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鱼腥草对HIV假病毒作用的初步研究 被引量：1
1
作者 李文胜 石秀兰 +1 位作者 李敏 赵国强 《河南医学研究》 CAS 2011年第4期395-397,共3页
目的:观察鱼腥草体外对HIV假病毒的作用。方法:鱼腥草给予大鼠灌胃,采血制备含药血清;HIV假病毒载体pNL4-3 Luc R-E-和质粒phRL-SV40瞬时转染HEK293T细胞;含药血清刺激各组细胞,培养24 h后观察荧光素酶活性及检测P24蛋白含量。结果:实... 目的:观察鱼腥草体外对HIV假病毒的作用。方法:鱼腥草给予大鼠灌胃,采血制备含药血清;HIV假病毒载体pNL4-3 Luc R-E-和质粒phRL-SV40瞬时转染HEK293T细胞;含药血清刺激各组细胞,培养24 h后观察荧光素酶活性及检测P24蛋白含量。结果:实验组的荧光素酶值和P 24蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:鱼腥草对HIV假病毒复制具有一定的抑制作用,推测其具有潜在的抗艾滋功效。 展开更多
关键词 鱼腥草 hiv假病毒 荧光素酶活性 P24蛋白 HEK293T细胞
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基于假病毒技术探讨黄芩苷抗HIV-1活性研究 被引量：4
2
作者 庞晓军 黎东旺 陈丽华 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期129-135,共7页
目的:基于假病毒技术探究黄芩苷抗HIV-1活性作用。方法:利用HIV-1骨架质粒NL4-3 mCherry Luciferase、HIV-1包膜蛋白质粒pCMV-VSV-G和人胚肾细胞HEK-293T构建HIV-1假病毒药物筛选体系,并对该体系进行优化和安全性验证。测定黄芩苷对293... 目的:基于假病毒技术探究黄芩苷抗HIV-1活性作用。方法:利用HIV-1骨架质粒NL4-3 mCherry Luciferase、HIV-1包膜蛋白质粒pCMV-VSV-G和人胚肾细胞HEK-293T构建HIV-1假病毒药物筛选体系,并对该体系进行优化和安全性验证。测定黄芩苷对293T细胞活性、HIV-1假病毒活性、HIV-1逆转录酶(RT)活性、RNA依赖的DNA聚合酶(RDDP)活性以及核糖核酸酶H(RNase H)活性的影响。将黄芩苷分别与HIV-1 RT的晶体结构(2ZD1)、RNase H的晶体结构(3QIN)进行分子对接,探讨黄芩苷与HIV-1 RT、RNase H的相互作用及结合性能。结果:成功构建出了具有双报告检测基因的HIV-1假病毒药物筛选体系,该体系只有单轮感染活性;黄芩苷对293T细胞活性的抑制作用随浓度的增大而增加,黄芩苷在100μmol·L^(-1)浓度以下对293T细胞的活力影响较小(P>0.05);黄芩苷对HIV-1假病毒具有一定的抑制作用,给药浓度越高,其相应的萤光素酶基因和红色荧光基因表达则越低,在100μmol·L^(-1)高浓度下其抑制率可达60%左右;黄芩苷对HIV-1 RT活性和RNase H表现出明显的抑制作用(P<0.05),且呈现浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC;)分别约为58.4μmol·L^(-1)、78.4μmol·L^(-1);但黄芩苷对HIV-1 RDDP活性的抑制作用较弱,其IC;约为1.686 mmol·L^(-1);黄芩苷与HIV-1 RT、RNase H蛋白的结合区域均为对应的酶活区域,其分子对接打分值分别为|-10.991|、|-8.485|;黄芩苷能够与HIV-1 RT酶蛋白的LYS101、ILE180氨基酸残基形成氢键作用,与TRP229氨基酸残基形成π-π作用,与VAL106、TYR181、TYR188、VAL108等氨基酸残基形成多个疏水作用;黄芩苷结构母核上的苯环可以与RNase H酶蛋白中的一个Mn;形成一个阳离子-π作用,黄芩苷还能与GLY444、ASP498、GLN500、TYR501氨基酸残基形成氢键作用。结论:黄芩苷在体外具有较好的抗HIV-1活性,其主要的作用靶点为HIV-1 RT和HIV-1 RNase H。 展开更多
关键词 黄芩苷 hiv-1假病毒 逆转录酶 核糖核酸酶H 分子对接
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HIV-1假病毒应用的优势与弊端 被引量：2
3
作者 张林才 侯宗婕 +6 位作者 王越 姜宇 王杰 李飞鸿 许亚宁 谭继英 乔瑞娟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1187-1192,共6页
HIV-1假病毒是携带一种外源性病毒包膜且仅能复制一代的病毒颗粒,其膜蛋白易于改造与检测,生物学过程易于量化、安全性高,不需要在BSL-3实验室进行研究,常用于研究HIV-1调节基因和功能、评估中和抗体、筛选抗病毒药物和疫苗以及HIV-1耐... HIV-1假病毒是携带一种外源性病毒包膜且仅能复制一代的病毒颗粒,其膜蛋白易于改造与检测,生物学过程易于量化、安全性高,不需要在BSL-3实验室进行研究,常用于研究HIV-1调节基因和功能、评估中和抗体、筛选抗病毒药物和疫苗以及HIV-1耐药性检测等。但HIV-1假病毒与野生型病毒之间存在必然的差异,在构建和表达过程中,HIV-1假病毒会存在复杂生物背景、质粒和转染试剂、细胞培养条件、产量和检测不均一等弊端,因此,有必要对HIV-1假病毒应用优势和弊端进行全面综述。 展开更多
关键词 hiv-1假病毒 优势 弊端 职业暴露
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HIV-1流行株囊膜假病毒系统的构建及广谱中和抗体中和效价的测定
4
作者 高阳 江昊 +10 位作者 王茂林 王永腾 王涛 田昊 马妍 吕启航 谢婷雨 孙瑜 张晓龙 孙健红 顾潮江 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1314-1325,共12页
人类免疫缺陷病毒主要感染人CD4+T细胞与单核-巨噬细胞,造成高致命性的免疫系统衰竭。近年来,抗HIV-1的广谱中和抗体被用于HIV-1感染的阻断和临床免疫治疗效果显著。然而,针对HIV-1抗体中和活性评价假病毒谱系仍有待补充,本研究旨在构... 人类免疫缺陷病毒主要感染人CD4+T细胞与单核-巨噬细胞,造成高致命性的免疫系统衰竭。近年来,抗HIV-1的广谱中和抗体被用于HIV-1感染的阻断和临床免疫治疗效果显著。然而,针对HIV-1抗体中和活性评价假病毒谱系仍有待补充,本研究旨在构建一种易于量化,生物安全性高的HIV-1流行毒株假病毒谱系,用于定量HIV-1中和抗体抗病毒活力。研究从10种亚型中选取了24株代表性HIV-1国内外流行毒株,构建囊膜表达质粒并与囊膜缺失骨架质粒pNL4-3-copGFP-ΔENV共转染制备慢病毒。通过定量p24抗原和测定TCID50分别获得病毒物理和活性滴度。以本实验室表达、纯化的HIV广谱中和抗体VRC01、3BNC117和N6经多梯度稀释后,分别与200 TCID50的假病毒孵育后,感染敏感指示细胞TZM-bl。随后通过测定荧光素酶活性定量假病毒的感染水平并计算出抗体的中和活性。结果表明:三种广谱中和抗体均能中和24种假病毒并计算获得了IC50。本研究成功建立了24种假病毒,可为HIV的抗体筛选功能验证和疫苗免疫效果提供中和活性评价平台。 展开更多
关键词 hiv-l假病毒 TZM-bl TCID50 广谱中和抗体
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HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞实验研究 被引量：1
5
作者 朱娜 刘雪丽 +6 位作者 仇妮 张洁婷 吴诗品 李体远 郭焱 李昌 金宁一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1441-1446,共6页
目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的HIV-1假病毒;通过HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞(immatural dendritic cell,iDC)实验探讨病毒与细胞的相互作用。方法:利用慢病毒包装系统构建携带E... 目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的HIV-1假病毒;通过HIV-1假病毒感染未成熟树突状细胞(immatural dendritic cell,iDC)实验探讨病毒与细胞的相互作用。方法:利用慢病毒包装系统构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒,通过RT-PCR扩增HIV-1假病毒中的EGFP基因;HIV-1假病毒感染iDC,对HIV-1假病毒感染iDC后的基因组整合和转录水平进行检测,观察被感染iDC中EGFP基因的表达。结果:构建的HIV-1假病毒通过RT-PCR结果显示扩增得到EGFP基因;HIV-1假病毒感染iDC后,在基因组整合和转录水平检测中都扩增得到了EGFP基因,荧光显微镜观察被HIV-1假病毒感染的iDC,观察到iDC表达绿色荧光蛋白。结论:成功构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒;HIV-1假病毒可以感染iDC,并将其遗传物质整合到iDC基因组中,并经过转录和翻译使iDC表达EGFP。 展开更多
关键词 hiv-1假病毒 未成熟树突状细胞 感染实验
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利用报告基因比较悬浮细胞与贴壁细胞对HIV-1假病毒感染效率的差异
6
作者 苏艳 苏玲玲 +1 位作者 殷涛 张宝江 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期921-926,共6页
【目的】研究用人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)-1假病毒感染带有β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)报告基因和HIV受体CD4+CCR5+的Tzmbl细胞,分析悬浮状态与贴壁状态对HIV-1假病毒感染Tzmbl细胞的影响,为进一... 【目的】研究用人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)-1假病毒感染带有β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)报告基因和HIV受体CD4+CCR5+的Tzmbl细胞,分析悬浮状态与贴壁状态对HIV-1假病毒感染Tzmbl细胞的影响,为进一步进行HIV生物学研究与中和抗体实验室评价提供实验基础。【方法】通过将pNL43 R-E-与编码HIV膜蛋白的质粒共转染293T细胞,收集上清,获得HIV假病毒。该假病毒感染悬浮的和贴壁的Tzmbl细胞后可表达β-gal报告蛋白,通过X-gal染色和仪器分析可测定表达β-gal报告基因的细胞数与细胞感染率。【结果】HIV假病毒感染悬浮细胞的效率高于其对贴壁的Tzmbl细胞感染的效率,且细胞的感染率的改变与病毒的型相关。【结论】该研究结果可为进一步利用具有单轮感染活性的HIV假病毒进行生物研究和中和抗体实验提供研究方法。 展开更多
关键词 hiv-1假病毒 悬浮细胞 贴壁细胞 报告基因 细胞感染
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