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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NM1株全基因测序及致病性分析 被引量：14
1
作者 冷雪 李真光 +3 位作者 王凤雪 温永俊 夏铭崎 武华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1752-1757,1762,共7页
从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病... 从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因序列设计引物进行RT-PCR扩增和序列测定,结果表明HP-PRRSV NMl株基因组全长15 356 bp(包括PolyA尾)。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.4%和61.9%,说明NMl属于美洲型毒株。与VR-2332相比,NMl株非结果蛋白(nsp2)第481位和第533～561位氨基酸存在缺失,该毒株属于PRRSV变异株。动物接种试验结果表明,该毒株对猪具有高致病性。 展开更多
关键词 hp—prrsv 全基因组 非结构蛋白 缺失
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非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：15
2
作者 王建华 陈小金 +5 位作者 赵丹 王玉玲 张俊哲 肖妍 董志珍 赵祥平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期907-911,共5页
为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸道综合征病毒(HP-PRRSV)的方法,本研究根据ASFV CP530R基因、CSFV 5'UTR基因和HP-PRRSV NSP2基因,分别设计了3对特异性引物和Taq Man水解探针,建立了同时... 为建立同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和高致病性猪繁殖与呼吸道综合征病毒(HP-PRRSV)的方法,本研究根据ASFV CP530R基因、CSFV 5'UTR基因和HP-PRRSV NSP2基因,分别设计了3对特异性引物和Taq Man水解探针,建立了同时检测这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法,并对其反应条件进行优化。结果表明,该方法仅对ASFV、CSFV和HP-PRRSV呈现特异性扩增,不与伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的DNA以及猪流行腹泻病毒和猪流感病毒的c DNA发生交叉反应;该方法对ASFV、CSFV和HP-PRRSV的最低检出量分别为61拷贝/μL、11拷贝/μL和41拷贝/μL;组内和组间重复性试验的Ct值变异系数均小于2.5%,具有良好的重现性。用该方法对276份临床样品进行ASFV、CSFV和HP-PRRSV的检测,所有样品的ASFV检测结果均为阴性,CSFV检测单阳性样品6份,HP-PRRSV检测单阳性样品22份,CSFV和HP-PRRSV检测双阳性样品4份。本研究建立的方法为临床样品中ASFV、CSFV和HP-PRRSV的同时检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重荧光定量RT-PCR
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我国高致病性蓝耳病研究进展 被引量：13
3
作者 薛平 曲向阳 《安徽农业科学》 CAS 2014年第5期1389-1392,共4页
自2006年5月起蓝耳病的高致病毒株导致猪群以持续高热、繁殖障碍、高死亡率为特征的疾病,并迅速蔓延至我国其他养猪省份及周边国家,成为影响我国养猪业的最重要的疾病,造成重大经济损失。近年来,国家、科研院所及大型养猪企业对我国高... 自2006年5月起蓝耳病的高致病毒株导致猪群以持续高热、繁殖障碍、高死亡率为特征的疾病,并迅速蔓延至我国其他养猪省份及周边国家,成为影响我国养猪业的最重要的疾病,造成重大经济损失。近年来,国家、科研院所及大型养猪企业对我国高致病性蓝耳病的流行病学调查、病原分子进化与特性分析、诊断、疫苗研发及其防控措施上进行了大量的研究与实践工作。从我国HP-PRRS的流行病学状况、HP-PRRSV的分子生物学特征、诊断、疫病研发与使用以及防控措施等方面对我国高效病性蓝耳病的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 关键词猪高致病性蓝耳病 hp—prrsv 病原分子特征 诊断 疫苗研发 防控措施
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白B表位诱导中和抗体能力的研究 被引量：13
4
作者 冷超粮 安同庆 +9 位作者 陈家锃 宫大庆 李登云 杨永倩 彭金美 张祎 郭娟娟 吴江 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期297-300,共4页
为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的... 为证实GP5蛋白B表位是否具有诱导抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的能力,本实验合成了PRRSV CH-1a株和高致病性PRRSV(HP-PRRSV)HuN4株B表位的短肽,分别免疫家兔制备两份特异性多肽抗血清。此外,将12头PRRSV及其抗体均为阴性的健康仔猪以HP-PRRSV HuN4疫苗毒株(HuN4-F112)进行基础免疫,然后用强毒株(HuN4-F5)进行多次接种,制备猪高免血清。间接免疫荧光检测(IFA)结果显示,两份多肽抗血清均能与PRRSV经典株和变异株发生特异性反应,IFA抗体效价无差异,表明两份血清没有显著差异。病毒中和试验结果表明,两份多肽抗血清均不具有中和PRRSV活性。间接ELISA和病毒中和试验结果表明,猪高免血清中针对B表位肽的ELISA抗体水平与血清抗PRRSV中和抗体之间没有正相关关系,而且B表位肽不能抑制中和抗体。以上结果表明HP-PRRSV B表位不能诱导产生中和抗体。 展开更多
关键词 hp-prrsv GP5 B表位 中和抗体
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我国五省区部分猪场高致病性猪蓝耳病毒感染情况检测与分析 被引量：12
5
作者 高许雷 吴发兴 +6 位作者 朱紫祥 李平 张燕霞 张志 刘爽 李晓成 黄保续 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第11期32-36,共5页
对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平... 对2008年-2009年我国五省区发病猪场235份、屠宰场的218份样品进行了高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)RT-PCR检测,挑选具有代表性的HP-PRRSV阳性样品进行HP-PRRSV ORF5基因扩增、测序及分析。结果表明,这五个省区发病场蓝耳病的检出率平均74.6%。屠宰场的检出率平均44%,混合感染主要以二重感染为主,且发病场较屠宰场严重。对获得的13株HP-PRRSV ORF5进行测序分析,发现序列长度均为603 bp,未见缺失或插入,仅在9 aa^29 aa存在点突变;序列比较发现,与普通株标准序列VR-2332株核苷酸同源性达85.9%~87.2%;与高致病性毒株的同源性JXA1-06核苷酸同源性达96.0%~99.0%。而其推导氨基酸序列与普通型、高致病性毒株的同源性分别为87.1%~88.1%和97.5%~98.0%。从遗传进化以及变异情况看,获得的PRRSV ORF5序列均为与JXA1类似的高致病性PRRSV序列,与JXA1和HB-1同属美洲型中的一个亚群。 展开更多
关键词 高致病性猪蓝耳病病毒 RT-PCR检测 ORF5基因
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河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒隐性感染情况的调查 被引量：8
6
作者 韩庆安 许玉静 +6 位作者 刘红 郑丽丽 尹克勇 杨刚 董维亚 韦景平 轩秋艳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期314-319,共6页
为了解河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的隐性感染情况,采用RT-PCR方法对2006-2009年采自全省11个地市228个县级屠宰场1 565份商品猪的肺或肺门淋巴结样品进行了PRRSV病原学检测。结果显示,PRRSV场总体阳性率为45.18%;高致病性猪... 为了解河北省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的隐性感染情况,采用RT-PCR方法对2006-2009年采自全省11个地市228个县级屠宰场1 565份商品猪的肺或肺门淋巴结样品进行了PRRSV病原学检测。结果显示,PRRSV场总体阳性率为45.18%;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)样品总阳性检出率为12.08%,这4年样品的阳性检出率分别为28.45%、40.74%、12.01%和7.31%;经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)样品总阳性检出率为2.36%,这4年样品的阳性检出率分别为3.45%、3.70%、3.92%和1.46%。PRRSV同猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型混合感染所占的比率为59.73%,HP-PRRSV和C-PRRSV同其他病原体混合感染所占的比率分别为57.67%和43.24%,混合感染以二重或三重感染为主。在同一份样品中不能同时检测到HP-PRRSV和C-PRRSV。总之,PRRSV,尤其是HP-PRRSV在河北省猪群中隐性感染的现象普遍存在,值得高度重视。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 经典猪繁殖与呼吸综合征病毒 隐性感染
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表达高致病性猪蓝耳病病毒GP5重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定 被引量：10
7
作者 陈瑾 田志军 +4 位作者 彭金美 王瑜 周艳君 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期20-23,共4页
将PCR扩增的高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)HuN4株GP5基因与含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达盒插入到伪狂犬病毒通用转移载体pgG-uni中,构建了转移载体pgG-HPGP5-EGFP。通过磷酸钙法将转移载体pgG-HPGP5-EGFP和PRV Bartha-K61株的基因... 将PCR扩增的高致病性猪蓝耳病病毒(HP-PRRSV)HuN4株GP5基因与含绿色荧光蛋白(EGFP)基因的表达盒插入到伪狂犬病毒通用转移载体pgG-uni中,构建了转移载体pgG-HPGP5-EGFP。通过磷酸钙法将转移载体pgG-HPGP5-EGFP和PRV Bartha-K61株的基因组共转染Vero细胞,经过8轮荧光蚀斑筛选和PCR鉴定获得了稳定表达EGFP的重组病毒,命名为rPRV-HPGP5。IFA和western blot结果证实HP-PRRSV HuN4株GP5在重组病毒中得到了有效表达。该重组病毒的获得为高致病性猪蓝耳病基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 高致病性蓝耳病病毒 HUN4 GP5 伪狂犬病病毒 重组
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多重RT-PCR同时检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV方法的建立及其临床应用 被引量：5
8
作者 韦正吉 严斯刚 +5 位作者 黄小武 李志源 蒋柳平 黄溢泓 盘美妮 邱新第 《广西农业科学》 CSCD 2009年第11期1476-1480,共5页
根据猪瘟病毒(CSFV)P120基因及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区两端的保守区分别设计合成1对特异性引物,建立了一种简便、快速、同时鉴别检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法扩增CSFV基因组时... 根据猪瘟病毒(CSFV)P120基因及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区两端的保守区分别设计合成1对特异性引物,建立了一种简便、快速、同时鉴别检测CSFV、PRRSV、HP-PRRSV的多重RT-PCR方法。该方法扩增CSFV基因组时可获得508bp的片段,扩增PRRSV时可获得320bp的片段,扩增HP-PRRSV基因组时可获得230bp的片段,因此,根据多重RT-PCR产物大小可将三者区分开来。利用建立的多重RT-PCR方法,对50份临床可疑病料进行检测,结果发现,CSFV阳性率为8%,PRRSV阳性率为18%,HP-PRRSV阳性率为22%,而CSFV和HP-PRRSV混合感染阳性率达2%,PRRSV和HP-PRRSV混合感染阳性率达16%,说明所建立的多重RT-PCR方法简便、快速、特异,可同时鉴别CSFV、PRRSV及HP-PRRSV,亦可用于感染这3种病毒的临床病料的快速鉴定和分子流行病学调查。 展开更多
关键词 多重RT-PCR CSFV prrsv hp-prrsv 鉴别诊断
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中国新发L1A PRRSV变异株的出现与流行状况分析 被引量：1
9
作者 许浒 龚帮俊 +17 位作者 李超 孙琪 李宛生 赵静 郭镇洋 李金昊 张思钰 相丽润 彭金美 王倩 周国辉 冷超粮 汤艳东 赵鸿远 安同庆 蔡雪辉 张洪亮 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期779-786,共8页
2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类N... 2017年我国首次发现类NADC34 PRRSV,该类病毒属于L1A(Sublineage1.5)亚型。近年来,新发类NADC34 PRRSV在我国不断变异,已经成为危害我国养猪业重要的PRRSV亚型。为了确定新发类NADC34 PRRSV的流行特征,本研究从2021年~2023年37份新发类NADC34 PRRSV阳性病料样品中选择4份样品经PCR分段扩增PRRSV全基因组序列并测序,利用SeqMan软件拼接,获得了4株完整的PRRSV全基因组序列,相应的病毒分别命名为TZJ2165、TZJ2451、TZJ2756、WK621株。下载GenBank中所有中国类NADC34 PRRSV和美国L1C变异株的ORF5基因及NSP2基因序列,利用MEGA7.0构建上述PRRSV ORF5基因序列的遗传进化树,分析其遗传变异情况。利用Megalign软件分析各分支内ORF5基因序列的相似性,以及新发类NADC34 PRRSV NSP2氨基酸序列,分析其是否存在一致的氨基酸缺失特征。根据PRRSV ORF5基因的限制性片段多态性(RFLP)分类方法,对新发类NADC34 PRRSV的ORF5基因序列分类。利用Simplot软件分析新发类NADC34 PRRSV和L1C变异株全基因组序列中的重组事件。基于ORF5基因进化树结果显示,这4株新发类NADC34 PRRSV与之前分离的TZJ2007、BJ-20-06等12株PRRSV均属于L1A亚型,与早期类NADC34 PRRSV相比,这些病毒株形成了一个独立分支,将其命名为L1A变异株,且其ORF5基因序列的相似性≥93%。NSP2氨基酸序列比对分析发现,L1A变异株具有一致的131个氨基酸不连续缺失的分子特征。ORF5基因的RFLP模式分析结果显示,L1A变异株RFLP模式分为1-4-2、1-4-4、1-5-4、1-7-4和1-6-4,模式并不一致。重组分析结果显示,L1A变异株存在相似的重组模式,它们均是以NADC30株(类NADC30 PRRSV)为主要亲本,JXA1株(类HP-PRRSV)提供部分非结构蛋白基因区域、IA/2014/NADC34株(类NADC34 PRRSV)提供ORF2a~ORF6区域的重组病毒。目前L1A变异株已经在黑龙江、内蒙古、辽宁、北京、广西、江苏、四川、福建、山东、广东和山西等11个省份检出。通过� 展开更多
关键词 L1A prrsv变异株 类NADC30 prrsv 类NADC34 prrsv hp-prrsv 重组 出现与流行
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新生仔猪大批死亡疫情诊断及HP-PRRSV的分离鉴定 被引量：9
10
作者 陈冰 马玲 +4 位作者 刘金凤 林俊 张健 吴健敏 白安斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第2期520-526,共7页
本试验通过对高发病率、高死亡率的新生仔猪腹泻病例进行诊断与控制,以期为该病的防控提供参考和借鉴。2013年1月初广西玉林某规模猪场发生以2-3日龄仔猪腹泻、呕吐、精神不振为主的疫情,发病率80%,死亡率80%-100%。为确定此次疫病的病... 本试验通过对高发病率、高死亡率的新生仔猪腹泻病例进行诊断与控制,以期为该病的防控提供参考和借鉴。2013年1月初广西玉林某规模猪场发生以2-3日龄仔猪腹泻、呕吐、精神不振为主的疫情,发病率80%,死亡率80%-100%。为确定此次疫病的病因,本研究从发病猪群中采集10份病死猪小肠、脾脏、肺脏、淋巴结等组织进行细菌分离、PCR检测、病毒分离、病毒效价（TCID50）测定、基因测序与分析。检测结果显示猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）均为阳性,猪瘟病毒（CSFV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪轮状病毒（PRoV）均为阴性,未分离到致病菌。克隆测序分离株的ORF7和Nsp2全基因序列,结果显示分离株为美洲型PRRSV,ORF7基因全长为372bp,编码123个氨基酸;Nsp2基因全长为2 850bp,编码950个氨基酸,其中Nsp2基因在第481、532—560位发生了共30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV（HP-PRRSV）JXA1株Nsp2基因缺失特征一致,属于HP-PRRSV分离株。匀浆病料接种Marc-145细胞,48h开始出现PRRSV特征性病变,TCID50为10-5.75/0.1mL。推测此次新生仔猪大批死亡主要是PEDV感染后继发高致病性猪繁殖与呼吸综合征所致。 展开更多
关键词 新生仔猪 疫情诊断 猪流行性腹泻病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
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表达高致病性和NADC30样PRRSV毒株GP5蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建
11
作者 王林青 侯承尧 +4 位作者 马晓 刘颖 刘芳 金钺 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1587-1593,共7页
参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表... 参考猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)株HENAN-XINX基因组序列(GenBank登录号:KF611905)中GP5基因,合成1对特异性引物,BamHⅠ和HindⅢ分别引入到其5′端,RT-PCR扩增NADC30样PRRSV(NADC30-like PRRSV)毒株GP5基因。将扩增片段插入到真核表达质粒pBApo-EF1α_Pur_DNA的BamHⅠ和HindⅢ位点,然后扩增含GP5/NA的表达盒,将其导入含高致病性PRRSV(HP-PRRSV)GP5基因的伪狂犬病病毒(PRV)转移质粒pG-GP5/HP-EGFP中,构建重组质粒pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。用脂质体转染法将PRV变异株3基因缺失株rPRV-gE-/gI-/TK-基因组与pG-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP质粒共转染ST细胞,得到携带有HP-PRRSV和NADC30-like PRRSV的GP5基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组PRV株rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30-EGFP。该重组病毒与CRISPR/Cas9-EGFP敲除质粒共转染ST细胞,经4轮病毒空斑纯化得到了无绿色荧光标签的重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30株。经PCR和RT-PCR证实成功构建重组病毒rPRV-GP5/HP-GP5/NADC30。 展开更多
关键词 NADC30-like prrsv hp-prrsv GP5基因 重组PRV
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猪繁殖与呼吸综合征类NADC30与HP-PRRSV毒株RT-PCR鉴别方法的建立与应用 被引量：5
12
作者 徐雷 赵军 +3 位作者 杨晓宇 殷鑫欢 张继宗 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期109-113,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播,导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒,其特性为变异快,存在毒株间的重组。因此,病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。本试验建立了一种能够区分类高致病... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种能够引起大面积呼吸道疾病并快速传播,导致母猪流产和仔猪死亡的RNA病毒,其特性为变异快,存在毒株间的重组。因此,病原的快速检测和鉴定对于该病的防控十分重要。本试验建立了一种能够区分类高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒类NADC30与HP-PRRSV毒株的检测方法,根据nsp2基因的高变区的比对结果,选择其保守序列,设计一对检测引物,类NADC30扩增片段大小为334 bp,HP-PRRSV毒株扩增片段大小为514 bp,通过优化反应条件,最终建立了一种一对引物就可以区分检测类NADC30与HP-PRRSV毒株的RT-PCR检测方法。应用本试验所建立的RT-PCR方法对2017年12月至2018年2月采至四川多地区的疑似PRRSV感染发病的46份肺脏进行检测。结果显示,类NADC30检出率为32. 6%,高于HP-PRRSV毒株的检出率(10. 9%)。该方法的建立,为类NADC30和HP-PRRSV毒株的快速鉴别诊断提供了方法,具有重要意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 类NADC30 hp-prrsv 鉴别诊断 RT-PCR
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检测PRRSV及鉴别HP-PRRSV毒株的二重PCR与二重TaqMan荧光定量PCR方法
13
作者 陈旭 汤德元 +6 位作者 曾智勇 王彬 袁盛林 廖正波 何松 周飘 毛茵茗 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期316-324,共9页
为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M... 为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)早期检测及快速鉴别高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)变异株,利用HP-PRRSV Nsp2蛋白第481位和532~560位氨基酸缺失的特性设计2对引物,优化反应条件建立二重PCR检测方法,同时针对PRRSV M基因和HP-PRRSV Nsp2基因设计特异性引物和探针,优化反应条件建立二重TaqMan荧光定量PCR方法,并评估这2种方法的敏感性、特异性、重复性。敏感性试验结果显示:二重PCR方法的检测下限分别为0.058 ng/μL(PRRSV)和4.7 ng/μL(HP-PRRSV);二重TaqMan荧光PCR方法的检测下限分别为10 copies/μL(PRRSV)和100 copies/μL(HP-PRRSV)。这2种方法与其他猪病病原均不发生非特异性反应,重复性试验结果良好。经131份临床样品检测,可得到PRRSV的阳性率约12.2%(16/131)、HP-PRRSV的阳性率约17.6%(23/131)、二者的混合感染率约8.4%(11/131)。证实,本研究成功建立了二重PCR和二重TaqMan荧光定量PCR检测方法,可为临床上猪繁殖与呼吸综合征的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 二重PCR 二重TaqMan荧光定量PCR 鉴别检测
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：7
14
作者 程亮亮 祁克宗 +2 位作者 占松鹤 朱良强 秦爱建 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期85-88,共4页
为快速鉴别诊断高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病,根据GenBank中登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区和猪伪狂犬病病毒(PRV)gB基因保守区序列,分别设计并合成了2对特异性扩增引物,通过对反应条件的优... 为快速鉴别诊断高致病性猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病,根据GenBank中登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp2基因缺失区和猪伪狂犬病病毒(PRV)gB基因保守区序列,分别设计并合成了2对特异性扩增引物,通过对反应条件的优化,建立了能够同时检测HP-PRRSV和PRV的双重PCR诊断方法。利用建立的双重PCR方法对30份临床可疑样品进行检测,并与商品化单项PCR试剂盒进行对比验证。结果表明,本试验建立的双重PCR方法具有较高的灵敏度和特异性,与商品化单项PCR试剂盒检测结果完全一致。因此,该双重PCR方法能够用于HP-PRRSV和PRV单项或混合感染的临床样品快速鉴别检测。 展开更多
关键词 双重PCR 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪为狂犬病病毒
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一株不能被高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)疫苗抗血清中和的HP-PRRSV的分离鉴定 被引量：5
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作者 陈家锃 白云 +11 位作者 常丹 张秋月 王倩 冷超粮 张武超 赵鸿远 叶超 李琳 田志军 彭金美 安同庆 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期174-177,共4页
为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异及流行情况，本研究采用猪肺泡巨噬细胞培养分离PRRSV野毒株，从某疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场的发病猪肺脏病料中分离了一株PRRSV，命名为HEL-12。并将该病毒测序分析，其基因组... 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的遗传变异及流行情况，本研究采用猪肺泡巨噬细胞培养分离PRRSV野毒株，从某疑似猪繁殖与呼吸综合征发病猪场的发病猪肺脏病料中分离了一株PRRSV，命名为HEL-12。并将该病毒测序分析，其基因组序列已提交到NCBI （序列号：KJ019330）。基因序列比对显示，该分离株与经典株相比其NSP2蛋白存在HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的典型特征，与HP-PRRSV代表株JXA1和HuN4株的同源性仅为97.3 %，其变异主要位于基因组编码的结构蛋白GP2～GP5和非结构蛋白NSP2。血清中和试验表明10份HP-PRRSV疫苗抗血清均不能中和该病毒株，表明HEL-12的抗原发生了较大变异，是一株新的HP-PRRSV变异株。本研究表明，PRRSV一直处于不断变异中，需要对其遗传变异持续监测。 展开更多
关键词 hp-prrsv 遗传变异 病毒中和试验
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同时检测五种引起猪繁殖障碍的病毒的多重PCR的建立 被引量：5
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作者 胡凌 王印 +3 位作者 杨泽晓 姚学萍 林星宇 李桂黎 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1047-1052,共6页
为建立一种能同时检测5种引起猪繁殖障碍的病毒的多重PCR方法,分别针对各病毒的保守序列设计了4对特异性引物,其中3对分别用于扩增猪瘟病毒(CSFV)E2基因、非洲猪瘟病毒(ASFV)VP72基因、伪狂犬病病毒(PRV)gB基因的目的片段;针对NSP2基因... 为建立一种能同时检测5种引起猪繁殖障碍的病毒的多重PCR方法,分别针对各病毒的保守序列设计了4对特异性引物,其中3对分别用于扩增猪瘟病毒(CSFV)E2基因、非洲猪瘟病毒(ASFV)VP72基因、伪狂犬病病毒(PRV)gB基因的目的片段;针对NSP2基因设计的1对引物用于区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)。通过对反应条件的优化,建立了快速检测CSFV、ASFV、PRV、PRRSV和HP-PRRSV的多重PCR方法。敏感性试验结果显示,该多重PCR对这5种病原核酸的最低检测量分别为2.10×103(HP-PRRSV),1.30×103(PRRSV),1.09×104(CSFV),1.50×103(ASFV)和8.97×102(PRV)copies/μL。对49份临床样品的检测结果显示,它们的混合感染率为51%(25/49)。该方法对阴性样本的扩增结果均为阴性,并且无交叉反应性,表明该方法特异性良好,具有快速、灵敏且成本低等优点,能够对猪繁殖障碍病毒病的单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断,并对其流行病学调查具有深远意义。 展开更多
关键词 多重PCR 非洲猪瘟病毒 猪瘟病毒 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 伪狂犬病病毒
原文传递
2012年～2014年我国东南地区HP-PRRSV GP5基因的遗传进化与变异分析 被引量：6
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作者 张显浩 陈瑞爱 +3 位作者 李冰 裴仉福 蔡佳跃 贺东生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期71-74,共4页
为分析高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）的遗传变异情况,本研究对2012年～2014年东南地区8个省市21份HP-PRRSV阳性样品的GP5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析.结果表明：本研究检测的21株... 为分析高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）的遗传变异情况,本研究对2012年～2014年东南地区8个省市21份HP-PRRSV阳性样品的GP5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析.结果表明：本研究检测的21株HP-PRRSV GP5基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为81.1％～99.8％和75.1％～100％.其中有13个病毒株的GP5基因与JXA1株同属于2.2亚群,其余8个病毒株的GP5基因与台湾2007年、2013年分离株属于2.3亚群.遗传进化树分析表明,2.3亚群是2014年流行的一个新兴亚群,它的流行可能与两地猪群贸易交流频繁有关,其GP5基因在抗原表位和糖基化位点发生了一定的变异.本研究结果为HP-PRRSV遗传进化分析和疫病防制提供了新的参考. 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 东南地区 GP5 分子流行病学
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通过抑制caspase-8活性提高PRRSV体外培养滴度的初步研究
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作者 钟华 刘金凤 +7 位作者 陈冰 覃绍敏 陈凤莲 马玲 林俊 毛燕 秦树英 白安斌 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期27-34,共8页
探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制,从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株(HP-PRRSV)感染Marc-145细胞,并用三种凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHDFMK)分别处理PRRSV感染细... 探讨通过凋亡抑制剂阻断PRRSV诱导的细胞凋亡来促进PRRSV体外复制,从而提高PRRSV体外培养滴度的可行性。本研究以PRRSV高致病毒株(HP-PRRSV)感染Marc-145细胞,并用三种凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK、Z-IETD-FMK、Z-LEHDFMK)分别处理PRRSV感染细胞,通过比较在不同的浓度、不同的作用时间处理下PRRSV培养滴度(TCID50)来筛选最佳抑制剂及其最佳使用浓度和作用时间。同时采用caspase-8活性蛋白酶检测试剂盒、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、流式细胞术等检测在最佳抑制剂作用下caspase-8活性、细胞凋亡及其通路相关因子表达情况。结果显示:z-IETD-FMK(caspases-8特异性抑制剂)为最佳抑制剂,10μmol/L为最佳使用浓度,PRRSV感染细胞48 h后加入10μmol/L Z-IETD-FMK能最大限度提高PRRSV体外培养滴度。此外,PRRSV感染Marc-145细胞后,细胞caspase-8活性显著增加,且随着感染时间的延长,细胞凋亡率及促凋亡因子Bax均呈上升趋势,而抑凋亡因子Bcl-2表达水平却呈下降趋势;用抑制剂z-IETD-FMK处理后,细胞caspases-8活性下调,细胞凋亡率也下降,Bax表达量显著低于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01),与此相反Bcl-2的表达水平为升高趋势,显著高于不加抑制处理的病毒感染组(P<0.01)。说明,caspase-8特异性抑制剂能有效抑制PRRSV诱导的细胞凋亡。结果提示HPPRRSV感染可通过caspase-8途径诱导Marc-145细胞凋亡,从而抑制病毒的复制。使用caspase-8特异性抑制剂可有效抑制细胞凋亡,进而提高病毒体外培养滴度。 展开更多
关键词 hp-prrsv CASPASE 细胞凋亡 活性检测
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一例高致病性猪蓝耳病、猪流行性腹泻混合感染的诊断 被引量：6
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作者 何德肆 李海辉 +2 位作者 颜爱 彭兰丽 曾焕 《猪业科学》 2020年第2期72-74,共3页
2018年11月,湖南郴州某规模化猪场发生2~3日龄仔猪呕吐、腹泻为主的疫情,发病率70%,死亡率80%,为确定引起仔猪腹泻的原因,从发病猪群中采集2头病死猪的小肠、肺脏、淋巴结等组织进行PCR检测及基因测序分析。检测结果显示猪流行性腹泻和... 2018年11月,湖南郴州某规模化猪场发生2~3日龄仔猪呕吐、腹泻为主的疫情,发病率70%,死亡率80%,为确定引起仔猪腹泻的原因,从发病猪群中采集2头病死猪的小肠、肺脏、淋巴结等组织进行PCR检测及基因测序分析。检测结果显示猪流行性腹泻和猪蓝耳病均为阳性,猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒均为阴性。测序分析显示所检测到的猪蓝耳病病毒与JXA1毒株高度同源,为高致病性毒株,检测到的猪流行性腹泻病毒为变异毒株,隶属于GⅡ-b群。综合分析,引起此次新生仔猪大批死亡系变异猪流行性腹泻病毒混合感染高致病性猪蓝耳病所致。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 高致病性猪蓝耳病毒
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猪TRIM32分子的克隆、表达及其功能分析
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作者 李慧 张彦兵 +9 位作者 解艺璇 陆艳 相笑 刘珂 魏建超 李宗杰 邵东华 李蓓蓓 马志永 邱亚峰 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期158-163,共6页
TRIM32作为TRIM家族中的一员,在宿主先天性免疫防御中起着重要的作用。然而,现今对猪TRIM32分子的研究鲜有报道。首先,利用RT-PCR从猪肺中扩增获得了猪TRIM32分子,并将其克隆入真核表达载体p3xFlag-CMV-14,构建重组真核表达载体pFlag-po... TRIM32作为TRIM家族中的一员,在宿主先天性免疫防御中起着重要的作用。然而,现今对猪TRIM32分子的研究鲜有报道。首先,利用RT-PCR从猪肺中扩增获得了猪TRIM32分子,并将其克隆入真核表达载体p3xFlag-CMV-14,构建重组真核表达载体pFlag-porTRIM32。随后,在Marc145细胞上利用过表达猪TRIM32,鉴定其在PRRSV感染中的作用。此外,为了进一步验证其在PRRSV感染中的作用,在沉默Marc145细胞中内源性TRIM32表达的情况下,检测了PRRSV的感染情况。结果显示:成功构建了pFlag-porTRIM32真核表达载体;Western blot的结果显示,Flag抗体能识别瞬时表达的融合蛋白Flag-porTRIM32;在Marc145细胞上过表达猪TRIM32分子,可显著地抑制PRRSV的复制;相反,在Marc145细胞上干扰TRIM32的表达,可明显增加PRRSV的复制。因此,我们的研究结果初步揭示了猪TRIM32分子具有抗PRRSV感染的作用,为进一步探究猪TRIM32抗HP-PRRSV感染的机制奠定基础。 展开更多
关键词 TRIM32 真核表达 抗病毒反应 hp-prrsv
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