IL-2和IL-12联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究 被引量：5

1

作者 刘勇 胡大荣 +4 位作者 谭晓华 胡学玲 范公忍 韩聚强 吴忆贫 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1071-1074,共4页

目的　探讨瘤内注射共表达mIL 12和hIL 2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法　构建pDC5 11hIL2 mIL12、pDC5 11mIL 12、pDC5 11hIL 2真核表达质粒载体 ;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达 ;小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤瘤内注射... 目的　探讨瘤内注射共表达mIL 12和hIL 2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法　构建pDC5 11hIL2 mIL12、pDC5 11mIL 12、pDC5 11hIL 2真核表达质粒载体 ;ELISA方法检测各组质粒在真核细胞的表达 ;小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤瘤内注射各组质粒DNA后 ,检测不同时间血清中细胞因子浓度 ;观察各组小鼠存活时间 ,肿瘤大小变化 ;并检测各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞 (cytotoxicTlymphocyte ,CTL)活性。对各治疗组在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织学观察。结果　酶切鉴定各组质粒载体 ,均示构建成功 ,并能在真核细胞内高效表达相应细胞因子。瘤内注射各组质粒载体后 ,pDChIL2 mIL12组在不同时间表达的hIL2和mIL12分别与pDC5 11hIL2组 (F =71 11,P <0 0 1)、pDC5 11mIL12组 (F =3 0 70 ,P <0 0 5 )比较有显著性差异。mIL 12基因和hIL 2基因联合治疗组 ,肿瘤生长明显受抑制 ,疗效显著优于各单独治疗组和对照组 (P <0 0 5 ) ,并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。双基因联合治疗组 ,病灶内肿瘤细胞坏死明显 ,炎性细胞广泛浸润。结论　IL 12、IL 2基因治疗可抑制小鼠肝癌H2 2皮下移植瘤的生长 ,提高机体的抗肿瘤免疫应答 ,两者联合运用可产生协同效应。 展开更多

关键词 肝细胞癌 MIL-12 hil-2 免疫基因治疗 动物模型

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融合基因mGM-CSF/hIL-2在肝癌细胞瘤苗特异性免疫治疗中的作用 被引量：1

2

作者 杨威 郭成 +1 位作者 刘青光 姚英民 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第2期149-154,共6页

背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法。近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法。本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H2... 背景与目的:手术切除是治疗肝癌的主要方法,但对其术后的复发转移却无更好的办法。近年来,免疫学的发展使肝癌的治疗有了更好的治疗方法。本研究旨在通过制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌瘤苗,观察其特异性抗肿瘤免疫作用。方法:用含hIL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体,在体外转染H22细胞,制成疫苗,皮下接种小鼠,同时建立荷瘤小鼠模型。用51Cr释放法测定瘤苗免疫组、空载组、未转染组小鼠脾细胞对亲本H22细胞的杀伤活性。取血检测血清中IL-10、IFN-γ水平,观察小鼠存活期。结果:成功制备了含有hIL-2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗。免疫小鼠脾细胞体外对H22细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对S180细胞的9.1%,以及空载组和未转染组的13.6%和7.5%(P<0.05)。转基因瘤苗免疫组血清IFN-γ为(12.83±0.75)pg/mL,较空载瘤苗组的(7.83±0.65)pg/mL明显升高(P<0.01),血清IL-10[(4.58±0.34)pg/mL]较空载瘤苗组的(8.15±0.28)pg/mL明显降低(P<0.01)。同时,转基因瘤苗免疫组小鼠存活期为(40±6)d,较对照组[空载瘤苗组(30±3)d,未转染组(19±4)d]明显延长。结论:转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠存活期。 展开更多

关键词 免疫治疗 hil-2 mGM—CSF 瘤苗 肝肿瘤

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pIRES-PML-RARα-hIL-2重组质粒的构建和表达研究 被引量：3

3

作者 胡刚 李扬秋 +3 位作者 周羽竝 陈少华 杨力建 岑东芝 《癌症进展》 2008年第4期357-361,366,共6页

目的构建PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒。方法利用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增出PML-RARα融合点附近的部分基因片段,通过RT-PCR扩增Jurkat细胞中的hIL-2基因,并分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克... 目的构建PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒。方法利用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增出PML-RARα融合点附近的部分基因片段,通过RT-PCR扩增Jurkat细胞中的hIL-2基因,并分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点(MCS)A和B中,构建真核双表达质粒。利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性。将构建成功的重组质粒转染A549细胞,通过RT-PCR检测重组质粒在真核细胞中的转录情况,利用点杂交、ELISA检测目的蛋白的表达情况。结果NheⅠ/MluⅠ和SalⅠ/NotⅠ双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hIL-2基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将所构建的pIRES-PML- RARα-hIL-2质粒转染A549细胞后经RT-PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML- RARα和hIL-2基因能够在真核细胞中进行正常转录。经点杂交和ELISA检测显示重组质粒在真核细胞中可表达hIL-2蛋白。结论成功构建了pIRES-PML-RARα-hIL-2质粒,该重组质粒能够在真核细胞中正常转录并表达PML—RARα和hIL-2蛋白。 展开更多

关键词 PML-RARΑ hil-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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HIV-1中国流行株gag与hIL-2在重组痘苗病毒中的共表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究 被引量：1

4

作者 王莉馨 金宁一 +5 位作者 王宏伟 秦云龙 罗坤 葛涛 江文正 金洪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期297-300,共4页

目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行... 目的：将HIV-1中国流行株B亚型gag基因、gag和hIL-2基因在天坛株痘苗病毒中进行共表达，以期获得重组痘苗病毒，观察细胞因子的佐剂作用，与核酸疫苗混合免疫，评价免疫效果，为新型艾滋病疫苗研制开发打下基础。方法：将HIV-1中国流行株 gag基因、gag和hIL-2基因片段插入到 pJ38载体启动子下游，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒，SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫Balb/c小鼠，进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4+、CD8+ T细胞数目以及血清抗体的细胞免疫和体液免疫指标检测。结果：获得了重组痘苗病毒 vJ38gag和 vJ38gag-IL-2。与 vJ38-gag相比，vJ38gag-IL-2，具有更好的免疫原性，重组痘苗病毒免疫3次的效果好于重组病毒免疫2次，以2rVV-DNA混合免疫效果最好。结论：重组痘苗病毒vJ38gag和vJ38gag-IL-2能够表达外源蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫。细胞因子IL-2发挥了免疫佐剂的作用。 展开更多

关键词 HIV-1 中国流行株gag基因 hil-2 痘苗病毒 表达 DNA疫苗

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人IL-2复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定 被引量：2

5

作者 孙运祥 任丽君 +1 位作者 郭玉嵩 田长富 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2005年第4期260-263,共4页

目的构建含hIL-2的复制缺陷型重组腺病毒。方法将hIL-2DNA片段与载体pDNR-Dual-CMV融合,转化大肠杆菌DH5α。得到重组质粒(pDNR-Dual-hIL-2),经鉴定正确,将pDNR-Dual-hIL-2质粒与pLP-Adeno-x-CMV质粒重组得到重组载体pLP-Adeno-hIL-2,... 目的构建含hIL-2的复制缺陷型重组腺病毒。方法将hIL-2DNA片段与载体pDNR-Dual-CMV融合,转化大肠杆菌DH5α。得到重组质粒(pDNR-Dual-hIL-2),经鉴定正确,将pDNR-Dual-hIL-2质粒与pLP-Adeno-x-CMV质粒重组得到重组载体pLP-Adeno-hIL-2,再次转化大肠杆菌DH5α,挑取正确克隆,大量扩增,提取质粒。将此质粒经PacⅠ酶切后与LipofectamineTM2000转染HEK293细胞,产生含人IL-2的复制缺陷重组腺病毒(AdhIL-2)。结果pLP-Adeno-hIL-2重组载体经PCR、酶切鉴定结果与预期相符,所得重组病毒滴度达到5×107PFUml。结论成功构建了hIL-2的复制缺陷型重组腺病毒。 展开更多

关键词 白细胞介素2 腺病毒载体 同源重组 复制缺陷重组腺病毒 缺陷型重组腺病毒 人IL-2 鉴定结果 HEK293细胞 hil-2 重组质粒

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重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2的构建及病毒滴度测定

6

作者 匡志鹏 李安娜 +4 位作者 罗小玲 谢裕安 梁安民 尚俊英 吴继宁 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第5期814-817,共4页

目的:构建重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2,并测定病毒滴度。方法:从Jurkat细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-2基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglII和PmeI双酶切定向插入到pAdBM5-GFP腺病毒载体中。通过磷酸... 目的:构建重组腺病毒载体pAdBM5-GFP-hIL-2,并测定病毒滴度。方法:从Jurkat细胞中提取mRNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增hIL-2基因全编码区序列。将测序正确的片段用BglII和PmeI双酶切定向插入到pAdBM5-GFP腺病毒载体中。通过磷酸钙共沉淀法将线性化重组质粒和腺病毒骨架共转染HEK293A细胞,扩增纯化重组腺病毒,TCID50法测定重组腺病毒滴度。结果:成功构建出表达hIL-2基因的重组腺病毒载体(pAdBM5-GFP-hIL-2),获得了高滴度表达hIL-2基因的重组腺病毒。结论:重组腺病毒表达载体(pAdBM5-GFP-hIL-2)的成功构建及重组腺病毒的获得有利于进一步开展肝癌的转基因治疗研究。 展开更多

关键词 hil-2 重组腺病毒载体 病毒滴度 pAdBM5-GFP

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白细胞介素－2的基因克隆及其在啤酒酵母细胞中的表达 被引量：1

7

作者 张旭 黄秉仁 蔡良婉 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期274-280,共7页

用ＰＣＲ方法从白细胞介素素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ全序列中扩增成熟肽基因片段，与酵母中间载体ｐＳＫ４３ＳＢ融合后，重组于酵母游离型表达载体ＹＥｐＨｃ８，获得了高效表达，并对其糖基化进行了研究。

关键词 啤酒酵母 基因表达 白细胞介素 糖基化

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重组免疫毒素的纯化及鉴定 被引量：1

8

作者 刘树雷 何威 王儒鹏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期128-132,137,共6页

目的构建能特异性杀伤银屑病皮损中T淋巴细胞的重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1。方法应用PCR扩增目的基因片段hIL2-Luffin P1,然后克隆到表达载体pET32a(+)中,并对重组质粒进行酶切鉴定及基因测序。测序正确的重组质粒转化到表达菌BL21中... 目的构建能特异性杀伤银屑病皮损中T淋巴细胞的重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1。方法应用PCR扩增目的基因片段hIL2-Luffin P1,然后克隆到表达载体pET32a(+)中,并对重组质粒进行酶切鉴定及基因测序。测序正确的重组质粒转化到表达菌BL21中,进行诱导表达。诱导表达正确的蛋白,经过蛋白的纯化、复性、脱盐、肠激酶酶切、再纯化,最后用兔抗人IL-2多克隆抗体对目的蛋白进行Western blot鉴定。结果构建了pET32a(+)-hIL-2-Luffin P1表达载体。最后得到了表达正确的hIL2-Luffin P1蛋白。结论重组免疫毒素hIL-2-Luffin P1的成功构建为银屑病的治疗奠定了实验基础。 展开更多

关键词 免疫毒素 hil-2 LuffinP1 银屑病 靶向治疗

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PML-RARα系列重组质粒在BALB／c小鼠体内表达分析 被引量：1

9

作者 岑东芝 周羽竝 +3 位作者 胡刚 杨力建 陈少华 李扬秋 《癌症进展》 2008年第4期362-366,共5页

目的检测PML-RARα融合基因疫苗在小鼠体内的转录和表达。方法用成功构建的重组质粒(PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠,于第0周、2周、4周在双侧股四头肌各注射1次,分离注射部位肌肉,用RT-PCR检测目的基因在小鼠骨骼肌中的转录;应用免疫组织化... 目的检测PML-RARα融合基因疫苗在小鼠体内的转录和表达。方法用成功构建的重组质粒(PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠,于第0周、2周、4周在双侧股四头肌各注射1次,分离注射部位肌肉,用RT-PCR检测目的基因在小鼠骨骼肌中的转录;应用免疫组织化学染色法检测重组质粒蛋白表达。结果小鼠注射部位肌肉中检测到PML-RARα及hIL-2基因的转录,并可检测到hIL-2蛋白的表达。结论所构建的PML-RARα系列重组质粒可以在小鼠体内有效地表达基因产物,具有DNA疫苗的基本特性。 展开更多

关键词 PML-RARΑ hil-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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PML-RARα-hIL-2 DNA疫苗免疫BALB／c小鼠后胸腺初始T细胞水平变化 被引量：1

10

作者 周羽竝 岑东芝 +3 位作者 杨力建 陈少华 胡刚 李扬秋 《癌症进展》 2008年第4期371-375,共5页

目的了解PML-RARα-hIL-2基因疫苗免疫小鼠后胸腺初始(na(?)ve)T细胞变化情况。方法利用实时定量PCR检测小鼠胸腺组织DNA中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的水平,从而评价小鼠胸腺中na(?)ve T细胞含量。结果利用PML- RARα-hIL-2 DNA疫苗免... 目的了解PML-RARα-hIL-2基因疫苗免疫小鼠后胸腺初始(na(?)ve)T细胞变化情况。方法利用实时定量PCR检测小鼠胸腺组织DNA中T细胞受体删除DNA环(TRECs)的水平,从而评价小鼠胸腺中na(?)ve T细胞含量。结果利用PML- RARα-hIL-2 DNA疫苗免疫小鼠后胸腺中所含的TRECs拷贝数明显高于单个基因疫苗PML-RARα或hIL-2组及对照组。结论所构建的PML-RARα-hIL-2双表达质粒可诱导小鼠胸腺产生na(?)ve T细胞数量增加,可能与产生更强的细胞免疫应答有关。 展开更多

关键词 PML-RARΑ hil-2 TRECS DNA疫苗

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人白细胞介素29的cDNA克隆和序列分析 被引量：1

11

作者 施国民 张锦海 +1 位作者 李越希 吴玉章 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第10期34-37,共4页

目的 :克隆人白细胞介素 2 9的cDNA ,以进一步研究其结构与功能的关系。方法 :分离人的外周血单个核细胞 ,IMDM(含PHA和IL 2 )培养过夜后 ,Poly(I:C)诱导 2 4～ 48h ,收集细胞 ,Trizol法提取细胞总RNA ,RT PCR扩增出全长 60 3bp的IL 2 9... 目的 :克隆人白细胞介素 2 9的cDNA ,以进一步研究其结构与功能的关系。方法 :分离人的外周血单个核细胞 ,IMDM(含PHA和IL 2 )培养过夜后 ,Poly(I:C)诱导 2 4～ 48h ,收集细胞 ,Trizol法提取细胞总RNA ,RT PCR扩增出全长 60 3bp的IL 2 9cDNA ,将其与表达载体pPROEXTMHTa连接 ,转入大肠杆菌BL2 1 (DE3) ,建立了hIL 2 9的cDNA克隆。结果 :测序表明克隆的cDNA与Genebank报道的人IL 2 9cDNA序列完全一致。结论在国内成功获得hIL 2 展开更多

关键词 hil-2 人白细胞介素2 CDNA克隆 外周血单个核细胞 HT RT-PCR 诱导 结构与功能 表达载体 CDNA序列

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人白介素2体外诱生与检测方法的建立 被引量：1

12

作者 李桢 张文琳 +3 位作者 唐斯 程曦 程良红 张印则 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期1162-1164,共3页

本研究旨在建立流式磁珠免疫荧光方法,并通过Luminex 100多功能液相分析平台对细胞培养上清液中的IL-2进行定量分析。用密度梯度离心法从ACD抗凝人外周血中分离淋巴细胞,用植物凝集素刺激其分化,在48小时后收集培养上清液,于-20℃冻存... 本研究旨在建立流式磁珠免疫荧光方法,并通过Luminex 100多功能液相分析平台对细胞培养上清液中的IL-2进行定量分析。用密度梯度离心法从ACD抗凝人外周血中分离淋巴细胞,用植物凝集素刺激其分化,在48小时后收集培养上清液,于-20℃冻存待测。用Luminex 100多功能液相分析平台检测IL-2标准品以及样品的相关荧光单位值(RFU),通过标准曲线求出样本中IL-2浓度。结果表明:得出标准品系列的回归方程为Lg(RFU)=1.547+0.867LgC。方差分析显示F=301.7427,p<0.05(ν=6);回归系数t检验显示,t=17.3707(ν=6),p<0.05。结论:建立了人IL-2体外诱生和检测的方法。该方法所得标准曲线有统计学意义。细胞上清液中的IL-2含量(对数)与荧光强度(对数)之间有直线关系。 展开更多

关键词 白细胞介素2 LUMINEX 100 淋巴细胞 植物凝集素 IL-2检测

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分子佐剂hIL-2增强小鼠PFC和QHS的免疫效应

13

作者 陆东明 邵嘉会 《青海医学院学报》 CAS 2006年第1期15-16,共2页

目的探讨hIL-2对小鼠体液免疫的作用机制和应用价值。方法经SRBC腹腔免疫昆明种小鼠40只,随机等量分两组,实验组每只腹腔注射hIL-2量为1 ng/g,对照组注入等量N.S。5天后,两组小鼠眼球取血后颈椎离断处死取脾脏制备脾细胞悬液,用体外抗... 目的探讨hIL-2对小鼠体液免疫的作用机制和应用价值。方法经SRBC腹腔免疫昆明种小鼠40只,随机等量分两组,实验组每只腹腔注射hIL-2量为1 ng/g,对照组注入等量N.S。5天后,两组小鼠眼球取血后颈椎离断处死取脾脏制备脾细胞悬液,用体外抗体形成细胞实验(plaque form ingcell,PFC)和定量溶血分光光度测定法(Quantitative Hemolysis Spectrophotome-try,QHS),分别测取两组的抗体形成细胞率和QHS(495nm)OD值,经x±sD组间比较的t检验,观察有无差异性。结果实验组的PFC形成率和QHS的OD值均显著高于对照组(P<0.01)。结论hIL-2有增强小鼠PFC的形成率和特异性抗体的表达的作用,提示hIL-2作为分子佐剂在提高体液免疫应答的应用中有较高价值。* 展开更多

关键词 hil-2 PFC 0HS 体液免疫应答

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结核分枝杆菌HSP65-hIL-2融合基因稳定转染细胞系的建立

14

作者 王丽梅 徐志凯 +3 位作者 柏银兰 张薇 康健 师长宏 《科学技术与工程》 2009年第11期2899-2902,共4页

建立可稳定表达结核分枝杆菌HSP65-hIL-2融合蛋白的稳定转染P815细胞系。在阳离子脂质体作用下,将HSP65-hIL-2真核表达质粒转染与BALB/c遗传背景一致的P815细胞(H-2d)。G418筛选阳性克隆,RT-PCR和间接免疫荧光法检测目的蛋白的转录和表... 建立可稳定表达结核分枝杆菌HSP65-hIL-2融合蛋白的稳定转染P815细胞系。在阳离子脂质体作用下,将HSP65-hIL-2真核表达质粒转染与BALB/c遗传背景一致的P815细胞(H-2d)。G418筛选阳性克隆,RT-PCR和间接免疫荧光法检测目的蛋白的转录和表达。阳性克隆细胞经RT-PCR检测到HSP65-hIL-2融合基因特异性的mRNA表达;用鼠抗人的IL-2mAb进行间接免疫荧光检测,可在转染的P815细胞浆中观察到较强的绿色特异性荧光,而未转染细胞则为阴性。成功获得稳定表达HSP65-hIL-2融合蛋白的稳定转染细胞系,为其疫苗的CTL研究提供了合适的靶细胞。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 稳定转染 HSP65 hil-2

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PML-RARα245-hIL-2双基因表达载体的构建和表达研究

15

作者 胡刚 岑东芝 +3 位作者 杨力建 陈少华 周羽竝 李扬秋 《沈阳医学院学报》 2012年第2期69-72,共4页

目的:采用长度为245 bp的PML-RARα融合基因片段构建一种新的PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒。方法:利用RT-PCR从NB4细胞的RNA中扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp的基因片段,通过RT-PCR从Jurkat... 目的:采用长度为245 bp的PML-RARα融合基因片段构建一种新的PML-RARα融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒。方法:利用RT-PCR从NB4细胞的RNA中扩增出包含PML-RARα基因融合点的长度为245 bp的基因片段,通过RT-PCR从Jurkat细胞中扩增hIL-2基因,并将两基因片段分别克隆到pIRES质粒中,通过酶切和测序验证重组质粒的正确性。将重组质粒转染A549细胞,通过RT-PCR检测该质粒在真核细胞中的转录情况,利用点杂交和ELISA技术检测目的蛋白的表达。结果:Nhe I/Mlu I和Sal I/Not I双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα融合基因片段和hIL-2基因,测序结果证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将构建的pIRES-PML-RARα245-hIL-2质粒转染A549细胞后经RT-PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα和hIL-2基因能够在真核细胞中进行正常转录并翻译出相应蛋白。结论:成功构建了含有245 bp的PML-RARα基因与hIL-2基因的真核双表达载体,该载体能够在真核细胞中正常转录并翻译出PML-RARα和hIL-2蛋白,为利用DNA疫苗治疗急性早幼粒细胞白血病提供了更丰富的资料。 展开更多

关键词 PML-RARΑ融合基因 hil-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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逆转录病毒介导IL-2cDNA治疗小鼠淋巴瘤的研究 被引量：1

16

作者 鲁晓萱 曹荣月 +3 位作者 苏宁 张晓明 蒋清 单祥年 《南京铁道医学院学报》 2000年第1期1-4,共4页

目的 :研究人白细胞介素 2 (hIL 2 )转基因小鼠淋巴瘤体内成瘤性。方法 :体外将hIL 2基因转入小鼠淋巴瘤p3 88细胞。用PCR、RT PCR、dotblot法检测hIL 2基因在细胞内的整合及表达 ,四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法检测转导细胞hIL 2分泌。... 目的 :研究人白细胞介素 2 (hIL 2 )转基因小鼠淋巴瘤体内成瘤性。方法 :体外将hIL 2基因转入小鼠淋巴瘤p3 88细胞。用PCR、RT PCR、dotblot法检测hIL 2基因在细胞内的整合及表达 ,四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法检测转导细胞hIL 2分泌。体内试验将动物分为A9组、对照组和体内转染治疗组 3组。 17d后处死所有动物 ,观察肿瘤生长状况。结果 :hIL 2基因已成功地整合到小鼠p3 88细胞基因组内。p3 88/IL 2细胞分泌的hIL 2量为 3 7.4U·ml-1。A9组和体内转染治疗组动物肿瘤体积明显减小 ,与对照组肿瘤体积有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :hIL 2基因经体内或体外法转入p3 88/IL 展开更多

关键词 逆转录病毒载体 基因治疗 淋巴瘤 hil-2

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腺病毒介导hIL-2基因转染膀胱上皮的体内研究 被引量：1

17

作者 顾正勤 许传亮 +3 位作者 高旭 孙颖浩 李云 沈茜 《临床泌尿外科杂志》 2005年第11期695-696,699,共3页

目的:探讨腺病毒介导人IL-2基因转染鼠膀胱移行上皮细胞及其表达的可行性,为膀胱癌的免疫治疗提供实验依据。方法:通过膀胱灌注的方法将重组腺病毒AdhIL-2灌入大鼠膀胱内,分不同时间段获取大鼠膀胱黏膜组织,利用RT-PCR的方法检测hIL-2... 目的:探讨腺病毒介导人IL-2基因转染鼠膀胱移行上皮细胞及其表达的可行性,为膀胱癌的免疫治疗提供实验依据。方法:通过膀胱灌注的方法将重组腺病毒AdhIL-2灌入大鼠膀胱内,分不同时间段获取大鼠膀胱黏膜组织,利用RT-PCR的方法检测hIL-2基因在膀胱移行上皮细胞中的表达。结果:腺病毒介导hIL-2在膀胱移行上皮细胞中得到有效表达,基因表达持续时间达到7天。结论:腺病毒是一种有效介导基因的工具,hIL-2在膀胱上皮细胞中的持续表达为膀胱癌免疫治疗提供新的方法。 展开更多

关键词 腺病毒 hil-2 基因转染 膀胱

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PML-RARα-hIL-2 DNA疫苗诱导BALB／c小鼠的细胞和体液免疫应答 被引量：1

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作者 杨力建 岑东芝 +3 位作者 周羽竝 胡刚 陈少华 李扬秋 《癌症进展》 2008年第4期367-370,381,共5页

目的分析PML-RARα融合基因疫苗诱导小鼠特异体液和细胞免疫应答情况。方法用成功构建的重组质粒(pIRES-PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠后,分别利用ELISA法检测小鼠血清中INF-γ生成情况;LDH释放法检测小鼠脾细胞特异性CTL细胞针对APL细胞株... 目的分析PML-RARα融合基因疫苗诱导小鼠特异体液和细胞免疫应答情况。方法用成功构建的重组质粒(pIRES-PML-RARα-hIL-2)免疫小鼠后,分别利用ELISA法检测小鼠血清中INF-γ生成情况;LDH释放法检测小鼠脾细胞特异性CTL细胞针对APL细胞株NB4的杀伤率;用间接免疫荧光法检测血清中抗PML-RARα抗体。结果免疫后第7周时,小鼠血清中INF-γ含量、抗PML-RARα抗体及脾脏CTL细胞针对NB4的杀伤率均高于对照组。结论所构建的pIRES-PML-RARα-hIL-2重组质粒可诱导小鼠产生了特异性体液和细胞免疫应答。 展开更多

关键词 PML-RARΑ hil-2 急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗 细胞毒活性 抗体

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hIL-2/IFN-γ嵌合基因原核表达质粒的构建与表达

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作者 邵亚明 田泽维 +2 位作者 罗发兴 陈光明 杨富强 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期84-87,共4页

为构建hIL 2 /IFN γ 嵌合基因原核表达质粒 ,筛选其高效表达工程菌 ,设计特异性引物 ,PCR扩增目的基因并克隆至pPROEXHTb质粒NcoⅠ /HindⅢ位点 ,经双酶切及序列测定筛选阳性克隆 ,IPTG诱导工程菌后以SDS PAGE电泳鉴定目的蛋白的表达情... 为构建hIL 2 /IFN γ 嵌合基因原核表达质粒 ,筛选其高效表达工程菌 ,设计特异性引物 ,PCR扩增目的基因并克隆至pPROEXHTb质粒NcoⅠ /HindⅢ位点 ,经双酶切及序列测定筛选阳性克隆 ,IPTG诱导工程菌后以SDS PAGE电泳鉴定目的蛋白的表达情况 ,并测定其抗原性和生物学活性 ,结果成功构建了工程菌Top10F’[hIL 2 /IFN γ],经优化表达条件后 ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 30 % ,分子质量约为 34ku .ELISA和Western blot实验结果表明 ,目的蛋白能特异性结合抗IFN γ 抗体 ,呈阳性反应 ,生物学活性测定显示其IL 2和IFN γ 比活性分别为 1 7× 10 7U/mg与 3 2× 10 6 U/mg . 展开更多

关键词 白细胞介素-2 干扰素-1 嵌合基因 表达 大肠杆菌

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FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达

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作者 陈秋菊 王韵斐 +4 位作者 崔易虹 朱广琴 杨明明 宋宇轩 曹斌云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1396-1401,共6页

构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV ... 构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切序列连接EGFP基因,构建出乳腺特异性的双顺反子表达载体pFIENβ,并利用脂质体转染山羊乳腺上皮细胞,然后用RT-PCR技术和Western blot检测hIL-2基因与EG-FP基因的表达。重组质粒pFIENβ经酶切鉴定后表明构建成功,转染质粒PFIENβ和pEGFP-C1的细胞均观察到绿色荧光;从转染pFIENβ的乳腺上皮细胞中扩增出hIL-2基因和EGFP基因,而转染pEGFP-C1的细胞中只扩增出EGFP基因;经Western blot检测,转染pFIENβ的细胞中均表达了hIL-2和EGFP蛋白。结果表明山羊β-酪蛋白启动子能同时启动hIL-2基因和EGFP基因在山羊乳腺上皮细胞中的表达,并且利用FMDV 2A元件实现了hIL-2基因和EGFP基因的非融合型表达。 展开更多

关键词 人白细胞介素2 EGFP FMDV2A 双顺反子

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