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白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测
被引量：
5
1
作者
王巧慧
谷建华
+3 位作者
郭欢
吕士凯
吉万全
张宏
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期127-133,共7页
为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶...
为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶切处理,处理后的ds-cDNA分别连接pGADT7-SfiI三框载体,将连接产物转化至感受态细胞HST08中构建文库。通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集细菌并提取质粒。经鉴定,该文库库容量大于1.0×106 cfu·mL-1,插入片段主要分布在400~2000 bp之间,重组率为100%,冗余度为3%。利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库,获得2个与热休克蛋白HSP40-70互作的蛋白质,分别为DnaJ类蛋白(DnaJ-like)和E3泛素蛋白连接酶AIP2(AIP)。综上表明,文库构建质量较好,为后续筛选抗逆关键基因奠定了基础。
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关键词
白粉菌
小麦
CDNA文库
酵母双杂交
hsp
40
-
70
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职称材料
题名
白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测
被引量：
5
1
作者
王巧慧
谷建华
郭欢
吕士凯
吉万全
张宏
机构
西北农林科技大学农学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室
陕西省留坝县种子管理站
出处
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期127-133,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31971941)。
文摘
为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶切处理,处理后的ds-cDNA分别连接pGADT7-SfiI三框载体,将连接产物转化至感受态细胞HST08中构建文库。通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集细菌并提取质粒。经鉴定,该文库库容量大于1.0×106 cfu·mL-1,插入片段主要分布在400~2000 bp之间,重组率为100%,冗余度为3%。利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库,获得2个与热休克蛋白HSP40-70互作的蛋白质,分别为DnaJ类蛋白(DnaJ-like)和E3泛素蛋白连接酶AIP2(AIP)。综上表明,文库构建质量较好,为后续筛选抗逆关键基因奠定了基础。
关键词
白粉菌
小麦
CDNA文库
酵母双杂交
hsp
40
-
70
Keywords
Powdery mildew
Wheat
cDNA Library
Yeast two-hybrid
hsp
40
-
70
分类号
S512.1 [农业科学—作物学]
S330 [农业科学—作物遗传育种]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测
王巧慧
谷建华
郭欢
吕士凯
吉万全
张宏
《麦类作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
5
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