马铃薯Y病毒CP基因5′端和3′端反向重复结构介导的抗病性研究 被引量：16

1

作者 李鹏 宋云枝 +2 位作者 刘晓玲 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期69-76,共8页

本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)外壳蛋白(CP)基因(PVYNCP)5′端和3′端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKII-5′IR和pROKII-3′IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草。抗病性... 本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)外壳蛋白(CP)基因(PVYNCP)5′端和3′端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKII-5′IR和pROKII-3′IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草。抗病性试验表明,转化PVYNCP基因3′端茎50 bp(环50 bp)hp RNA(hairpin RNA)的烟草抗病率达69%,而转化PVYNCP基因5′端相同片段长度的hpRNA的烟草却全部发病。Southern blot结果表明,转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性;Northern blot结果表明,目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的抗病性。研究结果证明PVYNCP基因的3′端比5′端更能有效地诱发基因沉默,并且hpRNA茎部的长度可减少到50 bp。该结果为探索利用CP基因的最短长度和有效部位的基因片段来培育多抗病毒转基因植物提供了依据。 展开更多

关键词 RNA介导的基因沉默 反向重复结构 hprna 马铃薯Y病毒

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花生Δ^(12)-脂肪酸去饱和酶基因RNAi表达载体的构建 被引量：14

2

作者 陈占宽 张新友 +3 位作者 苗利娟 黄冰艳 汤丰收 张忠信 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期9-12,共4页

利用RNAi原理构建花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因的hpRNA表达载体,以抑制该基因的表达,获得高油酸/亚油酸比值的花生种质。根据花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因序列(GenBank:AF248739)设计引物,以豫花4号花生品种DNA为模板,克隆了该基因的启... 利用RNAi原理构建花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因的hpRNA表达载体,以抑制该基因的表达,获得高油酸/亚油酸比值的花生种质。根据花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因序列(GenBank:AF248739)设计引物,以豫花4号花生品种DNA为模板,克隆了该基因的启动子及长度约500 bp的外显子片段,在此基础上构建完成由自身启动子引导的花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因的反向重复片段RNAi载体pCAMBIA1301-Afad12Ri。 展开更多

关键词 花生 △^12-脂肪酸去饱和酶 RNA干扰 发夹RNA 载体构建

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hpRNA的茎环比例对RNA介导的病毒抗性产生的影响 被引量：7

3

作者 李云 宋云枝 +1 位作者 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期468-477,共10页

以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC... 以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。室内抗病性检测发现:不同茎环比例的hpRNA介导的病毒抗性效率不同;茎环比例为4∶1、2∶1和1∶1时效率较高,抗性植株的比例达60%左右;随着环长度的逐渐增加,抗性植株的比例逐渐降低;当茎环比例为1∶8时,抗性植株的比例仅为9.52%。Southern blot分析结果表明:外源基因已整合于烟草的基因组中,且转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性。Northern blot分析结果表明:目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒坏死株系(PVY^N) RNA介导的病毒抗性 hprna 茎环比例

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植物hpRNA干扰载体构建的研究进展 被引量：9

4

作者 言普 沈文涛 +1 位作者 黎小瑛 周鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期7-12,共6页

RNAi技术在基因功能鉴定和功能基因表达调控中发挥着重要作用。hpRNA干扰载体被广泛用于植物的RNAi研究。对植物hpRNA干扰载体的构建方法进行综述,并分析其优缺点,为植物hpRNA干扰载体构建方法的选择提供参考。

关键词 RNAI hprna 干扰载体 载体构建 GOLDEN Gate克隆

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反向重复结构在抗植物病毒上的研究进展 被引量：1

5

作者 胡琼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期45-48,共4页

双链RNA(dsRNA)的形成是启动RNA沉默的关键因子,而插入了反向重复结构的表达载体能有效地转录产生hpRNA,从而能高效启动RNA沉默。分析了反向重复结构构建的特点,综述了近些年利用该结构启动RNA沉默后在抗植物病毒上的研究进展。

关键词 反向重复结构 hprna 抗植物病毒

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香蕉枯萎病菌Argonaute基因功能分析及其调控小RNA发生 被引量：1

6

作者 曾凡云 王艳玮 +4 位作者 张欣 漆艳香 丁兆建 谢艺贤 彭军 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期459-477,共19页

尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium oxysporum f.sp.cubense是威胁香蕉生产的重要土传病原真菌,其中4号生理小种(Foc4)能感染几乎所有的栽培品系。Argonaute蛋白(AGO)介导的RISC复合体在RNAi干扰中起到重要作用。Foc4含有两个进化上高度保守... 尖孢镰刀菌古巴专化型Fusarium oxysporum f.sp.cubense是威胁香蕉生产的重要土传病原真菌,其中4号生理小种(Foc4)能感染几乎所有的栽培品系。Argonaute蛋白(AGO)介导的RISC复合体在RNAi干扰中起到重要作用。Foc4含有两个进化上高度保守的AGO蛋白,本研究利用同源重组技术获得了Δago1、Δago2和Δago1/2基因缺失突变体,并对其突变体的生物学表型、非生物胁迫、致病力及小RNA发生进行分析。与Foc4相比,缺失突变体不影响菌丝的营养生长,但是分生孢子产量下降,对巴西蕉的致病力明显减弱。其次,在hpRNA诱导的基因沉默中,AGO1主要负责产生siRNA介导基因沉默。最后,sRNA测序显示,缺失突变体的sRNA长度分布和5'-端首位碱基出现频率都发生了改变,并且都能产生自身特异性miRNAs。另外,本研究还鉴定到不依赖AGOs形成的miRNA。这些结果说明Foc4的AGOs在调控产孢量、非生物胁迫、致病力,以及小RNA发生中发挥作用。本研究为揭示Foc4小RNA发生的分子遗传机制奠定理论基础。 展开更多

关键词 香蕉枯萎病 ARGONAUTE 致病力测试 hprna miRNA

原文传递

PRSV-CP基因小hpRNA植物表达载体的构建 被引量：1

7

作者 王树昌 言普 +1 位作者 沈文涛 周鹏 《热带作物学报》 CSCD 2009年第2期176-180,共5页

将获自海南(prsv-cp hno1～4)、云南(prsv-cp yunnan)和广西(prsv-cp guangxi)的番木瓜环斑病毒株系外壳蛋白(PRSV-CP)基因序列与DQ340771、X97251(来自中国台湾的PRSV株系)以及AY162218、AY231130、DQ374153、S46722、X97251(分别来自... 将获自海南(prsv-cp hno1～4)、云南(prsv-cp yunnan)和广西(prsv-cp guangxi)的番木瓜环斑病毒株系外壳蛋白(PRSV-CP)基因序列与DQ340771、X97251(来自中国台湾的PRSV株系)以及AY162218、AY231130、DQ374153、S46722、X97251(分别来自泰国、墨西哥、巴西、美国的PRSV株系)等外壳蛋白(CP)基因序列进行比对,在CP基因高保守区设计靶向目标序列进行亚克隆,获得长度为50bp的DNA片段,并通过一步套叠PCR把50bp正向片段和反向片段与拟南芥内含子拼接,成功构建了小hpRNA结构的植物表达载体,为进一步培育安全性好、抗谱广的番木瓜转基因新种质奠定了基础。 展开更多

关键词 PRSV CP基因 hprna 植物表达载体

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sbeIIb基因hpRNA结构植物转化载体的构建 被引量：1

8

作者 张明洲 方结红 +4 位作者 陈宗伦 刘军 胡华军 孙传兴 Christer Jansson 《中国计量学院学报》 2006年第4期337-340,共4页

hpRNA介导基因沉默技术是一种下调某个内源目的基因表达的有效技术.本研究将淀粉分支酶基因sbeIIb启动子控制下的sbeIIb基因的hpRNA结构构建于植物双元表达载体pCAMBIA1305.1中,并将该重组载体导入农杆菌超毒力菌株AGL1中,构建了一种适... hpRNA介导基因沉默技术是一种下调某个内源目的基因表达的有效技术.本研究将淀粉分支酶基因sbeIIb启动子控制下的sbeIIb基因的hpRNA结构构建于植物双元表达载体pCAMBIA1305.1中,并将该重组载体导入农杆菌超毒力菌株AGL1中,构建了一种适于禾本科的植物转化载体. 展开更多

关键词 sbeIIb基因 载体 hprna

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甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDⅢ克隆及其hpRNA载体构建 被引量：3

9

作者 汪淼 李双喜 +5 位作者 桂意云 秦翠鲜 陈忠良 廖青 李杨瑞 黄东亮 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期532-539,共8页

【目的】克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建其hpRNA表达载体,为研究该基因生物学功能奠定基础。【方法】通过同源克隆获得甘蔗SofSPSDⅢ基因部分序列,利用RACE技术获得其全长cDNA。扩增SofSPSDⅢ目的基因约500 bp序列,利用中间载体pHA... 【目的】克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建其hpRNA表达载体,为研究该基因生物学功能奠定基础。【方法】通过同源克隆获得甘蔗SofSPSDⅢ基因部分序列,利用RACE技术获得其全长cDNA。扩增SofSPSDⅢ目的基因约500 bp序列,利用中间载体pHANNIBAL构建该片段的hpRNA结构,然后用Not Ⅰ将整个hpRNA结构切下,克隆到双元植物表达载体pART27上,构建该基因的hpRNA表达载体。【结果】通过同源克隆和RACE技术获得SofSPSDⅢ基因全长cDNA序列,该基因全长3252 bp,5′端UTR长度59 bp,3′端UTR长度292 bp,开放阅读框(ORF)长度2895 bp,带有真核生物典型的poly(A)尾巴(GenBank登录号:HQ117935)。该基因编码蛋白含有964个氨基酸,理论分子量108.03kDa,等电点pI=6.66;SofSPSDⅢ与SoSPS2、SbSPS和TaSPS9的氨基酸序列同源性分别为99.0%、98.9%和90.0%。构建获得SofSPSDⅢ基因的hpRNA载体pART-DⅢ-Ri。【结论】成功克隆甘蔗DⅢ家族SofSPSDⅢ基因并构建基hpRNA载体,可为下一步沉默该基因、进而解析该基因的生物学功能奠定基础。 展开更多

关键词 甘蔗 蔗糖磷酸合成酶 SofSPSDⅢ 克隆 发夹RNA 载体构建

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核盘菌多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆及hpRNAi载体的构建 被引量：3

10

作者 谢妤 《宜春学院学报》 2008年第6期121-122,共2页

多聚半乳糖醛酸酶是核盘菌致病力发挥作用的关键酶。本研究用PCR的方法从核盘菌基因组DNA中扩增出多聚半乳糖醛酸酶(PG5)基因片段,再以扩增出的PG5基因片段作为模板设计引物扩增出一个相应较小的片段。将两个PG5基因片段反向插入到植物... 多聚半乳糖醛酸酶是核盘菌致病力发挥作用的关键酶。本研究用PCR的方法从核盘菌基因组DNA中扩增出多聚半乳糖醛酸酶(PG5)基因片段,再以扩增出的PG5基因片段作为模板设计引物扩增出一个相应较小的片段。将两个PG5基因片段反向插入到植物表达载体2300 sn的35S启动子和nos终止子之间,构建出可转录表达出发夹RNA结构的组成型油菜RNA干扰载体,为今后油菜利用RNA干扰抗菌核病的基因工程研究奠定了基础。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 多聚半乳糖醛酸酶(PG5) 发夹RNA 载体构建

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玉米直链淀粉生物合成多基因转化载体构建

11

作者 郭美娜 孙丽芳 +4 位作者 杨光 邹宏达 苏胜忠 吴颖 原亚萍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期103-109,共7页

淀粉分支酶基因sbe是影响玉米直链淀粉含量的主要因素,淀粉分支酶分为3种即sbeI、sbeIIa和sbeIIb,其中sbeIIb对直链淀粉含量影响效应最大,抑制玉米淀粉分支酶sbeIIb基因的表达可减少支链淀粉的含量,从而达到提高直链淀粉的目的;ADP-葡... 淀粉分支酶基因sbe是影响玉米直链淀粉含量的主要因素,淀粉分支酶分为3种即sbeI、sbeIIa和sbeIIb,其中sbeIIb对直链淀粉含量影响效应最大,抑制玉米淀粉分支酶sbeIIb基因的表达可减少支链淀粉的含量,从而达到提高直链淀粉的目的;ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)是直链淀粉合成的关键酶,通过提高AGP表达量同样可提高玉米直链淀粉含量。以此为目的分别克隆了sbeIIb一段375bp高度保守区,玉米SBE基因一段175bp内含子,AGP完整开放阅读框,大麦胚乳特异启动子和ADPG基因终止子。构建了sbeIIb基因正、反义的hpRNA发夹结构,将该发夹结构与上述基因分别连接到pCAM-BIA3301上;构建得到包含sbeIIb基因干扰结构与AGP基因过表达的pCAMB-RSA多基因胚乳特异表达载体。为此,pCAMB-RSA载体的成功构建将为高直链淀粉玉米的培育奠定基础。 展开更多

关键词 玉米 直链淀粉 hprna ADP-葡萄糖焦磷酸化酶 sbeIIb基因

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应用套叠PCR技术构建番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA植物表达载体

12

作者 吴金燕 言普 +2 位作者 沈文涛 黎小瑛 周鹏 《生命科学研究》 CAS CSCD 2010年第5期393-397,共5页

植物真核翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白质合成的起始中发挥重要作用,参与植物-病毒互作,影响病毒的侵染过程.为了研究eIF4E在植物病毒侵染中的功能,建立了一种快速的套叠PCR新方法,成功构建了番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA结构,并将... 植物真核翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白质合成的起始中发挥重要作用,参与植物-病毒互作,影响病毒的侵染过程.为了研究eIF4E在植物病毒侵染中的功能,建立了一种快速的套叠PCR新方法,成功构建了番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA结构,并将其连接到改造的植物表达载体pBI121上,为利用RNA干扰技术研究番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因在病毒侵染中的作用奠定了基础. 展开更多

关键词 hprna 植物表达载体 套叠PCR eIF4E基因 eIFiso4E基因

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多种外源因素对转基因植物抗性影响的研究进展

13

作者 胡琼 张海松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期14-18,共5页

病毒病对植物的危害在近些年日益严重,培育抗病毒转基因植物是众多防治方法中较为有效的一种。转基因植物在不同机制介导下会产生抗性,尤其是病毒基因介导的抗性试验最为普遍。众多研究证明,抗性受多种因素作用且表现为不同水平。对插... 病毒病对植物的危害在近些年日益严重,培育抗病毒转基因植物是众多防治方法中较为有效的一种。转基因植物在不同机制介导下会产生抗性,尤其是病毒基因介导的抗性试验最为普遍。众多研究证明,抗性受多种因素作用且表现为不同水平。对插入序列来源、转录后hpRNA长度、茎环比和拷贝数等多个因素在近些年的研究进展进行了综述,重点对各自在转基因植物抗性产生中的特点及影响程度进行了分析,并对其他因素进行了展望。 展开更多

关键词 转基因植物 抗性 插入序列 hprna 拷贝数

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无筛选标记基因高油酸花生高效载体的构建 被引量：1

14

作者 李桂民 宋凯 +3 位作者 冯凯 闻珊珊 刘立侠 许守民 《东北师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期97-102,共6页

提高油酸的相对含量,增加油酸/亚油酸(O/L)的比值,已成为目前油料作物品质改良的重要内容.ahFAD2B是编码花生微粒体ω6-脂肪酸脱氢酶的主要基因,根据双链RNA介导的基因沉默原理,设计和构建了可以抑制花生种子油酸脱氢酶基因ahFAD2B表达... 提高油酸的相对含量,增加油酸/亚油酸(O/L)的比值,已成为目前油料作物品质改良的重要内容.ahFAD2B是编码花生微粒体ω6-脂肪酸脱氢酶的主要基因,根据双链RNA介导的基因沉默原理,设计和构建了可以抑制花生种子油酸脱氢酶基因ahFAD2B表达的载体,从而提高了油酸的含量,改善了花生油脂肪酸的组成.进一步将该构建组装到一个双右侧边界(DRB)的共转化载体中,用该载体来转化花生,以期从转基因后代中筛选无抗生素标记基因的高油酸花生材料. 展开更多

关键词 花生转化 基因沉默 高油酸 发卡RNA 双右侧边界载体

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hpRNA的制备新方法及其在RNAi载体中的应用

15

作者 刘晓宁 《安徽农业科学》 CAS 2016年第4期175-177,244,共4页

[目的]验证制备新方法所获得的稳定hpRNA是否可用于RNAi载体的构建并达到基因表达干扰的效果。[方法]利用制备新方法(2μL DNA与8μL H_2O混匀,95℃5 min,37℃15 min)制备hpRNA,后采用REGS方法构建Zm MDAR RNAi载体,通过Grx1-ro GFP2和... [目的]验证制备新方法所获得的稳定hpRNA是否可用于RNAi载体的构建并达到基因表达干扰的效果。[方法]利用制备新方法(2μL DNA与8μL H_2O混匀,95℃5 min,37℃15 min)制备hpRNA,后采用REGS方法构建Zm MDAR RNAi载体,通过Grx1-ro GFP2和荧光实时定量PCR检测基因表达干扰的效果。[结果]利用制备新方法制备50 nt hpRNA。Zm MDAR基因的表达量变化和Grxl-ro GFP2探针的荧光比值变化表明hpRNA介导的干扰载体引起了原生质体氧化还原状态的变化。[结论]通过制备新方法所制备的hpRNA为RNAi载体所介导的干扰作用奠定基础。 展开更多

关键词 发夹RNA REGS ZmMDAR RNAI Grx1-roGFP2

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转录后基因沉默(PTGS)及其在作物遗传改良中的应用 被引量：25

16

作者 黄冰艳 吉万全 +2 位作者 郭蔼光 Sadequr R 李忠宜 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1-5,共5页

转录后基因沉默(PTGS)或RNA干扰(RNAi)技术的发展为创造植物遗传变异体提供了新途径。PTGS于1 998年被明确为双链RNA(dsRNA)诱导的序列特异性基因沉默,短短几年内有关研究取得了突破性进展。结合利用PTGS技术进行的淀粉合成关键酶基因... 转录后基因沉默(PTGS)或RNA干扰(RNAi)技术的发展为创造植物遗传变异体提供了新途径。PTGS于1 998年被明确为双链RNA(dsRNA)诱导的序列特异性基因沉默,短短几年内有关研究取得了突破性进展。结合利用PTGS技术进行的淀粉合成关键酶基因沉默研究,概述了PTGS的作用机理和特点、dsRNA表达载体设计、沉默效应的遗传稳定性及在作物改良应用方面的研究进展。研究表明,基因沉默效应可在子代间稳定遗传并可通过杂交进行重组,显示了其在农作物改良方面的应用潜力。 展开更多

关键词 转录后基因沉默 PTGS 作物 遗传改良 作用机理 RNA干扰 反向遗传学

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甘蓝型油菜三种种子储藏蛋白和丙酮酸羧化酶基因片段的克隆及hpRNA表达载体的构建 被引量：9

17

作者 汪承刚 谢妤 +2 位作者 李长春 刘幼琪 黄邦全 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期245-250,共6页

利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napusL.)华双4号基因组DNA中扩增出种子储藏蛋白cruc iferin、nap-in、oleosin和丙酮酸羧化酶(PEPC)基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出4个相应的小片段,然后将同一基因的大小两个片段... 利用PCR从甘蓝型油菜(Brassica napusL.)华双4号基因组DNA中扩增出种子储藏蛋白cruc iferin、nap-in、oleosin和丙酮酸羧化酶(PEPC)基因片段,再以扩增出的片段为模板设计引物从一端扩增出4个相应的小片段,然后将同一基因的大小两个片段反向连接,插入到种子特异表达载体2300-nap多克隆位点的nap in启动子和nos终止子之间,构建成可以在油菜种子中转录表达发夹RNA(Hairp in RNA,hpRNA)结构的植物表达载体。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 Crucfferin OLEOSIN NAPIN 丙酮酸羧化酶(PEPC) 发夹RNA(hprna) 载体构建

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甘蓝型油菜依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)基因片段克隆及hpRNAi载体构建 被引量：6

18

作者 汪承刚 张菊红 +2 位作者 谢妤 刘幼琪 黄邦全 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第2期199-204,共6页

依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径的关键酶。本研究首先构建带有种子特异性napin启动子和Nos终止子的植物表达载体2300-nap及带有组成型35S启动子和Nos终止子的植物表达载体2300-35S;然后用PCR法从甘蓝型油菜(BrassicanapusL.... 依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径的关键酶。本研究首先构建带有种子特异性napin启动子和Nos终止子的植物表达载体2300-nap及带有组成型35S启动子和Nos终止子的植物表达载体2300-35S;然后用PCR法从甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)中油119总基因组中扩增出依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK)基因片段,再以扩增出的PFK基因片段作模板设计引物扩增出一个相应的小片段。将两个PFK基因片段反向连接,插入到植物表达载体2300-nap的napin启动子和nos终止子之间,植物表达载体2300-35S的35S启动子和nos终止子之间,分别构建成可转录表达出发夹RNA(hairpinRNA,hpRNA)结构的种子特异型和组成型油菜RNA干扰载体,为今后油菜利用RNA干扰(RNAi)提高含油量的基因工程研究奠定了基础。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PFK) 发夹RNA(hprna) 载体构建

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烟草突变体库的创建策略及其应用 被引量：7

19

作者 刘晓蓓 吴赓 +3 位作者 张芊 刘贯山 路铁刚 王元英 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第6期28-35,共8页

烟草(Nicotiana tabacum)是重要的经济作物及研究植物生命活动的模式植物。目前烟草突变体已广泛应用于烟草功能基因组研究及遗传育种,大规模高效烟草突变体库的创建将进一步推动烟草功能基因组研究,加快新品种的培育。综述了化学诱变... 烟草(Nicotiana tabacum)是重要的经济作物及研究植物生命活动的模式植物。目前烟草突变体已广泛应用于烟草功能基因组研究及遗传育种,大规模高效烟草突变体库的创建将进一步推动烟草功能基因组研究,加快新品种的培育。综述了化学诱变、电离辐射和插入标签法在烟草突变体库创建中的应用;此外,针对烟草基因组的特点,结合近年来一些植物功能基因组研究的新技术、新方法,提出了烟草突变体库创建的新策略,即基于Gateway技术的烟草全基因组过量表达策略和基于RMHR技术的烟草EST-RNA干涉策略,并就如何应用这些突变体库进行烟草功能基因组研究进行了探讨。 展开更多

关键词 烟草 突变体库 功能基因组 GATEWAY技术 RMHR技术

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烟草花叶病毒siRNA设计及其植物表达载体构建(英文) 被引量：2

20

作者 马欣荣 谈心 +1 位作者 刘华玲 张义正 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期151-154,共4页

RNA干扰技术已广泛应用于沉默基因表达的研究.本文分析烟草花叶病毒(TMV)基因序列,选择设计编码小分子发卡结构RNA(hpRNA)的cDNA;并根据农杆菌双元载体质粒p2355多克隆位点区限制性酶切位点,两端分别加入XbaI和BamHI酶切位点;分别合成单... RNA干扰技术已广泛应用于沉默基因表达的研究.本文分析烟草花叶病毒(TMV)基因序列,选择设计编码小分子发卡结构RNA(hpRNA)的cDNA;并根据农杆菌双元载体质粒p2355多克隆位点区限制性酶切位点,两端分别加入XbaI和BamHI酶切位点;分别合成单链DNA复性后插入到p2355上,经PCR、测序验证,表明已成功构建了具有潜在表达烟草花叶病毒siRNA的植物表达载体. 展开更多

关键词 RNA干扰(RNAI) 发卡RNA(hprna) 小分子干扰RNA(siRNA) 烟草花叶病毒(TMV) 植物表达载体

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