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基于Nrf2/ARE信号通路探究人参皂甙Rg3对高糖诱导HMC细胞纤维化及生物活性作用机制 被引量：1
1
作者 吴胜斌 曹振东 +2 位作者 王应灯 王蕾 蒉纲 《西部医学》 2022年第10期1414-1419,共6页
目的基于核因子NF-E2相关因子(Nrf2)/抗氧化物反应元件(ARE)信号通路探究人参皂苷Rg3对高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)纤维化及生物活性作用机制。方法将人肾小球系膜细胞分为NC组、HG组、Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组5组。检测细胞生物活性... 目的基于核因子NF-E2相关因子(Nrf2)/抗氧化物反应元件(ARE)信号通路探究人参皂苷Rg3对高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)纤维化及生物活性作用机制。方法将人肾小球系膜细胞分为NC组、HG组、Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组5组。检测细胞生物活性;荧光探针DCFH-DA法检测细胞中ROS含量;蛋白质印迹检测细胞中Nrf2、HO-1蛋白及TGF-β、Ⅳ-C、FN蛋白表达。结果与NC组相比,HG组细胞增殖活性及侵袭能力均显著增加(P<0.05);与HG组相比,Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组细胞增殖活性及侵袭能力均显著降低(P<0.05);Rg3C组细胞增殖活性及侵袭能力显著低于Rg3A组、Rg3B组(P<0.05)。与NC组相比,HG组细胞凋亡率显著降低,G1期增加(P<0.05);与HG组相比,Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组细胞凋亡率均显著增加,G1期均显著降低,Rg3C组细胞G1期<Rg3B组<Rg3A组(P<0.05),呈递增趋势(P<0.05),且Rg3C组细胞凋亡率和细胞周期变化最为显著(P<0.05)。与NC组相比,GH组细胞中ROS含量显著增加(P<0.05);与GH组相比,Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组细胞中ROS含量均显著降低(P<0.05)。与NC组相比,GH组细胞中NNrf2和HO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05);与GH组相比,Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组细胞中Nrf2、HO-1蛋白表达均显著增加,且Rg3C组细胞中蛋白表达增加最显著(P<0.05)。与NC组相比,GH组细胞中TGF-β、Ⅳ-C、FN明显增加(P<0.05);与GH组相比,Rg3A组、Rg3B组、Rg3C组细胞中TGF-β、Ⅳ-C、FN表达均显著降低,且Rg3C组低于Rg3B组低于Rg3A组(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3可抑制高糖诱导的HMC细胞增殖、侵袭,促进HMC细胞凋亡,通过对细胞内Nrf2/ARE信号通路相关蛋白的调控加强系膜细胞的抗氧化能力。 展开更多
关键词 Nrf2/ARE信号通路 人参皂苷RG3 高糖 hmc细胞 纤维化 生物活性
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1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响 被引量：1
2
作者 王琴 高倩 +2 位作者 廖静 沈呈 杨烨 《四川医学》 CAS 2021年第6期541-546,共6页
目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b i... 目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。 展开更多
关键词 1 25(OH)_(2)D_(3) hmc细胞 高糖 miR-130b转染 TGF-β1/Smad3 Col-Ⅳ
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过表达TRPM8在SCN5A错义突变后对肥大细胞功能的影响
3
作者 徐伟 杨旸 +3 位作者 朱利红 王迪迪 黄玉荣 杨杰 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第12期1483-1488,1538,共7页
目的探究过表达瞬时受体电位阳离子通道M8(TRPM8)在心脏钠通道基因(SCN5A)错义突变后对肥大细胞功能的影响。方法构建TRPM8基因过表达载体及SCN5A干扰载体并分别转染入人肥大细胞HMC-1中,转染成功后用CCK8检测细胞增殖能力,qPCR、Wester... 目的探究过表达瞬时受体电位阳离子通道M8(TRPM8)在心脏钠通道基因(SCN5A)错义突变后对肥大细胞功能的影响。方法构建TRPM8基因过表达载体及SCN5A干扰载体并分别转染入人肥大细胞HMC-1中,转染成功后用CCK8检测细胞增殖能力,qPCR、Western blot法检测TRPM8与SCN5A的表达情况,中性红染色计算肥大细胞脱颗粒百分率,比色法测定β-氨基己糖苷酶释放率。结果TRPM8基因过表达及SCN5A干扰载体成功构建;与空白对照组相比,过表达TRPM8与干扰SCN5A后均抑制了HMC-1细胞的增殖能力,过表达TRPM8对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用低于干扰SCN5A组(P<0.05);与干扰SCN5A组相比,干扰SCN5A的同时过表达TRPM8后对HMC-1细胞增殖能力的抑制作用有所降低(P<0.05);与空白对照组相比,过表达TRPM8降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率,干扰SCN5A后增强了HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P<0.05);与干扰SCN5A后相比,在干扰SCN5A的同时过表达TRPM8可降低HMC-1细胞脱颗粒反应和β-氨基己糖苷酶释放率(P<0.05);干扰SCN5A后可下调HMC-1细胞中TRPM8的表达(P<0.05)。结论TRPM8可以抑制SCN5A错义突变后对肥大细胞的激活作用,并可能通过调控SCN5A来减缓肠易激综合征患者疼痛等不适症状。 展开更多
关键词 hmc-1细胞 瞬时受体电位阳离子通道M 8 基因SCN5A
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肥大细胞在细菌鞭毛蛋白引起的肠T84细胞单层损伤中的作用
4
作者 贺欣 杨万荷 +4 位作者 路瑶 张目涵 马娜 赵美华 冯百岁 《中华炎性肠病杂志（中英文）》 2018年第1期46-50,共5页
目的 探讨细菌鞭毛蛋A对肠黏膜屏障影响及肥大细胞在肠黏膜屏障损伤中作用.方法 在Transwell小室内共同培养T84细胞单层和肥大细胞(HMC-1),模拟肠黏膜屏障,并向培养系统中加入细菌鞭毛蛋白.通过测量不同条件下T84细胞单层的跨上皮电阻(T... 目的 探讨细菌鞭毛蛋A对肠黏膜屏障影响及肥大细胞在肠黏膜屏障损伤中作用.方法 在Transwell小室内共同培养T84细胞单层和肥大细胞(HMC-1),模拟肠黏膜屏障,并向培养系统中加入细菌鞭毛蛋白.通过测量不同条件下T84细胞单层的跨上皮电阻(TER)值和辣根过氧化酶(HRP)通过率,分析肠黏膜屏障完整性;使用免疫细胞化学实验检测T84细胞对细菌鞭毛蛋白的摄取;使用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测基底层培养基中经T84细胞转运的细菌鞭毛蛋白含量,以及HMC-1细胞分泌的组胺和类胰蛋白酶β2(MCT)的水平.结果 较低浓度(≤8mg/L)的细菌鞭毛蛋白对T84细胞单层的相对TER值以及HRP通过率无显著影响;当细菌鞭毛蛋白浓度>8mg/L,随着细菌鞭毛蛋白浓度的增加T84细胞单层的相对TER值逐渐下降,HRP通过率逐渐增加.免疫细胞化学结果显示,和正常对照组相比,细菌鞭毛蛋白组T84细胞的胞质被染成棕褐色.ELISA结果提示细菌鞭毛蛋白组基底侧细菌鞭毛蛋白吸光度A值明显高于正常对照组,并且各组组胺浓度和MCT水平与各组细菌鞭毛蛋白HRP通过率的结果保持一致.结论 细菌鞭毛蛋白可直接破坏T84细胞单层或经T84细胞摄取并转运到达基底侧,激活HMC-1细胞,使其释放组胺及类胰蛋白酶β2,增强T84细胞单层肠黏膜屏障的损伤. 展开更多
关键词 细菌鞭毛蛋白 T84细胞单层 hmc-1细胞 肠黏膜屏障
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