分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍...分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍然保持着旺盛的代谢活动。结果表明:MOI对细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率有显著影响。随着MOI增加,细胞死亡速率增加,其代谢速率也普遍上升。同时,MOI增加能有效地提高病毒感染率和单位细胞病毒颗粒数扩增效率,但过高的MOI亦会降低病毒滴度扩增效率,从而影响病毒包装质量。展开更多
目的构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法通过聚合酶链式反应将实验室...目的构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果测序结果与之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。Western blotting结果显示,转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达。结论pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。展开更多
文摘分别在方瓶贴壁和转瓶悬浮二种培养模式下,考察了感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)对HEK293细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率的影响。通过实验发现,感染病毒后的细胞跟未感染病毒相比较,其细胞生长受到严重限制,但仍然保持着旺盛的代谢活动。结果表明:MOI对细胞感染病毒后的生长代谢和腺病毒扩增效率有显著影响。随着MOI增加,细胞死亡速率增加,其代谢速率也普遍上升。同时,MOI增加能有效地提高病毒感染率和单位细胞病毒颗粒数扩增效率,但过高的MOI亦会降低病毒滴度扩增效率,从而影响病毒包装质量。
文摘目的构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3(serum and glucocorticoid-induced protein kinase 3,SGK3)基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry,并观察和验证其在转染细胞HEK293中的表达。方法通过聚合酶链式反应将实验室保存的真核表达质粒pcDNA3.1-MYC-SGK3中目的基因SGK3与mCherry融合并扩增出来,然后定向克隆至pcDNA3.1-MYC质粒中,经限制性内切酶消化和测序证实后,通过脂质体法转染HEK293细胞,Western blotting法检测目的基因的蛋白表达情况。结果测序结果与之前预期结果相符,证实pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。Western blotting结果显示,转染pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry的HEK293细胞出现清晰的阳性反应条带,说明目的片段成功表达。结论pcDNA3.1-MYC-SGK3-mCherry真核表达载体构建成功。
