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HLA-B2704转基因小鼠模型的建立 被引量：14
1
作者 丁海明 吕厚山 +4 位作者 陈占昆 蒋东芳 鞠立梅 王申五 林剑浩 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期11-14,I001,共5页
目的　制备HLA B2 70 4转基因小鼠。方法　应用显微注射将HLA B2 70 4基因注入C5 7BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 ,出生动物及其后代经PCR初筛 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性标本作进一步鉴定和整合基因拷贝数测... 目的　制备HLA B2 70 4转基因小鼠。方法　应用显微注射将HLA B2 70 4基因注入C5 7BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 ,出生动物及其后代经PCR初筛 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性标本作进一步鉴定和整合基因拷贝数测定 ,阳性者行免疫组化染色和流式细胞术检测HLA B2 70 4蛋白表达水平。结果　 10只仔鼠 (首建转基因鼠 ,founder)表达有HLA 2 70 4基因。由注射基因后移卵出生的 10 1只小鼠中 ,C5 7BL/6×昆明鼠杂种 3 7只 ,阳性 7只 ( 18 9% ) ,昆明鼠×昆明鼠杂种 64只 ,阳性 3只 ( 4 7% ) ,阳性动物外周血淋巴细胞、皮肤和胃肠道上皮细胞内均有HLA B2 70 4蛋白表达。结论　应用C5 7BL/6和昆明鼠成功建立了HLA B2 70 4的转基因小鼠。与昆明鼠×昆明鼠F1代相比 ,C5 7BL/6×昆明鼠F1代更适合用于转基因动物制备。 展开更多
关键词 小鼠 转基因模型 hla-b2704基因 强直性脊柱炎
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携带HLA-B2704基因转基因小鼠技术的建立 被引量：1
2
作者 陈占昆 吕厚山 +4 位作者 蒋东芳 王东 艾京 丁海明 王申五 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期245-249,共5页
应用显微注射法制备携带HLA B2 70 4基因的转基因小鼠 .对 2 86只昆明小鼠激素注射进行超排卵 ,采集受精卵 ,将含HLA B2 70 4基因的基因组DNA片段 (简称HLA B2 70 4DNA)显微注射到受精卵原核内 ,把注射存活的两细胞期受精卵移入假孕鼠... 应用显微注射法制备携带HLA B2 70 4基因的转基因小鼠 .对 2 86只昆明小鼠激素注射进行超排卵 ,采集受精卵 ,将含HLA B2 70 4基因的基因组DNA片段 (简称HLA B2 70 4DNA)显微注射到受精卵原核内 ,把注射存活的两细胞期受精卵移入假孕鼠的输卵管内使其发育产生后代 .用PCR方法进行F0代仔鼠及F1代仔鼠的转基因整合的检测 .利用RT PCR检测阳性鼠中的HLA B2 70 4转基因的表达 .采集了 84 11个卵 ,可注射卵 6 6 0 9个 ,其中注射存活的两细胞期受精卵 4 2 77个 ,卵的注射存活率为 6 4 7%.将卵移入 15 3只假孕鼠 ,其中 2 6只怀孕产仔 ,存活 10 1只 .在 10只F0代仔鼠基因组中有HLA B2 70 4基因整合 ,整合率为 9 9%.转基因阳性鼠F0代之间以及与正常鼠之间进行交配 ,产生的F1代仔鼠 78只 ,其中 15只为阳性 .阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4转基因mRNA的表达 .在HLA B2 70 4转基因阳性小鼠中 ,6只小鼠皮肤出现脱毛 ,1只小鼠的足部及足趾明显红肿 ,2只在脱毛同时明显畏光 ,1只出现腹泻 .结果表明 ,成功地建立了HLA B2 70 4的转基因小鼠技术 ,该小鼠类似强直性脊柱炎的小鼠模型 . 展开更多
关键词 hla-b2704基因 转基因小鼠 微注射 疾病模型
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