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Expression of the Tribolium castaneum (Coleoptera: Tenebrionidae) hsp83 gene and its relation to oogenesis during ovarian maturation 被引量:9
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作者 Jingjing Xu 1, Juan Shu 1, Qin Zhang Key Laboratory of Animal Genetics and Breeding of the Ministry of Agriculture, College of Animal Science and Technology, China Agricultural University, Beijing 100193, China 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2010年第8期513-522,共10页
Heat shock proteins (HSP) can protect organisms and cells from thermal damage. In this study, we cloned the full length cDNA encoding the HSP83 protein (the homologue of HSP90) of Tribolium castaneum(red flour be... Heat shock proteins (HSP) can protect organisms and cells from thermal damage. In this study, we cloned the full length cDNA encoding the HSP83 protein (the homologue of HSP90) of Tribolium castaneum(red flour beetle). The isolated cDNA contains the full coding sequence, a partial 5' untranslated region of 55 bp and the complete 3' untranslated region. We found the hsp83 gene is located on chromosome 5 of the T. castaneum genome. The predicted HSP83 protein sequence has a high similarity (on average 86.77%) with that of other insect species. The expression of the hsp83 gene in the whole body and in the ovary could be induced with heat stress (40℃ for 1 h) in newly hatched (within 3 h post emergence) and mature (10 days post emergence) beetles. Under normal conditions, the hsp83 expression in the ovary is about 3-fold higher than in the whole body at both stages. No significant difference in hsp83 expression was observed between the two ovarian developmental stages regardless if the beetles were treated with heat shock or not. The expression of the HSP83 protein in the whole body could also be induced with heat stress in newly hatched and mature beetles. However, in the ovary, HSP83 was only expressed in the follicle cells of mature beetles and not in newly hatched beetles, regardless if the beetles were treated with heat shock or not. Furthermore, the females were not able to produce mature oocytes after knock-down of the hsp83 expression by injecting dsRNA. These results suggest that the HSP83 protein is involved in protection against heat stress and could be involved in oogenesis during ovarian maturation of T. castaneum. 展开更多
关键词 hsp83 cDNA cloning Tribolium castaneum EXPRESSION heat shock
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黑腹果蝇保幼激素反应区(JHRR)与核蛋白结合能力调控的分子机制 被引量:5
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作者 何倩毓 张原熙 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1325-1331,共7页
【目的】保幼激素反应区(juvenile hormone response region,JHRR)是在黑腹果蝇Drosophila melanogaster Krüppel homolog 1(Kr-h1)启动子转录调控区中鉴定获得的长120 bp的核苷酸序列。本研究旨在检测果蝇JHRR中3个类E-box序列(2... 【目的】保幼激素反应区(juvenile hormone response region,JHRR)是在黑腹果蝇Drosophila melanogaster Krüppel homolog 1(Kr-h1)启动子转录调控区中鉴定获得的长120 bp的核苷酸序列。本研究旨在检测果蝇JHRR中3个类E-box序列(2个B box和1个C box)对JHRR核蛋白结合能力的影响,以及保幼激素(juvenile hormone,JH)、JH受体Met(Methoprene-tolerant)和热激蛋白Hsp83对JHRR核蛋白结合能力的调控。【方法】利用凝胶迁移阻滞(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)技术分析果蝇JHRR中2个B box或1个C box突变后JHRR与Kc细胞中核蛋白的结合情况;提取游走早期JH滴度较高时期JH缺失果蝇(Aug21-GAL4>UAS-Grim)、Met/Gce双缺失果蝇(Met^(27)gce^(2.5k))、Met超表达果蝇(Lsp2-GAL4>UAS-Met-V5)以及Hsp83纯合突变果蝇(Hsp8308445)脂肪体组织中的核蛋白,利用EMSA技术分析它们对JHRR核蛋白结合能力的调控情况。【结果】EMSA检测结果表明,B box或C box突变后均可降低JH促进的JHRR与Kc细胞中核蛋白的结合,且C box的效果更强;JH缺失果蝇、Met/Gce双缺失果蝇脂肪体组织中核蛋白与JHRR的结合几乎检测不到,而在Hsp83纯合突变果蝇脂肪体组织中核蛋白与JHRR的结合显著下降。相反,JHRR与核蛋白的结合在Met超表达果蝇中显著增强。【结论】B box和C box对JHRR与核蛋白结合是必需的,且JHRR与核蛋白的结合依赖于JH和Met,并且受Hsp83的调控。 展开更多
关键词 黑腹果蝇 保幼激素 MET JHRR hsp83 核蛋白结合
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大螟热激蛋白83基因克隆及序列分析 被引量:4
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作者 孙猛 陆明星 +1 位作者 汤小天 杜予州 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1246-1254,共9页
【目的】近年来,大螟Sesamia inferens(Walker)对水稻的为害逐渐加重并成为水稻的重要害虫之一。HSP83家族作为分子伴侣参与生物生长发育并对外界刺激产生响应,对生物功能蛋白质的正确折叠及胁迫信号传递有着重要意义。本研究旨在克隆大... 【目的】近年来,大螟Sesamia inferens(Walker)对水稻的为害逐渐加重并成为水稻的重要害虫之一。HSP83家族作为分子伴侣参与生物生长发育并对外界刺激产生响应,对生物功能蛋白质的正确折叠及胁迫信号传递有着重要意义。本研究旨在克隆大螟HSP90家族HSP83基因的c DNA及基因组全长序列,分析其基本特性。【方法】应用RT-PCR及RACE技术从大螟中克隆HSP83基因的c DNA序列;获取基因组序列,进行基因组验证,并与c DNA序列比较分析其有无内含子;进行系统发育分析。【结果】大螟HSP83基因被命名为Sihsp83(Gen Bank登录号:KM077137),长度为2 496 bp,开放阅读框长2 154 bp,编码717个氨基酸,推测分子量为82.6 ku。该基因编码的氨基酸序列中含有5个HSP90家族保守序列,在C-末端存在细胞质定位信号。大螟HSP83基因组序列长度为2 218 bp(Gen Bank登录号:KM077138),不含内含子。在系统发育树中,大螟HSP83与其他夜蛾科昆虫的HSP90家族聚为一支。【结论】获得的大螟HSP83基因是HSP90基因家族成员;大螟的HSP83是细胞质热激蛋白,具有很高的保守性。 展开更多
关键词 大螟 hsp83 基因克隆 序列分析
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昆虫双杂交实验中家蚕BmHSP83和BmMAD3蛋白引起的假性现象
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作者 方康 彭海涛 胡琼波 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2022年第1期170-176,共7页
昆虫双杂交(Insect two-hybrid, I2H)技术是研究昆虫细胞蛋白质相互作用的一种方法。本研究利用Gateway克隆技术,构建了家蚕Bombyx mori蛋白BmHSP83和BmPDIA5,以及BmMAD3和BmMAN1的I2H载体;然后,将载体与报告质粒pUAS-Luc一起转染SF-9细... 昆虫双杂交(Insect two-hybrid, I2H)技术是研究昆虫细胞蛋白质相互作用的一种方法。本研究利用Gateway克隆技术,构建了家蚕Bombyx mori蛋白BmHSP83和BmPDIA5,以及BmMAD3和BmMAN1的I2H载体;然后,将载体与报告质粒pUAS-Luc一起转染SF-9细胞,检测其发光值。结果表明,转染pIE2-AD-BmHSP83或pIE2-AD-BmMAD3载体与转染pUAS-Luc的对照组的细胞发光值无明显差异,报告基因未被激活;分别单独用pIE2-DBD-BmHSP83或pIE2-DBD-BmMAD3质粒转染细胞时,发光强度显著增加,报告基因被激活,说明BmHSP83和BmMAD3造成了假阳性结果;并且当细胞共转染pIE2-DBD-BmHSP83和pIE2-AD-BmPDIA5、pIE2-DBD-BmMAD3和pIE2-AD-BmMAN1时报告基因的激活反应显著提高,提示BmHSP83与BmPDIA5、BmMAD3与BmMAN1存在互作关系从而引起阳性反应,且与BmHSP83和BmMAD3的假阳性形成叠加效应;然而,当共转染pIE2-AD-BmHSP83和pIE2-DBD-BmPDIA5、pIE2-AD-BmMAD3和pIE2-DBD-BmMAN1时报告基因未被激活,显示pIE2-AD-BmHSP83/BmMAD3导致了假阴性。BmHSP83和BmMAD3引起I2H假性现象可能与该二种蛋白具有转录激活功能有关,当其与DNA结合结构域(DNA binding domain, DBD)融合表达时,该融合体即具备了DNA结合及转录激活两个功能,因而可以启动下游报告基因的表达;反之,当其与转录激活结构域(AD)融合表达时,则阻止了他们各自与BmPDIA5、BmMAN1蛋白的互作。本研究结果为那些利用I2H体系研究具有转录激活功能的蛋白质相互作用提供借鉴。 展开更多
关键词 昆虫双杂交 假性 家蚕 hsp83 MAD3
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Hsp83 regulates the fate of germline stem cells in Drosophila ovary
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作者 Dongsheng Chen Shuang Wang +5 位作者 Xiaoqian Tao Lijuan Zhou Jian Wang Fuling Sun Mingzhong Sun Xiaoli Gao 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2018年第4期219-222,共4页
In adult tissues,stem cells are defined by their unique capacity to self-renew and produce differentiated cells to maintain tissue homeostasis.Drosophila ovarian germline stem cells(GSCs)provide a powerful model for... In adult tissues,stem cells are defined by their unique capacity to self-renew and produce differentiated cells to maintain tissue homeostasis.Drosophila ovarian germline stem cells(GSCs)provide a powerful model for investigating the regulatory mechanisms underlying stem cell fate determination in vivo(Chen and Mckearin. 展开更多
关键词 GSC hsp83 regulates the fate of germline stem cells in Drosophila ovary
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果蝇Hsp83多克隆抗体的制备及鉴定
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作者 陈冬生 王双 +3 位作者 王剑 周利娟 陶小倩 孙福玲 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期454-459,共6页
目的制备和鉴定抗Hsp83蛋白的多克隆抗体。方法利用PCR技术从果蝇cDNA中获得hsp83基因片段,构建重组质粒;将其转化到BL21(DE3)菌株中诱导蛋白表达,利用Ni-NTA亲和法纯化重组蛋白;再将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体;利用免疫... 目的制备和鉴定抗Hsp83蛋白的多克隆抗体。方法利用PCR技术从果蝇cDNA中获得hsp83基因片段,构建重组质粒;将其转化到BL21(DE3)菌株中诱导蛋白表达,利用Ni-NTA亲和法纯化重组蛋白;再将纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多克隆抗体;利用免疫印迹法(Western blot)和免疫荧光染色法检测多克隆抗体的特异性。结果构建的pET28ahsp83质粒在大肠杆菌中成功表达了Hsp83融合蛋白,蛋白纯化后作为抗原免疫小鼠,获得了抗Hsp83的多克隆抗体。免疫印迹法和免疫荧光染色法检测显示,抗果蝇Hsp83多克隆抗体具有较高的特异性,并能检测出内源性Hsp83蛋白。果蝇卵巢免疫荧光染色显示,Hsp83蛋白定位在卵巢细胞的细胞质中。结论成功制备了小鼠抗Hsp83蛋白的特异性抗体,此工作为深入研究Hsp83蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 hsp83蛋白 原核表达 多克隆抗体
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