 hsv-tk基因 治疗 脑胶质瘤 介导作用 肿瘤
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