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Houttuynia cordata polysaccharide alleviated intestinal injury and modulated intestinal microbiota in H1N1 virus infected mice 被引量:27
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作者 CHEN Mei-Yu LI Hong +5 位作者 LU Xiao-Xiao LING Li-Jun WENG Hong-Bo SUN Wei CHEN Dao-Feng ZHANG Yun-Yi 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2019年第3期187-197,共11页
Houttuynia cordata polysaccharide(HCP) is extracted from Houttuynia cordata, a key traditional Chinese medicine. The study was to investigate the effects of HCP on intestinal barrier and microbiota in H1N1 virus infec... Houttuynia cordata polysaccharide(HCP) is extracted from Houttuynia cordata, a key traditional Chinese medicine. The study was to investigate the effects of HCP on intestinal barrier and microbiota in H1N1 virus infected mice. Mice were infected with H1N1 virus and orally administrated HCP at a dosage of 40 mg×kg^(–1)×d^(–1). H1N1 infection caused pulmonary and intestinal injury and gut microbiota imbalance. HCP significantly suppressed the expression of hypoxia inducible factor-1α and decreased mucosubstances in goblet cells, but restored the level of zonula occludens-1 in intestine. HCP also reversed the composition change of intestinal microbiota caused by H1N1 infection, with significantly reduced relative abundances of Vibrio and Bacillus, the pathogenic bacterial genera. Furthermore, HCP rebalanced the gut microbiota and restored the intestinal homeostasis to some degree. The inhibition of inflammation was associated with the reduced level of Toll-like receptors and interleukin-1β in intestine, as well as the increased production of interleukin-10. Oral administration of HCP alleviated lung injury and intestinal dysfunction caused by H1N1 infection. HCP may gain systemic treatment by local acting on intestine and microbiota. This study proved the high-value application of HCP. 展开更多
关键词 H1N1 influenza virus Houttuynia cordata INFLAMMATION Intestinal Barrier MICROBIOTA POLYSACCHARIDE
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猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法的建立 被引量:23
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作者 杨焕良 乔传玲 +3 位作者 陈艳 辛晓光 李一经 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期714-718,共5页
对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重... 对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重PCR特异性引物,建立了猪流感H1N1、H1N2和H3N2亚型病毒多重RT-PCR诊断方法。采用该方法对H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒标准参考株进行RT-PCR检测,结果均呈阳性,对扩增得到的片段进行序列测定和BLAST比较,表明为目的基因片段。其它几种常见猪病病毒和其它亚型猪流感病毒的RT-PCR扩增结果都呈阴性。对107EID50/0.1mL病毒进行稀释,提取RNA进行敏感性试验,RT-PCR最少可检测到102EID50的病毒量核酸。对40份阳性临床样品的检测结果是H1N1、H1N2和H3N2亚型分别为16份、1份和20份,其它3份样品同时含有H1N1和H3N2亚型猪流感病毒,和鸡胚分离病毒结果100%一致。试验证明建立的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法是一种特异敏感的诊断方法,可用于临床样品的早期快速诊断和分型。 展开更多
关键词 猪流感 病毒 hin1 hin2 H3N2 多重RT-PCR
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八例甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床特征分析 被引量:15
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作者 杨揆 郑龙 +2 位作者 王明明 吴运福 宋立强 《实用心脑肺血管病杂志》 2018年第9期82-85,共4页
目的分析8例甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床特征,为临床早期识别及救治甲型H1N1流感病毒性肺炎提供参考。方法选取2017年11月—2018年3月空军军医大学西京医院呼吸重症监护室(RICU)收治的甲型H1N1流感病毒性肺炎患者8例,回顾性分析... 目的分析8例甲型H1N1流感病毒性肺炎患者的临床特征,为临床早期识别及救治甲型H1N1流感病毒性肺炎提供参考。方法选取2017年11月—2018年3月空军军医大学西京医院呼吸重症监护室(RICU)收治的甲型H1N1流感病毒性肺炎患者8例,回顾性分析其临床症状及体征、实验室检查指标、胸部CT检查结果、治疗及临床转归。结果 (1)临床症状及体征:8例患者均有发热、咳嗽,全身疲乏、气促7例,咳痰、寒战5例,双肺下部闻及细湿啰音4例,咽痛2例,肺部闻及哮鸣音2例,胸痛1例;呼吸频率18~26次/min(中位数21次/min)。(2)实验室检查指标:8例患者中性粒细胞分数、降钙素原均升高,CD_4^+淋巴细胞计数均降低,淋巴细胞计数降低7例,乳酸脱氢酶升高6例,CD_8^+淋巴细胞计数降低5例,外周血白细胞计数、丙氨酸氨基转移酶、Th/Tr细胞比例升高4例,天冬氨酸氨基转移酶、肌红蛋白升高3例,血小板计数轻度升高2例,肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白I升高2例,肌酐升高1例;支气管肺泡灌洗液培养结果:近平滑假丝酵母菌1例,烟曲霉菌1例。(3)胸部CT检查结果:7例患者发现双肺多发磨玻璃样或线状、网状等间质性阴影,1例患者发现右肺中、下叶实变影并伴有磨玻璃影,1例患者发现双侧胸腔积液。(4)8例患者院内外主要治疗方案包括防治感染、抗病毒治疗、呼吸机辅助呼吸、糖皮质激素治疗、抗真菌治疗等。(5)临床转归:6例患者经治疗后病情好转,1例患者自动出院,1例患者转回当地治疗。结论甲型H1N1流感病毒性肺炎具有起病急、进展快、免疫功能低下、预后较差等特点,早期正确诊断、准确评估肺部病灶并及时合理地采用药物干预有利于阻止甲型H1N1流感进展为病毒性肺炎、控制病毒性肺炎进展、减少继发感染。 展开更多
关键词 流感病毒A型 hin1亚型 肺炎 症状和体征 治疗结果
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单管多重荧光定量RT-PCR方法鉴别新甲型H1N1及甲型和乙型流行性感冒病毒 被引量:6
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作者 张弘 何永强 +2 位作者 张严峻 王真 李榛 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期273-276,共4页
目的建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒(简称流感)病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法2010年10月至2011年4月,采集流感样患者咽拭子样本213份。分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病... 目的建立和评价鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流行性感冒(简称流感)病毒的单管多重荧光定量RT-PCR方法。方法2010年10月至2011年4月,采集流感样患者咽拭子样本213份。分别选用新甲型H1N1流感病毒HA基因、甲型流感病毒M基因和乙型流感病毒NP基因中的152、128和107bp片段作为荧光定量PCR检测的靶片段,设计特异性引物和不同发光基团标记的TaqMan探针,采用体外转录构建标准品,绘制标准曲线,评价检测方法的重复性、特异度和灵敏度,并对213份流感样患者咽拭子样本进行检测及测序验证。结果3种病毒对应的标准曲线分别为:新甲型H1N1流感病毒:Y=-3.461gX+46.985;甲型流感病毒:Y=-3.491gX+37.709;乙型流感病毒:Y=-3.51lgX+38.889,Y为Ct值,lgX为病毒RNA拷贝数的对数值。质粒标准曲线的方差系数为0.998,灵敏度达到每个反应10^2拷贝/μl,特异度强。213份样本中检出新甲型H1N1流感病毒核酸39份(18.3%),甲型流感病毒核酸阳性63份(29.6%),乙型流感病毒核酸阳性23份(10.8%),阳性样品经过测序验证。结论为鉴别新甲型H1N1、甲型和乙型流感病毒建立的单管多重荧光定量RT-PCR方法快速、特异且灵敏。 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链反应 流感病毒A型 hin1亚型 流感病毒A型 流感病毒B型
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实时荧光反转录聚合酶链式反应检测甲型H1N1流感病毒RNA 被引量:4
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作者 王晓东 王然 +1 位作者 李凤焕 陈兆拮 《检验医学与临床》 CAS 2017年第A01期57-59,共3页
目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应(real-time FQ RT-PCR)检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第... 目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应(real-time FQ RT-PCR)检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第3、5、7天后甲型H1N1流感患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性阴转率分别为20.51%、66.67%和91.02%,鼻、咽拭子标本检测H1N1-RNA有差异(P〈0.01),血浆H1N1-RNA检出1例阳性.结论 real-time FQ RT-PCRneng能快速准确检测甲型H1N1流感病毒核酸,有利于早期治疗和疫情控制. 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 反转录 流感病毒A型 hin1亚型 抗原 核酸
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清透邪热方对甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达的影响 被引量:4
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作者 冯丽谦 杨丽丽 +2 位作者 李明真 孙雨 刘涛 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期289-294,共6页
目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子... 目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-6(IL-6)表达,Toll样受体7(TLR7)及其下游髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果清透邪热方能够抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TNF-α、IP-10、IL-6的表达;其中清透邪热方0.024 25mg/mL组降低H1N1病毒感染组TNF-α、IL-6显著(P<0.01);清透邪热方0.097mg/mL组降低IP-10显著(P<0.01)。清透邪热方能够抑制H1N1流感病毒感染后Ana-1细胞后TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高;其中清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7mRNA、MyD88mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.024 25mg/mL组抑制H1N1病毒感染组NF-κB mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7蛋白表达升高显著(P<0.01),清透邪热方0.388mg/mL组抑制H1N1病毒感染组MyD88蛋白、NF-κB蛋白表达显著(P<0.01)。结论清透邪热方通过抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高,减少TNF-α、IP-10和IL-6表达,起到抗病毒作用。 展开更多
关键词 清透邪热方 甲型H1N1流感病毒 小鼠Ana-1巨噬细胞 TLR-7/MyD88/NF-κB通路
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2013-2020年潍坊市A(H1N1)pdm09流感病毒血凝素基因特征分析
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作者 田蒙蒙 刘德辉 +5 位作者 胡林 陈莹莹 李东英 张媛媛 刘淑慧 聂清 《预防医学论坛》 2024年第6期411-415,共5页
目的分析2013-2020年山东省潍坊市A(H1N1)pdm09流感病毒血凝素(HA)基因遗传进化特征,了解潍坊市A(H1N1)pdm09亚型变异情况,为及早发现新变异株以及精准防控提供科学依据。方法收集2013-2020监测年度山东省潍坊市A(H1N1)pdm09流感病毒阳... 目的分析2013-2020年山东省潍坊市A(H1N1)pdm09流感病毒血凝素(HA)基因遗传进化特征,了解潍坊市A(H1N1)pdm09亚型变异情况,为及早发现新变异株以及精准防控提供科学依据。方法收集2013-2020监测年度山东省潍坊市A(H1N1)pdm09流感病毒阳性样本,进行病毒分离,于阳性毒株中按年度共挑选18株流感毒株,采用二代测序方法获得HA基因序列信息后,使用RAxML软件,采用最大似然法(ML)构建系统进化树,使用BioEdit软件分析氨基酸位点变异情况,使用NetNGlyc 1.0 Server在线软件进行HA糖基化位点分析,使用datamonkey在线软件进行选择性压力分析,选用模型为单似然祖先计数(SLAC)模型、固定效应似然(FEL)模型。结果潍坊市18株A(H1N1)pdm09亚型分离株HA基因分属于6B、6B.1、6B.2等分支,大部分毒株(17/18)与对应年份疫苗株分属相同分支,且与对应年份疫苗株相比,HA基因序列的核苷酸同源性均>97.3%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白有12~22个氨基酸突变不等,且均发生了位于抗原决定簇的突变,包括Sa区L161I、S162N、K163Q、S164T位,Sb区S185T、T185I位,Ca区H138Y、S203T位及Cb区S74R位,83.3%病毒发生了两个及以上抗原决定性突变;发现位于受体结合部位220环的Q223R突变及受体结合部位附近的S183P和I216T突变;自2016年开始潍坊分离株的糖基化位点改变较为频繁,包括11NSTD缺失、162NQSY增加,变异糖基化位点162NQTY增加及162NQTY缺失。选择性压力分析显示,dN/dS值分别为0.65与0.279,均未发现正向选择性压力位点。结论2013-2020年山东省潍坊市A(H1N1)pdm09流感病毒HA基因总体与当年疫苗株比较接近,但HA基因及其编码氨基酸仍存在持续变异,需加强监测。 展开更多
关键词 甲型H1N1病毒 流感病毒 HA基因 基因进化 氨基酸变异 选择性压力
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不同时期H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的特征比较 被引量:3
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作者 谭福燕 乔乔 +3 位作者 王敏 熊红叶 余克花 刘金辉 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2016年第5期33-39,共7页
目的 比较2007—2014年分离的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白与分离于1934年的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的差异性,以了解近几年流行的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的变异特征。方法从Genebank的基因数据库中获取16株H1N1甲型流感病... 目的 比较2007—2014年分离的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白与分离于1934年的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的差异性,以了解近几年流行的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的变异特征。方法从Genebank的基因数据库中获取16株H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的核苷酸和氨基酸序列,采用在线软件SignalP4.1预测信号肽,运用Clustal X,Bioedit等国际通用软件进行氨基酸和核苷酸的序列比对,计算核苷酸及氨基酸的同源性。在线软件Antheprot分析二级结构。结果 H1血凝素蛋白编码框架长约1701bp,编码含566个氨基酸组成的多肽。16株H1N1甲型流感病毒H1血凝素氨基酸同源性为92.4%~99.8%,核苷酸同源性为91.8%~99.6%。H1血凝素蛋白aa1-aa17区域为潜在信号肽,血凝素蛋白A1和A2裂解序列为位于aa324-aa330序列IQSR↓GLF。H1血凝素蛋白富含潜在α螺旋(25%~32%)、β折叠(27%~28%)和卷曲结构(23%~26%)等二级结构。2007—2014年的15株病毒的血凝素蛋白A1高变区位于羧基端aa278-aa321,有11个位点变异,变异率高达25%。参与二硫键形成的10个半胱氨酸位点未发生变异,3个受体结合区的氨基酸序列(PKTS、VLVLWAIHH和SRYSKKFK)比较保守,有2个序列出现毒力相关位点D222G突变。结论 与1934年的H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白比较,2007—2014年间分离H1N1甲型流感病毒H1血凝素蛋白的重要功能结构域的序列仍保守稳定,但在某些位点出现较高频率的替代变异。 展开更多
关键词 H1N1甲型流感病毒 血凝素蛋白 生物信息学 突变
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广州地区无偿献血人群中HIN1和H3N2流感病毒中和抗体的分布及水平
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作者 王溪 王敏 +6 位作者 单志刚 张晓敏 陈锦艳 郑优荣 付涌水 张伟东 戎霞 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2016年第3期216-220,共5页
目的探讨H1N1和H3N2流感病毒中和抗体在广州地区无偿献血人群中的分布及水平,为研究广州地区流感流行病学特征提供参考。方法于2015年10~11月,采用年龄分层随机抽样法选择广州血液中心无偿献血的498例健康献血者为研究对象。按年龄... 目的探讨H1N1和H3N2流感病毒中和抗体在广州地区无偿献血人群中的分布及水平,为研究广州地区流感流行病学特征提供参考。方法于2015年10~11月,采用年龄分层随机抽样法选择广州血液中心无偿献血的498例健康献血者为研究对象。按年龄将其分为18~20岁组(n=150)、21~30岁组(n=210)、31~60岁组(n=138)。采用微量病毒中和实验法测定献血者血浆中H1N1和H3N2流感病毒中和抗体滴度,并分别对不同性别及年龄段H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率及滴度进行统计学分析。结果498例健康献血者中,H1N1流感病毒中和抗体阳性率为3.6%(18/480);H3N2流感病毒中和抗体阳性率为4.6%(23/498),2种流感病毒中和抗体阳性率比较,差异无统计学意义(x^2=0.636,P=0.425)。156例男性献血者中,H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率分别为3.8%(6/156)和4.5%(7/156);342例女性献血者中H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性的率分别为3.2%(11/342)和4.4%(15/342)。不同性别献血者H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率比较,差异均无统计学意义(x^2=0.129、0.003,P〉0.05)。18~20岁组、21~30岁组和31~60岁组献血者H1N1流感病毒中和抗体阳性率分别为4.0%、5.2%和0.7%;H3N2流感病毒中和抗体阳性率分别为6.0%、5.2%和2.2%。不同年龄组献血者H1N1和H3N2流感病毒中和抗体阳性率比较,差异均无统计学意义(x^2=4.961、2.705,P〉0.05)。18-20岁组、21~30岁组和31~60岁献血者H1N1流感病毒中和抗体几何平均滴度(GMT)分别为1:1.38、1:1.48和1:1.05,平均为1:1.32;H3N2流感病毒中和抗体GMT分别为1:1.62、1:1.51和1:1.19,平均为1:1.44。3组献血者H1NI和H3N2流感病毒中和抗体滴度比较,差异均无统计学意义(x^2=4.887、2.702,P〉0.05� 展开更多
关键词 流感 流感病毒A型 H1N1亚型 流感病毒A型 H3N2亚型 献血者 抗体 中和
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The S190R mutation in the hemagglutinin protein of pandemic H1N1 2009 influenza virus increased its pathogenicity in mice 被引量:1
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作者 Yongkun Chen Tian Bai +13 位作者 Wenfei Zhu Rongbao Gao Zhihong Deng Yi Shi Shumei Zou Yiwei Huang Xiyan Li Fangcai Li Zhaomin Feng Tao Chen Jing Yang Dayan Wang Lidong Gao Yuelong Shu 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2018年第7期836-843,共8页
Human influenza viruses preferentially bind to sialic acid-α2,6-galactose (SAα2,6Gal) receptors, which are predominant in human upper respiratory epithelia, whereas avian influenza viruses preferentially bind to SA... Human influenza viruses preferentially bind to sialic acid-α2,6-galactose (SAα2,6Gal) receptors, which are predominant in human upper respiratory epithelia, whereas avian influenza viruses preferentially bind to SAα2,3Gal receptors. However, variants with amino acid substitutions around the receptor-binding sites of the hemagglutinin (HA) protein can be selected after several passages of human influenza viruses from patients’ respiratory samples in the allantoic cavities of embryonated chicken eggs. In this study, we detected an egg-adapted HA S190R mutation in the pandemic H1N1 virus 2009 (pdmH1N1), and evaluated the effects of this mutation on receptor binding affinity and pathogenicity in mice. Our results revealed that residue 190 is located within the pocket structure of the receptor binding site. The single mutation to arginine at position 190 slightly increased the binding affinity of the virus to the avian receptor and decreased its binding to the long human α2,6-linked sialic acid receptor. Our study demonstrated that the S190R mutation resulted in earlier death and higher weight loss in mice compared with the wild-type virus. Higher viral titers at 1 dpi (days post infection) and diffuse damage at 4 dpi were observed in the lung tissues of mice infected with the mutant virus. 展开更多
关键词 pandemic hin1 2009 influenza virus egg adaptation HA mutation receptor binding domain PATHOGENICITY MICE
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PR8F/NS1不同位点突变株对小鼠致病性的比较研究
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作者 崔卓栋 柴丹 +7 位作者 解长占 溫树波 张萍 朱羿龙 刘云霞 李一权 田明尧 金宁一 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期6-12,共7页
为了探索NS1不同位点突变对流感病毒毒力的影响以及NS1毒力相关位点的作用机制。分析流感病毒NS1蛋白的毒力相关关键基因区段和关键位点,以实验室保存的H1N1亚型流感病毒PR8F为模板,对其NS1基因的第42、81、149位氨基酸分别进行定点突... 为了探索NS1不同位点突变对流感病毒毒力的影响以及NS1毒力相关位点的作用机制。分析流感病毒NS1蛋白的毒力相关关键基因区段和关键位点,以实验室保存的H1N1亚型流感病毒PR8F为模板,对其NS1基因的第42、81、149位氨基酸分别进行定点突变。利用反向遗传操作技术,成功拯救出突变毒株PR8F-42、PR8F-81、PR8F-149。将获救病毒接种SPF鸡胚,连续传代5代,至病毒能够稳定扩增后,通过血凝效价分析病毒复制效率。并将获救病毒与PR8F均以106 TCID50/100μL感染BALB/c小鼠,观察各组小鼠临床表现、体重变化及存活率。剖检攻毒后死亡小鼠,观察病理特征,制作肺组织病理切片。并提取小鼠肺脏RNA,通过qPCR检测各组小鼠肺脏的病毒载量。结果表明,PR8F的NS1蛋白第42位氨基酸由丝氨酸(Ser)改变为脯氨酸(Pro)对小鼠的致病性无明显改变。第81位、149位氨基酸突变则都能减弱突变株对小鼠的致病性,进而为研究NS1毒力相关位点的作用机制提供平台。 展开更多
关键词 H1N1亚型流感病毒 定点突变 NS1蛋白 实时荧光定量PCR 致病性
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表达甲型H1N1流感病毒血凝素抗原的DNA疫苗构建及其免疫原性评价
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作者 黄杨 王凤 +3 位作者 王倩 陈家丽 仇超 徐建青 《国际生物制品学杂志》 CAS 2011年第3期121-125,共5页
目的构建表达甲型HIN1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)抗原的DNA疫苗,并在小鼠中测试其免疫原性。方法运用人密码子优化技术合成甲型HIN1流感病毒HA序列,并转移至DNA疫苗载体,用Westernblotting检测其表达效率。采用单纯随机抽... 目的构建表达甲型HIN1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)抗原的DNA疫苗,并在小鼠中测试其免疫原性。方法运用人密码子优化技术合成甲型HIN1流感病毒HA序列,并转移至DNA疫苗载体,用Westernblotting检测其表达效率。采用单纯随机抽样方法把BALB/c小鼠分成DNA疫苗组和对照组。用DNA疫苗免疫疫苗组小鼠,免疫后取小鼠血清和脾细胞,分别用ELISA方法和酶联免疫斑点试验(ELISPOT)方法检测血清中的特异性抗体应答和脾细胞中的特异性T细胞应答,最后用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验和假病毒中和试验分别检测血清中的HI抗体和中和抗体应答。采用t检验作两组之间比较。结果所构建的DNA疫苗能够高效表达HA蛋白。免疫小鼠后能有效诱导T细胞免疫应答[429.0±113.4斑点形成细胞(spot—forming cell,SFC)/10。脾细胞],血清结合抗体滴度为16127.0±2698.0,HI抗体滴度为100.8±16.9,所有数据均显著高于载体对照(分别为t=3.863,P=0.0042;t=5.734,P=0.0002;t=6.018,P=0.0001)。DNA疫苗能活化产生高水平的针对同源H1N1毒株的中和抗体,但不能活化产生针对异源H1N1毒株的中和抗体。结论本研究构建的DNA疫苗有较好的免疫原性,并能诱导一定水平的保护性抗体产生。 展开更多
关键词 流感病毒A型 hin1亚型 疫苗 DNA 血凝素类 免疫原性 中和抗体
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2株H1N1猪流感病毒的遗传进化分析及其生物致病性 被引量:3
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作者 黄俊明 蔡孟楷 +4 位作者 李琪 卜德新 方博 冀池海 张桂红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1833-1839,共7页
对挑选的2株猪流感病毒A/swine/Guangdong/BRT15/2016(H1N1,BRT15)和A/swine/Guangdong/YJ4/2014(H1N1,YJ4)进行遗传进化分析与小鼠致病性试验。全基因组序列的遗传进化分析结果显示,BRT15与YJ4的HA、NA、M基因属于欧亚类禽猪源流... 对挑选的2株猪流感病毒A/swine/Guangdong/BRT15/2016(H1N1,BRT15)和A/swine/Guangdong/YJ4/2014(H1N1,YJ4)进行遗传进化分析与小鼠致病性试验。全基因组序列的遗传进化分析结果显示,BRT15与YJ4的HA、NA、M基因属于欧亚类禽猪源流感病毒分支,NP、PA、PB1和PB2基因属于pdm/09分支,NS基因属于北美三元重组分支。分别将BRT15与YJ4感染BALB/c小鼠进而比较分离株对小鼠的致病力,结果显示BRT15与YJ4毒株对小鼠具有不同的致病力,YJ4攻毒组小鼠死亡率高于BRT15组。肺部滴度检测显示,感染病毒后3d,YJ4组病毒滴度显著高于BRT15(P〈0.01),感染病毒后6d,YJ4和BRT15组病毒滴度无明显差异(P〉0.05);脑部滴度检测显示,感染病毒后3,6d,YJ4组和BRT15组病毒滴度均无明显差异(P〉0.05)。 展开更多
关键词 H1N1猪流感病毒 遗传进化分析 重组 致病性
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几种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法的验证 被引量:2
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作者 蔡翁 蔡颖 +3 位作者 魏锐 黄琦容 朱俊贤 周广彪 《口岸卫生控制》 2013年第6期28-33,共6页
目的比较和验证5种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法。方法首先使用美国NCBI网站的Primer-BLAST程序验证5种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法引物的理论特异性,然后使用猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型... 目的比较和验证5种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法。方法首先使用美国NCBI网站的Primer-BLAST程序验证5种甲型H1N1流感病毒SYBR Green I荧光RT-PCR检测方法引物的理论特异性,然后使用猪流感H1N1病毒核酸、2009年新甲型H1N1流感病毒核酸、H5N1禽流感核酸、能力验证样品作为试验样品验证方法的实验特异性。结果理论验证结果显示5对来源于文献的引物均适合于猪流感的检测,前3对可用于新型甲型H1N1流感的检测,但只限于个别来源的毒株,与预期略有差别。实验验证结果显示,方法1可正确检出甲型流感病毒;方法2可正确检出猪流感H1N1亚型病毒、新甲型H1N1流感病毒核酸;方法3检测新甲型H1N1流感核酸时未获得阳性结果;方法4可以正确检测出猪流感H1病毒核酸;方法5可以正确检测出猪流感H1N1病毒核酸,但检测新甲型H1N1流感核酸、禽流感H5N1核酸时也为阳性。结论方法1可用于猪甲型流感和新甲型H1N1流感病毒的初筛;方法2可用于猪流感H1N1亚型病毒和新甲型H1N1流感病毒核酸的初筛;方法3不适合新甲型H1N1流感病毒核酸的检测;方法4可用于猪流感H1亚型的检测;方法5不适合于猪流感H1N1亚型病毒的检测。采用SYBR Green I荧光RT-PCR方法检测甲型H1N1流感病毒核酸,特异性普遍不十分理想,只能用于初筛检测。 展开更多
关键词 SYBR Green I荧光RT—PCR 甲型H1N1流感病毒检测 验证
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流感病毒PR8F的拯救及其对BALB/c小鼠的致病力 被引量:1
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作者 崔卓栋 柴丹 +7 位作者 溫树波 解长占 孙文超 张萍 韩继成 曹亮 田明尧 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2321-2326,共6页
为了研究H1N1流感病毒对BALB/c小鼠的致病相关分子机制、传播机制以及开发新型疫苗,将本实验室保存的A/PR/8/34株的8个质粒参照Paulina构建的流感病毒8质粒突变系统做定点突变,利用反向遗传操作技术,成功拯救出H1N1流感病毒突变株PR8F。... 为了研究H1N1流感病毒对BALB/c小鼠的致病相关分子机制、传播机制以及开发新型疫苗,将本实验室保存的A/PR/8/34株的8个质粒参照Paulina构建的流感病毒8质粒突变系统做定点突变,利用反向遗传操作技术,成功拯救出H1N1流感病毒突变株PR8F。将PR8F株以106 TCID50/100μL的剂量滴鼻感染BALB/c小鼠,观察小鼠临床表现及体质量变化。解剖攻毒后不同时间小鼠并观察体内主要脏器的病理特征,提取各脏器RNA,通过实时荧光定量PCR方法,检测PR8F株在小鼠体内不同脏器中的病毒残留量和在BALB/c小鼠肺脏中的扩增效率。结果表明,H1N1流感病毒突变株PR8F感染小鼠4~7d后全部致死;PR8F株在小鼠体内各脏器中的病毒残留量有很大差异,肺脏中最多,且病毒在肺脏内呈指数形式扩增。本试验建立了H1N1流感病毒PR8F株对BALB/c小鼠的感染模型,为H1N1流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 H1N1流感病毒PR8F 定点突变 病毒拯救 实时荧光定量PCR
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2009H1N1流感病毒对A549细胞和BEAS-2B细胞作用的初步研究
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作者 王婷 俞慕华 +6 位作者 周海涛 王昕 吕星 吴春利 张仁利 程锦泉 房师松 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1080-1083,共4页
目的探求2009H1N1流感病毒对A549细胞和BEAS-2B细胞作用,为研究2009H1N1流感病毒的致病机理提供线索。方法不同来源(死亡、重症、普通病例分离)的2009H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒分别感染A549和BEAS-2B细胞12、24、48、72h后用流... 目的探求2009H1N1流感病毒对A549细胞和BEAS-2B细胞作用,为研究2009H1N1流感病毒的致病机理提供线索。方法不同来源(死亡、重症、普通病例分离)的2009H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒分别感染A549和BEAS-2B细胞12、24、48、72h后用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果感染A549细胞12和24h,普通病例分离的2009H1N1流感病毒组的细胞凋亡率最高(P<0.05),重症组的细胞凋亡率最低(P<0.05);48h和72h,死亡组细胞凋亡率最高(P<0.05)。感染BEAS-2B细胞12h,重症组细胞凋亡率最高(P<0.05);48h,死亡组和重症组细胞凋亡率高(P<0.05);72h,死亡组和普通组细胞凋亡率高(P<0.05)。4株病毒主要将A549细胞阻滞在S期,将BEAS-2B细胞阻滞在G0/G1期。结论在细胞凋亡和细胞周期的细胞学观察水平上2009H1N1流感病毒和季节性H1N1流感病毒之间存在差异,不同来源的2009H1N1流感病毒之间也存在差异。 展开更多
关键词 2009H1N1流感病毒 A549和BEAS-2B细胞 细胞凋亡 细胞周期
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