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人端粒酶逆转录酶启动子调控腺病毒介导的胸苷激酶基因治疗膀胱癌的实验研究 被引量：14
1
作者 王亚轩 蔡文清 +3 位作者 黎玮 张勇 白志杰 吴建辉 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期229-232,共4页
目的　观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV tk/GCV)自杀基因系统体外对人膀胱癌的选择性杀伤效应。　方法　利用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基... 目的　观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷(HSV tk/GCV)自杀基因系统体外对人膀胱癌的选择性杀伤效应。　方法　利用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因感染膀胱癌细胞253J和人成纤维细胞MRC 5,荧光显微镜下观察其感染效率。利用携带不同启动子的重组腺病毒Ad hTERT HSV/tk以及Ad CMV HSV/tk感染253J和MRC 5细胞,加入不同浓度GCV,MTT法观察受染细胞的存活率。　结果　重组腺病毒Ad hTERT EGFP能特异性转染253J细胞,其转染效率随重组病毒的MOI增加而升高(P<0. 01),MOI为1时转染率为8. 3%,MOI为1000时转染率达100. 0%;应用GCV处理后,Ad CMV HSV/tk对253J和MRC 5细胞均有杀伤作用,而Ad hTERT HSV/tk只杀伤253J细胞(P<0. 001),随着MOI和GCV浓度增加, 253J细胞存活率明显降低(P<0. 01),MOI为1、GCV浓度为1μmol/L时存活率为95. 4%,MOI为100、GCV浓度为1000μmol/L时存活率仅为6. 1%,并有旁观者效应。　结论　重组腺病毒携带EGFP报告基因可准确、简便地确定转染效率,hTERT启动子调控的重组腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统对人膀胱癌细胞有靶向杀伤作用。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶启动子 调控 腺病毒 胸苷激酶 基因治疗 膀胱癌 实验研究
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wt-p53基因联合HSV-TK/GCV对C6鼠胶质瘤杀伤作用的实验研究 被引量：9
2
作者 黄强 浦佩玉 +5 位作者 夏之柏 蒋元文 尤永平 张云亭 王春燕 王广秀 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期269-273,共5页
目的研究wtp53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性。方法体外试验以腺病毒为载体转导wtp53和HSVTK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率。体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载... 目的研究wtp53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性。方法体外试验以腺病毒为载体转导wtp53和HSVTK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率。体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载体的wtp53和HSVTK基因,腹腔给以GCV(15mg.kg-1day-1×14)。观察荷瘤鼠生存期;强化MRI动态监测荷瘤鼠肿瘤大小;TUNEL法检测凋亡。结果wtp53基因明显提高鼠胶质瘤细胞对HSVTK/GCV的敏感性,p53联合HSVTK基因转染C6的GCVID100=0.01μg.ml-1,而单独HSVTK转染C6的GCVID100=1μg.ml-1,约提高100倍;p53基因还可使C6细胞凋亡增加。体内p53基因联合HSVTK/GCV治疗使荷瘤鼠生存期明显延长,凋亡明显增加(P<0.001);强化MRI示4周肿瘤消失。结论p53基因和HSVTK基因的联合基因治疗可作为临床上优化自杀基因治疗方案的一种可能选择。 展开更多
关键词 tk/GCV p53基因 hsv 实验研究 杀伤作用 胶质瘤细胞 自杀基因治疗 MTT法检测 TUNEL法 联合基因治疗 tk基因 恶性胶质瘤 细胞生存率 荷瘤鼠 体外试验 不同浓度 动物模型 SD大鼠 体内实验 肿瘤大小 动态监测 基因转染 细胞凋亡
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逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因治疗胰腺癌的实验研究 被引量：4
3
作者 谢苏庆 许国铭 +1 位作者 李兆申 曹广文 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期11-13,共3页
目的　探讨应用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒 胸苷激酶 (herpessimplexvirustypeIthymidinekinasegene,HSV TK)基因治疗实验性人胰腺癌细胞系 8988的价值。 方法　HSV TK被定向克隆入逆转录病毒载体 pMNSM的SV4 0 下游。重组逆转录... 目的　探讨应用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒 胸苷激酶 (herpessimplexvirustypeIthymidinekinasegene,HSV TK)基因治疗实验性人胰腺癌细胞系 8988的价值。 方法　HSV TK被定向克隆入逆转录病毒载体 pMNSM的SV4 0 下游。重组逆转录病毒载体 pMNS TK M转染至逆转录病毒包装细胞PA317细胞 ,产生的重组病毒将HSV TK转入人胰腺癌细胞系 8988细胞内。结果　Southernblot试验及药敏试验均证实HSV TK基因已整合至细胞DNA中并完全表达。体外试验表明 ,HSV TK阳性 8988细胞对ACV的敏感性较母本细胞明显高 ;裸鼠移植瘤试验证实 ,腹腔注射ACV 10 0mg/kg有明显阻止移植瘤形成以及对移植瘤的治疗作用。结论　HSV TK/ACV有体内治疗胰腺癌的作用 ,可作为胰腺癌基因治疗的潜在方法之一。 展开更多
关键词 胰腺癌 基因治疗 逆转录病毒 hsv-tk
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CD-TK和HSV-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞的杀伤作用 被引量：6
4
作者 张东青 许纯孝 +3 位作者 徐祗顺 马道新 张怀强 刘春生 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第8期812-815,共4页
背景与目的:自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用... 背景与目的:自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用价值。方法:应用逆转录病毒载体将HSV-TK基因和CD-TK融合基因分别转染PC-3m细胞,经RT-PCR鉴定后,MTT法检测丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)、5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)前体药物单一或联合应用对转染后PC-3m细胞的杀伤作用,以未转染的PC-3m细胞作对照。结果:GCV对转染后PC-3m细胞有较强的细胞毒作用,半数抑制浓度为8.34μg/ml,但旁观者效应不明显;5-Fc则有显著旁观者效应,当混育细胞中转染细胞比例是5%时即可出现;联合用药具有协同作用,两药相互作用指数小于1.0。结论:CD-TK自杀基因体系对前列腺癌细胞具有显著杀伤作用,明显优于单用HSV-TK基因体系,深入研究意义较大。 展开更多
关键词 CD—tk hsv—tk 自杀基因体系 前列腺癌 杀伤作用 癌细胞
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B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用 被引量：6
5
作者 王烈 卫立辛 +5 位作者 王飞 曹贵松 钱其军 杨广顺 郭亚军 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期229-232,共4页
目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88... 目的 :探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV- TK)和共同刺激因子 B7基因联合使用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法 :应用基因重组技术 ,构建分别携带 HSV- TK,B7及 HSV- TK/B7双基因的逆转录病毒载体。以 SHZ- 88细胞株建立乳腺癌动物模型 ,随机分为对照组、TK组、B7组及 TK/B7组 ,每组 2 0只。 2周后于瘤体内分别注射转染有空载体及不同的重组载体的乳腺癌细胞 ,3d后于腹腔内连续注射无环鸟苷 (GCV) 15 d(5 0 mg· kg- 1· d- 1 ) ,观察肿瘤体积、荷瘤生存时间的变化和组织病理改变。结果 :B7组、TK/B7组肿瘤内淋巴细胞浸润明显增多。与对照组相比 ,TK组、B7组肿瘤生长减缓 ,体积减小 ,荷瘤生存期延长 ,两组间均有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,而 TK /B7组尤为显著 (P<0 .0 1) ;TK组与 B7组相比则无显著差异。 结论 :HSV- TK,B7基因联合治疗乳腺癌动物模型 ,能直接杀伤肿瘤 ,抑制肿瘤生长 ,延长荷瘤动物的生存期。 展开更多
关键词 基因治疗 乳腺癌 B7基因 hsv-tk基因
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腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦系统杀伤膀胱癌细胞的研究 被引量：4
6
作者 温端改 侯建全 +2 位作者 潘浩 严春寅 郭震华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期562-563,共2页
目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 /更昔洛韦 (HSV tk/GCV )系统杀伤膀胱癌细胞的作用。方法　采用人巨细胞病毒早期蛋白启动子驱动HSV tk基因重组腺病毒 (Ad)载体 ,体外转染HTB9和ScanBER细胞 ,MTT法测定杀伤率 ,PCR检测Ad tk转染... 目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 /更昔洛韦 (HSV tk/GCV )系统杀伤膀胱癌细胞的作用。方法　采用人巨细胞病毒早期蛋白启动子驱动HSV tk基因重组腺病毒 (Ad)载体 ,体外转染HTB9和ScanBER细胞 ,MTT法测定杀伤率 ,PCR检测Ad tk转染细胞中tk基因及腺病毒E1区基因。结果　GCV对转染的癌细胞有杀伤作用 ,感染复数 (MOI) 10 0时 ,10mg/LGCV杀伤 80 %的tk+细胞 ,而对未转染的细胞无杀伤作用。不同MOI的Ad tk转染两种细胞 ,其毒性与Ad tkMOI正相关 ,MOI 10 0时 ,15mg/LGCV杀伤 10 0 %的细胞 ,无GCV组未受抑制。PCR证实Ad tk转染细胞有tk基因 ,腺病毒E1区基因阴性。AnnexinV法证实杀伤效应与凋亡有关。结论　HSV tk/GCV系统是一种有效、安全治疗膀胱癌的新方法。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 基因治疗 hsv-tk 更昔洛韦 腺病毒
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携带HSV-TK基因的人肝癌特异性EB病毒表达载体的构建及临床意义 被引量：3
7
作者 胡俊波 吴在德 +1 位作者 颜子颖 侯云德 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期153-154,共2页
构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重组ＤＮＡ技术将ＨＳＶ－ＴＫ基因插入到含有及不含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体ＰＥＢＡＦ５．１、ｐＤＲ２中，并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。结果ＴＫ... 构建人肝癌组织特异性的基因治疗载体并探讨其临床意义。方法利用重组ＤＮＡ技术将ＨＳＶ－ＴＫ基因插入到含有及不含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体ＰＥＢＡＦ５．１、ｐＤＲ２中，并通过限制性内切酶分析鉴定重组质粒。结果ＴＫ基因成功地克隆入ＰＥＢＡＦ５．１及ｐＤＲ２中。结论含有α－ＦＰ启动子的ＥＢ病毒表达载体是原发性肝癌基因治疗中新型、理想的候选载体之一。 展开更多
关键词 肝肿瘤 EB病毒 载体 hsv-tk基因
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腺病毒介导HSV-TK/CD基因对胆管癌体内体外的杀伤作用 被引量：6
8
作者 李梅生 梁力建 +1 位作者 黄洁夫 陈祖兵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1428-1429,共2页
目的　研究HSV TK /CD融合基因对胆管癌的杀伤作用。方法　腺病毒介导HSV TK /CD融合基因体外转染胆管癌细胞QBC93 9,与单自杀基因对照 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法测定肿瘤细胞生长抑制率 ,旁观者效应 ;构建胆管癌裸鼠模型 ,瘤内注... 目的　研究HSV TK /CD融合基因对胆管癌的杀伤作用。方法　腺病毒介导HSV TK /CD融合基因体外转染胆管癌细胞QBC93 9,与单自杀基因对照 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT )比色法测定肿瘤细胞生长抑制率 ,旁观者效应 ;构建胆管癌裸鼠模型 ,瘤内注射重组腺病毒 ,观察肿瘤生长情况。结果　与单一自杀基因转染组对照 ,双基因组表现出更强的抗肿瘤作用。当给予相同浓度的前体药物时 ,融合基因组 ,CD组和TK组的肿瘤细胞存活率分别为 3 .1%、3 2 .1%、5 5 .2 %。体内实验显示 ,融合基因组的肿瘤生长受到明显抑制 ,抑制率达 70 .7%。单自杀基因TK、CD组则分别为 41.2 %和 5 5 .7% ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。组织学检查可见实验组肿瘤发生明显坏死 ,这种现象在融合基因治疗组尤为明显。结论　与单自杀基因相比 ,HSV TK/CD融合基因在体内和体外都具有更强的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 hsv-tk 融合基因 胆管癌 自杀基因 腺病毒介导 杀伤作用 体内 体外转染 基因组 抑制率
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Hsv-tk、重组人TNF-α融合基因表达载体的构建及瞬时表达 被引量：4
9
作者 成诗银 鱼兵 张惠中 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第8期20-23,28,共5页
目的 :构建 pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体 ,观察其在喉癌细胞Hep - 2中的瞬时表达。方法 :应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体 pGEM -T -Easy测序 ,利用逆转录病毒载体PLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK -rhTNF -... 目的 :构建 pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体 ,观察其在喉癌细胞Hep - 2中的瞬时表达。方法 :应用PCR方法对各目的基因进行扩增并经测序载体 pGEM -T -Easy测序 ,利用逆转录病毒载体PLXSN中的多克隆位点将二者融合为融合基因TK -rhTNF -α并将其亚克隆至pEGFP -N3的EcoRI和BamHI位点间 ,成功构建表达载体 pEGFP -TK -rhTNF -α ,并在该载体转染人喉癌细胞Hep - 2后观察融合蛋白表达情况。结果 :酶切鉴定证实TK -rhTNF -α融合基因片段已克隆到pEGFP -N3的EcoRI和BamHI位点间 ,并在转染人喉癌细胞Hep - 2中观察到TK -rhTNF -α融合基因及绿色荧光蛋白的表达。结论 :pEGFP -TK -rhTNF -α表达载体便于观察转染细胞中TK -rhTNF -α融合蛋白的表达情况及蛋白定位 。 展开更多
关键词 hsv-tk基因 肿瘤坏死因子-Α 融合基因 表达
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hTERT启动子调控TK基因靶向性杀伤鼻咽癌移植瘤的实验研究 被引量：5
10
作者 牟少凤 文忠 +3 位作者 郭梦和 谢民强 关小芳 申聪香 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期155-158,共4页
目的研究人端粒酶反转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统对鼻咽癌移植瘤的体内杀伤作用。方法采用培养细胞移植法,将人鼻咽癌细胞系C666-1接种于裸鼠腋部皮下,建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤... 目的研究人端粒酶反转录酶(hTERT)基因核心启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统对鼻咽癌移植瘤的体内杀伤作用。方法采用培养细胞移植法,将人鼻咽癌细胞系C666-1接种于裸鼠腋部皮下,建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型。将40只裸鼠随机分为5组:hTERTp/HSV-TK/PGL3/GCV组、CMV/HSV-TK/PGL3/GCV组、HSV-TK/PGL3/GCV组、GCV组及生理盐水组,每组8只。采用脂质体介导,进行瘤内直接注射,同时经腹腔给予GCV治疗,观察各组裸鼠生存状况及肿瘤相对体积、抑瘤率,并进行荷瘤裸鼠肝肾组织的常规病理检查。结果成功构建了C666-1裸鼠皮下移植瘤动物模型,hTERTp/HSV-TK/PGL3/GCV组移植瘤被明显抑制,抑瘤率达到45.51%,与HSV-TK/PGL3/GCV组、GCV组及生理盐水组(抑瘤率分别为5.52%、14.31%、0.03%)比较有显著性差异(P<0.01),肝肾病理检查发现,该组裸鼠肝肾均无明显病理学变化。CMV/HSV-TK/PGL3/GCV组的抑瘤率亦达到51.56%,但病理检查发现裸鼠出现肝肾毒性。结论hTERT启动子调控TK基因靶向治疗系统能够在体内特异性杀伤鼻咽癌移植瘤,而无明显全身毒副作用,是一种安全、有效的肿瘤靶向基因治疗系统,将为鼻咽癌临床基因治疗开辟新领域。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 肿瘤移植 hsv-tk基因 基因疗法 端粒 末端转移酶
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放射诱导HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达的研究 被引量：5
11
作者 康保国 王卫东 +1 位作者 陈正堂 李德志 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第6期505-507,510,共4页
目的构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性。方法利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载... 目的构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性。方法利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆,转染细胞给予2Gy X线照射后,检测照射前后不同时相点细胞内TK表达情况,及不同浓度前药GCV对转染重组载体和对照载体的肺癌细胞的生长抑制率。结果照射后转染同步放大重组载体的细胞内TK的表达明显强于对照组,且随时间的推移而逐渐增强,以照射后16h最为明显。同一浓度的GCV对转染同步放大载体的A549细胞的抑制率明显高于对照组和未转染组,IC50也明显低于对照组和未转染组。结论同步放大基因电路明显增强了靶细胞内HSV-TK基因的表达,进一步完善了放射-基因治疗这一新的肿瘤治疗模式。 展开更多
关键词 肺肿瘤 基因电路 hsv-tk基因 放射基因-治疗
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HSV-tk/GCV自杀基因系统对视网膜母细胞瘤的体外抗肿瘤效应 被引量：5
12
作者 李涛 张虹 +4 位作者 王骞 梁峰 李伟 李贵刚 卢运萍 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期533-537,共5页
目的　研究单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 /更昔洛韦 (herpessimplexvirusthymidinekinase /gancyclovir,HSV tk/GCV)自杀基因系统对视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,Rb)细胞的体外杀伤作用以及旁观者效应发生的机制。方法　应用脂质体... 目的　研究单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶 /更昔洛韦 (herpessimplexvirusthymidinekinase /gancyclovir,HSV tk/GCV)自杀基因系统对视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,Rb)细胞的体外杀伤作用以及旁观者效应发生的机制。方法　应用脂质体将pCMV/hytk IRES hrGFP质粒导入HXO Rb44细胞株。用潮霉素筛选出阳性细胞克隆并命名为HXO Rb44/tk。RT PCR鉴定hytk基因在HXO Rb44/tk细胞中的转录结果。比较HXO Rb44和HXO Rb44/tk细胞的形态特征及生长特性。通过MTT法检测GCV对不同比例HXO Rb44/tk和HXO Rb44混合细胞的杀伤作用 (“旁观者效应”)。并通过上清移换实验研究旁观者效应发生的机制。结果　HXO Rb44/tk细胞经RT PCR可检测出 5 30bp的hytk基因片段。HXO Rb44/tk和HXO Rb44细胞的形态特征及生长特性无明显差异。HXO Rb44/tk细胞仅占很低比例时即可观察到明显的旁观者效应 ,而GCV作用的HXO Rb44/tk细胞上清对HXO Rb44细胞无杀伤作用。结论　HSV tk基因转移联合GCV治疗可作为Rb基因治疗的一种有效方法 。 展开更多
关键词 hsv—tk/GCV 自杀基因系统 视网膜母细胞瘤 体外抗肿瘤效应 基因疗法 胸腺嘧啶核苷激酶
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HSV-TK/GCV系统联合多柔比星对SK-OV-3的杀伤作用 被引量：3
13
作者 鞠晓明 温宏武 +1 位作者 郭燕燕 徐文怀 《北京医科大学学报》 CSCD 2000年第5期439-443,共5页
目的 :探讨HSV TK/GCV(单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 /丙氧鸟苷 (substrateⅠofherpessimplexvirusthymidinekinase/ ganciclovir)系统及其与普通化疗联合用于治疗卵巢癌的可行性 ,研究分子化疗药物GCV与普通化疗药多柔比星 (阿霉素 )联合... 目的 :探讨HSV TK/GCV(单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶 /丙氧鸟苷 (substrateⅠofherpessimplexvirusthymidinekinase/ ganciclovir)系统及其与普通化疗联合用于治疗卵巢癌的可行性 ,研究分子化疗药物GCV与普通化疗药多柔比星 (阿霉素 )联合应用对卵巢癌SK OV 3/TK细胞的杀伤作用。这对于缺乏有效的早期诊断和治疗手段的卵巢癌具有特殊的意义。方法 :将携带HSV TK基因的逆转录病毒重组体 (XM 6 /TK)以磷酸钙共沉淀法导入包装细胞 ,经G4 18筛选获得产病毒的阳性克隆细胞。继而以包装好的复制缺陷型逆转录病毒为运载体将HSV TK基因导入SK OV 3卵巢癌细胞。再经G4 18筛选 ,确定目的基因在靶细胞内稳定表达后 ,观察GCV对细胞的杀伤作用。进一步观察GCV与多柔比星联合应用对SK OV 3/TK细胞的杀伤作用。结果 :HSV TK基因可由重组逆转录病毒导入卵巢癌细胞并能获得稳定表达 ;GCV(10mg·L-1)可明显抑制被转化的卵巢癌细胞 (SK OV 3/TK)的生长 ,对于SK OV 3/TK细胞 ,在单独应用GCV时 ,其最低有效 (质量 )浓度为 10mg·L-1;单独应用多柔比星时 ,其最低有效 (质量 )浓度为 1mg·L-1;而联合应用时 ,GCV 5mg·L-1、多柔比星 0 .2 5mg·L-1对SK OV 3/TK细胞即可产生明显的杀伤作用。结论 :逆转录病毒介导的HSV 展开更多
关键词 卵巢癌 药物疗法 基因治疗 hsv-tk/GCV 多柔比星
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腺病毒介导的HSV-tk基因治疗膀胱癌的研究 被引量：6
14
作者 侯建全 温端改 +2 位作者 郑志涛 严春寅 郭震华 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期866-868,共3页
目的观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)联合更昔洛韦(GCV)治疗膀胱癌的效果。方法构建膀胱癌SCaBER移植瘤模型,观察肿瘤注射重组腺病毒(Ad.tk)结合GCV治疗移植瘤的变化;免疫组织化学法(SP法)检测肿瘤内微血管密度(MVD)... 目的观察腺病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)联合更昔洛韦(GCV)治疗膀胱癌的效果。方法构建膀胱癌SCaBER移植瘤模型,观察肿瘤注射重组腺病毒(Ad.tk)结合GCV治疗移植瘤的变化;免疫组织化学法(SP法)检测肿瘤内微血管密度(MVD)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达;PCR检测肿瘤及脏器内tk基因和腺病毒E1区表达。结果肿瘤内注射5×108pfu的Ad.tk/GCV可使肿瘤缩小或消失,治疗组肿瘤平均重量为0.21g,对照组分别为1.63g(HSVtk/PBS组)、1.69g(PBS/GCV组)、1.72g(PBS组),治疗组与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。PCNA染色治疗组肿瘤细胞呈弱阳性(21.43%),对照组呈强阳性,分别为71.44%、65.81%、74.63%,差异有显著性(P<0.01)。MVD在治疗组明显低于对照组(P<0.01)。结论HSVtk/GCV系统治疗膀胱癌效果显著,其作用机制包括干扰DNA合成。 展开更多
关键词 腺病毒 介导 hsv-tk 基因治疗 膀胱癌 更昔洛韦
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HSV-tk/GCV系统对NIH3 T3细胞的体外杀伤作用研究 被引量：2
15
作者 肖生祥 潘敏 +4 位作者 闫乎玲 曹振平 郗彦萍 冯义国 任晓蓉 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2002年第6期368-369,373,共3页
目的　研究HSV tk/GCV系统对NIH3T3细胞系的杀伤作用 ,为与成纤维细胞增殖有关的皮肤病基因治疗提供体外实验依据。方法　应用携带HSV tk基因的重组质粒pPNT tk通过磷酸钙转染传代培养的NIH3T3细胞 ,并经G418筛选 ,获得抗药性细胞集落 ... 目的　研究HSV tk/GCV系统对NIH3T3细胞系的杀伤作用 ,为与成纤维细胞增殖有关的皮肤病基因治疗提供体外实验依据。方法　应用携带HSV tk基因的重组质粒pPNT tk通过磷酸钙转染传代培养的NIH3T3细胞 ,并经G418筛选 ,获得抗药性细胞集落 ,利用MTT法检测不同浓度GCV对NIH 3T3细胞的杀伤作用。结果　GCV对NIH3T3 /tk细胞有明显的细胞毒性作用 ,当GCV浓度为 10 .0 μmol/L时 ,NIN3T3 /tk细胞的生存抑制率已高达 95 %以上。而在同样药物浓度条件下 ,未转染的对照NIH 3T3细胞的生存抑制率为 11.9% ,与空白对照组相比较 ,差异无显著性。结论　HSV tk/GCV系统对NIH3T3细胞有很好的抑制作用 ,转染后细胞较之未转染细胞对前体药物更昔洛韦的敏感度显著增加 ,且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 hsv-tk/GCV系统 NIH3T3细胞 NSV-tk基因 成纤维细胞 自杀基因 基因转移 基因治疗 皮肤疾病
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HSV-tk基因和IL-12基因抑制VEGF的表达及对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用的实验研究
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作者 周玉华 朱欠元 +1 位作者 曾友根 李宝金 《中国医学创新》 CAS 2023年第19期24-27,共4页
目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV... 目的:研究HSV-tk基因和IL-12基因抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放射增敏作用。方法:建立鼻咽癌荷瘤裸鼠模型,将42只成瘤鼠随机分成IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组、空白对照组、每组6只。采用瘤内注射分别给予相对应的重组腺病毒液(AdKDR-tk)、重组逆转录腺病毒液IL-12及生理盐水,24 h后重复注射1次。次日起HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组、IL-12+HSV-tk/GCV组、IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组连续10 d每天腹腔内注射GCV 100 mg/(kg·d),连续10 d。各放射治疗组第3周开始给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。治疗结束后处死裸鼠,检测裸鼠肿瘤质量及肿瘤生长抑制率,免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度及VEGF阳性细胞灰度值。结果:IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组裸鼠瘤体质量明显低于IL-12组、IL-12+放射治疗组、HSV-tk/GCV组、HSV-tk/GCV+放射治疗组,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组的肿瘤生长抑制率最高,达71.7%。IL-12+HSV-tk/GCV+放射治疗组微血管密度均低于其他各组,VEGF阳性细胞灰度值均高于其他各组(P<0.05)。结论:HSV-tk基因和IL-12基因联合应用在鼻咽癌荷瘤裸鼠模型放疗中可抑制移植瘤的生长,为鼻咽癌的放疗产生增敏作用。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 鼻咽癌 放射治疗 hsv-tk 基因 IL-12 基因
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旁观者效应在肝癌基因治疗中的作用 被引量：4
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作者 祝金泉 张焜和 +3 位作者 黄德强 谢勇 陈江 王崇文 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期16-18,21,共4页
目的 :观察HSV -tk/ACV(HerpesSimplexVirusthymidinekinasegene/Acyclovir)系统基因治疗恶性肿瘤过程中旁观者效应的作用。方法 :HSV -tk基因重组逆转录病毒载体转染PA317细胞为PA317-tk细胞。培养PA317-tk细胞即可获得有感染力的携带H... 目的 :观察HSV -tk/ACV(HerpesSimplexVirusthymidinekinasegene/Acyclovir)系统基因治疗恶性肿瘤过程中旁观者效应的作用。方法 :HSV -tk基因重组逆转录病毒载体转染PA317细胞为PA317-tk细胞。培养PA317-tk细胞即可获得有感染力的携带HSV -tk基因的病毒颗粒 ,然后转染肝癌细胞株SMMC -772 1细胞为SMMC -tk细胞。SMMC -TK细胞与SMMC - 772 1细胞以不同百分比混合 ,用ACV(10 0ug/ml)培养基培养 ,MTT法检测ACV对各组细胞抑制率 (InhibitRate ,IR) ,根据各组IR与该组SMMC -tk细胞数的百分比值 (IR/SMMC -tk % ,IR/St)的大小判断旁观者效应作用的有无和强弱。结果 :旁观效应试验表明 ,含SMMC -tk细胞 10 % ,2 0 % ,30 % ,4 0 % ,5 0 % ,6 0 % ,70 % ,80 % ,90 % ,10 0 %各组IR/St比值分别为2 .15 ,1.91,1.83,1.4 7,1.30 ,1.11,1.0 2 ,0 .93,0 .84 ,0 .76。 10 %～ 70 %各组IR/St比值均大于 1,存在明显旁观者效应 ,以 10 % ,2 0 % ,30 % ,4 0 %组最强 ,80 %～ 10 0 %三组IR/St比值小于 1,旁观者效应不明显。结论 :研究结果证实用HSV -tk/ACV系统基因治疗恶性肿瘤 ,适宜比例TK+ 细胞时 ,存在明显的旁观者效应 ,TK/细胞为 10 %时旁观者效应最强 ,这对于HSV -TK/ACV系统基因治疗恶性肿瘤具有重要意义。 展开更多
关键词 肝癌 hsv-tk/ACV 基因治疗 旁观者效应
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HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究 被引量：4
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作者 王继兵 葛坚 +2 位作者 段山 刘炳乾 郑建樑 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第3期281-284,共4页
目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观... 目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是HSV-TK/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 旁观者效应 hsv—tk基因 TENON囊 成纤维细胞 人
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HER2靶向载HSV-TK基因纳米泡诱导胃癌细胞凋亡的体外研究 被引量：4
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作者 辛莹 周厚妊 +3 位作者 张月 刘慧 黄驰 刘治军 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第2期106-110,116,共6页
目的探讨HER2靶向载单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因/AGM-CBA的全氟己烷纳米泡(tHAHT NB)的体外寻靶能力及核定位效应,以及在超声介导纳米泡破坏技术下tHAHT NB抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。材料与方法将实验分为MGC803组及... 目的探讨HER2靶向载单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因/AGM-CBA的全氟己烷纳米泡(tHAHT NB)的体外寻靶能力及核定位效应,以及在超声介导纳米泡破坏技术下tHAHT NB抑制胃癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。材料与方法将实验分为MGC803组及NCI-N87组,通过激光共聚焦显微镜检测tHAHT NB的体外靶向情况,使用ImageJ软件半定量分析比较两组细胞周围累计荧光密度,分析NCI-N87组累计荧光密度与细胞数的相关性;通过激光共聚焦显微镜检测tHAHT NB对NCI-N87细胞的核定位效应;将实验分为tHAHT NB+US组、tHAHT NB组、tHER2 NB组、NB组、US组、正常细胞组及空白组,以MTT法观察细胞活性、Annexin V检测细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜下显示与MGC803组相比,NCI-N87组细胞周围可见明显红色荧光;半定量分析显示,与MGC803组相比,NCI-N87组累计荧光密度增高,且与细胞数目呈正相关(r=0.900,P<0.01);核定位实验显示NCI-N87组细胞核周围可见明显红色荧光。MTT法及Annexin V检测发现,与tHAHT NB组、tHER2 NB组、NB组及US组相比,tHAHT NB+US组细胞活性明显减低,细胞凋亡率显著增高。结论tHAHT NB可以靶向识别NCI-N87细胞,并具有核定位效应;联合超声介导纳米泡破坏技术能明显抑制NCI-N87细胞活性,并诱导细胞凋亡,为胃癌的非侵入性治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 胃肿瘤 纳米粒子 超声检查 hsv-tk基因 核定位效应 细胞凋亡 体外研究
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转TK基因的人结肠癌细胞对多种原药敏感性的研究 被引量：2
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作者 蒋琼 戈凯 +2 位作者 许德华 郑仲承 刘新垣 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第3期270-275,共6页
构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后，感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比，生长曲线无明显差... 构建了含有单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（HSV-TK）的重组逆转录病毒载体LTKSN．经PA317细胞包装后，感染人结肠癌细胞株LoVo．用G418筛选到稳定表达HSV-TK基因的细胞克隆LoVo／LTKSN．LoVo／LTKSN与野生型LoVo细胞相比，生长曲线无明显差异，细胞形态亦无改变．细胞毒试验证明LoVo／LTKSN对GCV的敏感性很高，半杀伤浓度IC50为0.5μmol/L，比野生型细胞提高了4000倍以上．三种不同的原药GCV，ACV和BVDU对LoLo／LTKSN具有效果不等的杀伤作用．BVDU和GCV联合作用效果更好．旁杀伤效果十分明显，低浓度GCV就可以将合10%LoVo／LTKSN的混合细胞中的大部分肿瘤细胞杀死． 展开更多
关键词 结肠肿瘤 癌 癌细胞 hsv-tk基因 基因治疗
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